扫描电镜样品制备显微镜课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,电子显微镜技术及在病理诊断上的作用,小组成员 高玉梅 于 虹 郭 峰 刘 阳 张 杰,指导教师 吴 岩 教 授,2007,级电子显微镜技术硕士研究生课程,电子显微镜技术及在病理诊断上的作用,一、电子显微镜技术,二、诊断病理学,三、电子显微镜技术在病理诊断上的作用,四、讨论,（一）概念,电子显微镜技术：也称电子显微技术 或电子显微术,概念,电子显微镜技术,电镜精密仪器,样品制备技术,1,、电子显微镜：,是用电子束成像的显微镜，电子显微镜是一种高精密度的电子光学仪器，它具有较高分辨率本领和放大倍数，是观察和研究物质微观结构的重要工具。,发明背景：,它是在发现电子束具有波动性质及利用磁场改变电子束行径，在上述理论的指导下发明出的。,电子显微镜主要分为两种类型,：,一种是观察样品内部超微结构的透射电子显微镜，另一种是揭示样品表面形貌的扫描电子显微镜。,电子显微镜特征,：,电镜与光镜的区别,扫描电镜与透射电镜比较,：（,见下表）,扫描电镜和透射电镜比较,项目,扫描电镜,透射电镜,分辨本领,70,100,2,发大倍数,20,40,万倍,100,万倍,加速电压,1,50 KV,几十千伏几百千伏,图像特点,景深长、三维立体结构,景深小、两维平面结构,样品制备,固定,-,脱水,-,临界点干燥,-,喷涂金属,固定,-,脱水,-,包埋,-,超薄切片,-,重金属染色,样品尺寸,1cm,3,50,100nm,切片,样品损伤,光斑直径只有几十埃的电子束在,样品上扫描，对样品损伤极小,大约,1m,直径电子束打到样品上，造成一定程度损伤,样品成像信号,二次电子、背散射电子,透射电子,发大倍数调节,用衰减器改变扫描线圈电流，进,行放大率调节,调整中间镜电流改变放大率,决定分辨率因素,入射电子束直径决定图像分辨率。,加速电压、透镜缩小率、电源稳定度及像差决定电子束斑直径,加速电压、电源稳定度、像差、样品厚度等影响分辨率,本图片来自中科科仪,本图片来自中科科仪,2,、样品制备,透射电镜样品制备的常用方法：,包括超薄切片、冷冻复型、负染色等。,扫描电镜样品制备：,比透射电镜样品制备简单。除保存样品表面形貌结构外，只要求样品干燥并能导电，而不需包埋和切片。制备方法与透射电镜样品制备方法一样。,电子显微镜技术及在病理诊断上的作用,一、电子显微镜技术,二、诊断病理学,三、电子显微镜技术在病理诊断上的作用,四、讨论,二诊断病理学概述,病理学,是研究疾病病因、发病机制、形态结构、功能、代谢变化的一门基础医学及其与临床医学之间的桥梁学科。,主要包括,基础病理学、实验病理学及,诊断病理学,(,以往称外科病理学或临床病理学,),。各级医院病理科所从事的工作主要是诊断病理学。,病理检查内容,通常包括活体组织检查、手术切除标本检查、术中冰冻检查、细胞学检查、尸体解剖检查等。,病理检查的手段,很多,如,:HE,常规检查、特殊染色,(,组织化学,),、免疫组化、原位分子杂交、聚合酶链反应,(PCR),、,电子显微镜检查,、病理图像分析、流式细胞仪检查、细胞培养、传真病理学,(telepathology),等。,电子显微镜技术及在病理诊断上的作用,一、电子显微镜技术,二、诊断病理学,三、电子显微镜技术在病理诊断上的作用,四、讨论,三电子显微镜技术在病理诊断上的作用,（一）电镜检查起决定性作用,（二）,电镜检查起参考和修正作用,（三）,电镜检查起验正作用,三电子显微镜技术在病理诊断上的作用,（一）电镜检查起决定性作用：,电镜发现特异性超微结构信息做出最后病理诊断。,例：男,39,岁,发现右侧颈部无痛肿物,1,年余,花生米大,取肿物做活检。光镜,:,增大的淋巴结,结构紊乱,但仍残留滤泡与淋巴窦,窦腔及淋巴索充以大量胞质丰富的嗜伊红细胞,直径约,20 m,。核圆,卵圆或扭曲状。间有增生的淋巴细胞及嗜酸性粒细胞。电镜,:,大细胞排列疏松、无连接、胞质宽广,见有似网球拍或柄的双膜结构,(Birbeck,颗粒,),证明光镜下嗜伊红大细胞为朗格汉斯细胞,(,图,1),。诊断为淋巴结朗格汉斯细胞组织细胞增生症。电镜诊断具有独特的确诊价值。,图,1,朗格汉斯细胞组织细胞增生症,:,见双模构成的似网球拍状的,Birbeck,颗粒。,EM 10 000,注：图片取自 张瑞祥,齐洁敏,张洁茹等,.235,例疑难病理标本的电镜诊断价值,.,临床与实验病理学杂志,;2002;15,（,5,）,（二）,电镜检查起参考和修正作用：,电镜获得的信息对光镜结果予以补充或修正,最终做出最后病理诊断。,例：男,因左颌下淋巴结肿大就诊。经淋巴结活检,病理诊断为淋巴组织增生。不久颌下淋巴结又肿大,再次淋巴结,(,颌下,),活检病理诊断为恶性淋巴瘤,(,免疫母细胞型,),。电镜,:,瘤细胞大、多边形或不规则形,核质比大,核膜弯曲,不规则或奇特的内陷,核常染色质丰富,网栏状大核仁。少许胞质突,胞质内核糖体丰富,其他细胞器稀少。质膜间见发育不良的桥粒样连接,(,图,2),。最后病理诊断为颌下淋巴结转移癌。随后临床发现鼻咽癌原发灶。此例电镜有确诊价值,。,图,2,转移癌,:,瘤细胞大、长圆形,胞核大、梭形,核膜不平滑,显著增大的核质比质膜间有桥粒样连接,胞质含少许欠发达的细胞器,网栏状大核仁,两团染色质间颗粒。,EM 10 000,注：图片取自 张瑞祥,齐洁敏,张洁茹等,.235,例疑难病理标本的电镜诊断价值,.,临床与实验病理学杂志,;2002;15,（,5,）,（三）,电镜检查起验正作用：,超微结构信息进一步证实、丰富了光镜的组织学诊断,例：男,30,岁,肝穿活检。光镜诊断,:,慢迁肝。虽未见典型碎屑样坏死,但不除外活动性变化。电镜见肝细胞大,疏松,细胞周围间隙加大,有微绒毛化,滑面内质网增生,内含管状体,肝窦内充塞胶原纤维。有的区域见部分肝细胞胞质有胞溶,周围有淋巴细胞浸润。最后电镜诊断,:,慢性迁延性乙型病毒性肝炎有轻微活动,(,图,3),。电镜有确诊价值。,图,3,慢性迁延性乙型病毒性肝炎,:,滑面内质网增生,腔内含量多的乙肝表面抗原管状体。,EM 8 000,注：图片取自 张瑞祥,齐洁敏,张洁茹等,.235,例疑难病理标本的电镜诊断价值,.,临床与实验病理学杂志,;2002;15,（,5,）,电子显微镜技术及在病理诊断上的作用,一、电子显微镜技术,二、诊断病理学,三、电子显微镜技术在病理诊断上的作用,四、讨论,四、讨论,国内外对电镜诊断的价值,在肿瘤应用方面报道较多,Gyorkey,等,65%,。,文献中电镜诊断价值的比率高低不同。,主要原因,是病例的选择不太相同,使用标准、统计的方法也不同,还有检查者的光镜诊断水平或侧重点不同等因素也有关,应用电镜做最后病理诊断工作,有以下几点注意：,(1),由于电镜费用较高,制作程序繁杂,应有选择地送电镜检查。有的临床医师,认为电镜是优于光镜的先进技术而盲目送检,如胃镜取胃黏膜活检无选择的送电镜检查,造成资源、人力和财力的浪费。,(2),电镜标本要求尽可能活体取材,立即投入预冷的固定液中固定,以利完好地保存细胞的超微结构。,(3),涉及病原学诊断,特别是怀疑病毒、支原体、衣原体等微生物感染的标本应充分使用电镜。,(4),作为辅助手段应用电镜时应做到,:,在光镜观察基础上有的放矢地做电镜观察,半薄切片选区定位要求准确,超微结构观察仍应依次行组织学和细胞学观察,根据需要采取不同的放大倍率观察,树立电镜观察是为获得组织细胞的超微结构病理信息的观念,而不是代替光镜诊断。,因此,如同战争中使用常规武器与战略武器的关系,在病理诊断过程中能用光镜者不用电镜,只在必要时辅以电镜、免疫组化检查。当然,应用电镜深入研究细胞细微结构在疾病发生和发展中的变化,许多工作有待开展。,THANK YOU,