血小板抗原抗体检测课件

,*,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,Click to edit Master title style,*,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,Click to edit Master title style,*,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,Click to edit Master title style,血小板抗原抗体,广州医科大学附属第五医院输血科,血小板抗原抗体广州医科大学附属第五医院输血科,目录,血小板相关疾病,血小板抗原,血小板抗体,抗体检测及交叉配血,目录血小,血小板抗原,血小板抗原泛指存在于血小板膜的能够刺激机体产生抗体,并能与之结合的血小板膜蛋白质和糖分子,.,血小板相关抗原,:,红细胞血型抗原：,ABO、Lewis和P系统抗原,等,，,无,RH,抗原,白细胞抗原：,HLA,抗原,血小板特异性抗原（,human platelet antigen,，,HPA,）,血小板抗原血小板抗原泛指存在于血小板膜的能够刺激机体产生,血小板抗原,血型抗原：,ABO、Lewis和P系统抗原,等,，,无,RH,抗原,来源：血小板表面的,A,、,B,抗原来源主要有两个：大部分是血小板本身所固有（从巨核细胞分化而来）；小部分是从血浆吸附而来。如体外将,O,型血小板和,A,或,B,型血清温育，血小板就会带上,A,或,B,抗原。,不同个体间血小板膜,ABH,抗原量存在差异,;,同一个体的每一个血小板抗原量差别非常大，由此可以解释有些人输入,ABH,不相容血液后,一部分输入的血小板迅速被破坏,而另外的血小板其生命力不受影响,.,血小板抗原血型抗原：ABO、Lewis和P系统抗原等，无,血小板抗原,白细胞抗原：,HLA,抗原,血小板存具有,HLA-,类抗原类抗原，主要是,HLA-A,和,HLA-B,位点的抗原（少量表达的,HLA-C,抗原）。,HLA-,类分子为血小板的固有蛋白，少量从血浆中吸附。血小板,HLA,抗原的免疫原性比白细胞弱。,血小板抗原白细胞抗原：HLA抗原,血小板抗原,血小板特异性抗原（,human platelet antigen,，,HPA,）,主要位于人血小板膜的一大类抗原,称之为血小板特异性抗原,高频率抗原以,“,a,”,表示，低频率抗原以,“,b,”,表示,人血小板同种抗原（,HPA,）自,1959,年被发现以来，迄今已经检出,24,个抗原，其中,HPA-1,，,-2,，,-3,，,-4,，,-5,，,-6,-15,被血小板命名委员会（,PNC,）列入抗原系统，包含,14,个对偶抗原，而,HPA-7-14,，,-16,-17,因为对偶抗原未检出而未达到系统命名标准。,血小板抗原血小板特异性抗原（human platelet,血小板抗原,血小板抗原,血小板抗原,血小板抗原,血小板抗原,24,个抗原主要分布在糖蛋白,GPb,，,GPa,，,GPb,，,GPa,以及,CD109,上 ；,GPa,（,CD61,）携带,9,种,HPA,抗原，分别为,HPA-1,，,HPA-4,，,HPA-6bw,，,HPA-7bw,，,HPA-8bw,，,HPA-10bw,，,HPA-11bw,，,HPA-14bw,，,HPA-16bw,GPb,（,CD41,）是跨膜蛋白，细胞外,116 kD,的重链，通过二硫键与,22 kD,的轻链共价结合。,GPb,上携带,HPA-3,和,HPA-9bw,；,血小板抗原24个抗原主要分布在糖蛋白GPb，GPa，,血小板抗体,抗 体,分 类,疾 病,HLA / HPA,抗 体,其 它 抗 体,同 种,抗 体,格兰茨曼血小板功能不全病,抗,G,Pb/a,抗体,同 种 异,体 抗 体,新生儿同种异体免疫性血小板减少症,HPA1b(78%), HPA5b(19%),HPA-2,3,4(3%),HPA-15,HPA-9bw,Anti-CD36,血小板输注无效症,HLA-I,抗体,5080% 1725%(,日本人为,HPA-2b), HPA-15,anti-CD36,极少数为,ABO,抗体,血小板输血后紫癜,HPA-1a,HPA-1b,HPA-2b,HPA-3a,HPA-3b,HPA-15,anti-CD36,少数为抗,GPIa/IIa,抗体,被动同种异体免疫,性血小板减少症,HPA-1a,HPA-5b,移植相关同种异体,免疫性血小板减少症,HPA-1a,HPA-3,HPA-5b,自 身,抗 体,自发性血小板减少,症,多数位于,GP,b/a,GP,Ib/IX/V,，少数位于,GP,IV/V,和,GPIa/IIa,继发于母体自发性,血小板减少症,同上,药物依,赖性抗,体,奎宁,/,奎尼丁抗体,所致疾病,抗原位于,GP,b/a,和,GP,Ib/IX,肝素抗体所致疾病,抗原表位是,PF4,血小板抗体抗 体疾 病HLA / HPA 抗 体其 它,抗体检测及交叉配血,采取预防和治疗措施,避免流产、出血等,血小板相容性检测,抗原定型,抗体检测,建立血小板供者库,筛选基因型相容的供者,避免血小板抗体的产生,诊断血小板免疫性疾病,交叉配型,筛查血小板相容性供者,减少血小板输注无效,避免紫癜、出血和死亡,抗体检测及交叉配血采取预防和治疗措施血小板相容性检测抗原定,血小板抗原定型,血清学定型,即用已知特异性抗体检测血小板血型抗原,缺点：特异性抗体来源困难,-,人血清中血小板抗体通常为多特异性,-,单克隆抗体匮乏，目前国际上仅有,HPA-1a,单抗，,无其它,HPA,单抗。,基因定型,限制性片段长度多态性分析（,RFLP,）,序列特异性寡核苷酸聚合酶链反应,(PCR-SSO),序列特异性引物聚合酶链反应,(PCR-SSP),HPA-1 HPA-2 HPA-3 HPA-4 HPA-5 HPA-15,a b a b a b a b a b a b,阳性对照条带,等位基因条带,1bb 2ab 3bb 4aa 5aa 15aa,血小板抗原定型血清学定型HPA-1 HPA-2,血小板抗体检测 血清学,ELISA,法,(,酶联免疫试验,),血小板抗原单抗特异性固相化法,(MAIPA),固相血小板免疫血清学试验,(SPISA),简易致敏红细胞血小板血清学试验,(SEPSA),流式细胞仪,改良抗原俘获,(ELISA),免疫荧光试验,血小板抗体检测 血清学ELISA法(酶联免疫试验),简易致敏红细胞血小板血清学试验,SEPSA,血小板谱细胞,（三人份,O,型混合血小板）,反应板,（已包被血小板单抗）,血小板单层,阳性反应,阴性反应,患者血清,/,血浆,抗人,IgG,指示红细胞,（人,IgG,致敏红细胞）,50g,5min,离心,洗涤,3,次,50,l/,孔,洗涤,5,次,水浴,30min,阳性,阴性,50,l/,孔,各,50,l/,孔,200g,5min,离心,200g,5min,离心,简易致敏红细胞血小板血清学试验 SEPSA血小板谱细胞反应板,简易致敏红细胞血小板血清学试验,SEPSA,直接测定法 血小板表面结合血小板抗体的测定,间接测定法 血清内抗血小板抗体的测定,交叉配血试验 选择配合的血小板供体,质量控制阴阳性对照,简易致敏红细胞血小板血清学试验 SEPSA直接测定法,ELISA,法,(,酶联免疫试验,),单克隆抗体免疫固定血小板抗原方法（,MAIPA,）：该法先制备羊抗鼠,IgG,包被的多孔板，另外，将鼠抗人血小板糖蛋白单克隆抗体和带有抗体的血小板共同孵育，再将孵育后的复合物加入多孔板，孵育，洗涤，最后加入酶联羊抗人抗体和酶反应底物后显色，定量测定血小板抗体。,ELISA法(酶联免疫试验)单克隆抗体免疫固定血小板抗原方,血小板相关疾病,临床上由于血小板血型抗原引起的血小板减少症主要有,5,种：,血小板输注无效（,PTR,）,输血后紫癜（,PTP,）,新生儿同种免疫血小板减少症（,FMAIT/NAIT,）,被动免疫血小板减少症（,PAT,）,移植相关的同种免疫血小板减少症（,TAT),血小板相关疾病 临床上由于血小板血型抗原引起的血小板减少症主,血小板相关疾病,血小板免疫性疾病,血小板输注无效症,新生儿血小板减少症,输血后紫癜,自身免疫性血小板减少症,药物引起的血小板减少症,移植相关的血小板减少症,血小板抗原,同种异体抗原,HLA-I,HPA,ABH,同种抗原,GPb/a,CD36,自身抗原,GPb/a,GPb/,药物依赖性抗原,肝素、奎宁等,非特异性抗原,临床病症,淤点,淤斑,流产,（颅内）出血,死亡,血小板相关疾病血小板免疫性疾病血小板抗原临床病症,血小板相关疾病,-,血小板输注无效,(PTR,）,Platelet transfusion refractoriness, PTR:,患者接受充足治疗剂量（,2.5x10,11,个,/,次）的血小板输注后，血液循环中血小板计数未见有效提高，临床出血表现未见明显改善，处于血小板治疗不应状态。一般临床上认为,至少有,2,次及以上,输注血小板效果不佳才能做出,PTR,诊断。,1.,若输注后,1,小时,CCI 7500/L,12,小时,CCI 6000/L,24,小时,CCI 4500/L,连续,3,次，可判断为血小板无效输注,2.,血小板恢复（回收率）百分率（,PR%,）,若输注血小板,24,小时后，,PR%20%,，可判断为血小板无效输注,由,HLA,抗体引起,PTR,约占,80%,，其次为,HPA,或,ABO,抗体。,现由于临床广泛输注去白细胞的成分血治疗血液病，发病率已经大为下降,血小板相关疾病-血小板输注无效(PTR）Platelet t,血小板相关疾病,-,血小板输注无效,(PTR,）,非免疫学原因,(67.3%),发热,脾功能亢进,感染,药物作用,DIC,血小板的质量问题,免疫学原因,(17.5%),HLA,抗体,HPA,抗体,ABO,血型不合,血小板自身抗体,药物,预防,1.,白细胞过滤,2.,辐照,3. HLA,和,HPA,配型输注,血小板相关疾病-血小板输注无效(PTR）非免疫学原因(67.,血小板相关疾病,-,血小板输注无效,(PTR,）,Platelet transfusion refractoriness, PTR:,患者接受充足治疗剂量（,2.5x1011,个,/,次）的血小板输注后，血液循环中血小板计数未见有效提高，临床出血表现未见明显改善，处于血小板治疗不应状态。一般临床上认为,至少有,2,次及以上,输注血小板效果不佳才能做出,PTR,诊断。,1.,若输注后,1,小时,CCI 7500/L,12,小时,CCI 6000/L,24,小时,CCI 4500/L,连续,3,次，可判断为血小板无效输注,2.,血小板恢复（回收率）百分率（,PR%,）,若输注血小板,24,小时后，,PR%20%,，可判断为血小板无效输注,由,HLA,抗体引起,PTR,约占,80%,，其次为,HPA,或,ABO,抗体。,现由于临床广泛输注去白细胞的成分血治疗血液病，发病率已经大为下降,血小板相关疾病-血小板输注无效(PTR）Platelet t,血小板相关疾病,-,输血后紫癜,输血后血小板减少性紫癜(post-transfusion thrombocytopenic purpura，PTTP)，又称“输血后紫癜”, Post-transfusion purpura, PTP: 由于血小板输注后发生同种免疫反应所致，一般发病率低。,患者被输入不相容的血小板/全血或多次妊娠而产生血小板抗体，破坏输入的和自身血小板而导致急性和暂时性血小板减少。患者多见于（95%)有多次妊娠或输血史的老年女性。,血小板相关疾病- 输血后紫癜输血后血小板减少性紫癜(pos,血小板相关疾病,-,输血后紫癜,HPA-1a,是引起该病的主要抗原。我国绝大部分人为,HPA-1a,抗原阳性。,实验室检查：血小板计数降低、骨髓巨核细胞增生活跃、血清学检查血小板抗体存在但效价和病情无关。,本病输血小板无效，甚至有加重病情的危险，肾上腺皮质激素不能缩短病程，但是，有可能改善出血症状。,主要治疗措施为血浆置换或换血,，换血浆优于换全血。在输血后血小板显著减少和发生严重出血症状时，应立刻做血浆置换，一次交换,65%,85%,的血浆量，平均在,1,5,天后出血症状减退，血小板数目上升。,尽可能避免或减少输注血小板及含血小板的血液制品。,血小板相关疾病-输血后紫癜HPA-1a是引起该病的主要抗原,血小板相关疾病,-,新生儿同种免疫血小板减少症(FMAIT/NAIT),胎儿血小板,怀孕或生产时进入母体循环,胎儿血小板刺激母体产生抗体,母亲,IgG,抗体通过胎盘进入胎儿体内使胎儿血小板致敏,血小板破坏增加,发生,FAIT,血小板相关疾病- 新生儿同种免疫血小板减少症(FMAIT/N,血小板相关疾病,-,新生儿同种免疫血小板减少症(FMAIT/NAIT),第一胎即可发病；,病死率约,13%,；,治疗：输入相合的血小板以提高患儿的血小板数，如找不到相合的血小板，可以输注经洗涤和辐射的母亲血小板，也可给患儿做放血治疗；,治疗前交叉配血：以母亲血清与供者血小板进行交叉配合试验；,预防：母亲在孕期可进行血浆置换,血小板相关疾病- 新生儿同种免疫血小板减少症(FMAIT/N,被动免疫血小板减少症及移植相关的同种免疫血小板减少症,Passive alloimmune thrombocytopenia, PAT:,患者输入含有血小板特异性抗体的血浆，在数个小时之内出现血小板减少症，约一周后缓解。,一旦发现献血员血浆、血清中含有血小板特异性抗体应立即停止献血，这类献血员多为有妊娠史。,Transplantation-associated alloimmune thrombocytopenia, TAT:,器官接受者的淋巴细胞产生抗外来移植物（血小板）的特异性抗体；或供体器官中残留的淋巴细胞产生抗宿主血小板的抗体,被动免疫血小板减少症及移植相关的同种免疫血小板减少症 Pas,特发性血小板减少性紫癜（Idiopathic thrombocytopenia purpura, I T P）,ITP,发病机制,一、抗血小板抗体,约,75%ITP,患者可测到血小板相关自身抗体（,PAIg,），后者多为,IgG,、,IgA,也可是,IgM,。抗体通过,Fab,片段与血小板膜糖蛋白（,Gpb/a,等）结合。带有抗体的血小板接触到单核,-,巨噬细胞表面的,FC,受体，易被吞噬破坏。另外，抗血小板抗体对巨核细胞分化也有抑制作用。,二、 血小板生成时间缩短,ITP,血小板生存可缩短至,23,天或更短，,ITP,患者血小板易在脾脏被扣留。脾脏可产生抗血小板抗体，脾内的巨噬细胞参与破坏血小板过程，切脾对相当部分的患者有效。,特发性血小板减少性紫癜（Idiopathic thrombo,特发性血小板减少性紫癜（Idiopathic thrombocytopenia purpura, I T P）,ITP,急性型,：儿童多见，初起有上感，主要为病毒细菌所致。可有寒热，全身皮肤粘膜出血,(,瘢点，紫癜或血肿,),、内脏出血。,1%,患者颅内出血，危及生命，但大多数呈自限性，一般,46,周可自行缓解。,慢性型,：主要见于,40,岁以下女青年，症状多在偶然中发现，也有皮肤粘膜的出血，内脏出血较少见，月经过多者可引起贫血。,特发性血小板减少性紫癜（Idiopathic thrombo,特发性血小板减少性紫癜（Idiopathic thrombocytopenia purpura, I T P）,ITP,特发性血小板减少性紫癜（Idiopathic thrombo,特发性血小板减少性紫癜（Idiopathic thrombocytopenia purpura, I T P）,ITP,检测,LIFECODES PAKAUTO,试剂盒,特发性血小板减少性紫癜（Idiopathic thrombo,特发性血小板减少性紫癜（Idiopathic thrombocytopenia purpura, I T P）,ITP,一、糖皮质激素,二、脾切除,三、免疫抑制剂,四、高剂量免疫球蛋白和血浆置换,特发性血小板减少性紫癜（Idiopathic thrombo,血栓性,血小板减少性紫癜,(Thrombotic Thrombocytopenic Purpura,，,TTP),TTP,是一种严重的弥散性血栓性微血管病，以微血管病性,溶血性贫血,、血小板聚集消耗性减少，以及微血栓形成造成器官损害（如肾脏、中枢神经系统等）为特征。之前,TTP,预后差，病程短，不及时治疗病死率,80,90%,，随着血浆置换的临床应用，预后大大改观，病死率降至,10,20%,。,临床的五大特征，即,血小板减少性紫癜,、微血管病性溶血、中枢神经系统症状、发热以及肾脏损害，并称之为,TTP,五联征，仅有前三大特征的称为三联征。多数,TTP,患者起病急骤，病情凶险，如不治疗死亡率高达,90%,。,血栓性血小板减少性紫癜(Thrombotic Thrombo,TTP,绝大多数患者是由于vWF蛋白裂解酶（vWFCP）异常所致。vWFCP 是正常止血过程中必须成在高剪切力血流状态时内皮细胞表现、血小板表面受体和vWF多聚体三者之间相互作用，导致血小板与内皮细胞粘附。vWF水平过高会造成慢性内皮细胞损伤，可导致血栓性疾病。,血管性,血友病,因子裂解酶（ADAMTS13），vWFCP（ADAMTSl3）在TTP发病中起病因学作用，而其活性降低只是表现，本质的因素是其质、量或抗体存在。ADAMTSl3缺陷，活性下降，形成过多超大的vWF多聚体，可触发病理性血小板聚集，导致TTP。,TTP绝大多数患者是由于vWF蛋白裂解酶（vWFCP）异常所,TTP,1、血浆置换,2、血浆输注,3、糖皮质激,4、免疫抑制剂,5、脾切除,6、补充ADAMTS13蛋白,TTP1、血浆置换,欢迎指导！,谢谢指导,!,广州医科大学附属第五医院输血科,欢迎指导！谢谢指导!广州医科大学附属第五医院输血科,