乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法学验证课件

*,*,单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,乙肝外表抗原的ELISA法定量分析方法学验证,课程要求,掌握：,乙肝外表抗原的ELISA法定量检测方法；,ELISA法方法学评价的方法。,熟悉：,定量检测的酶标仪操作要领；,各种缓冲液的配制。,了解：,ELISA检测中的影响因素和本卷须知。,试验目的,进行乙肝外表抗原ELISA法定量分析的方法学验证。,试验材料,1 试剂盒,乙肝外表抗原ELISA法定量分析试剂盒，福州蓝图生物工程出品。,2 仪器及酶标板,酶标仪：Bio-Rad 680；,洗板机：Bio-Rad 1575；,超纯水系统：Millipore Elix；,电热恒温培养箱(DNP-9052):上海精宏实验设备。,3 溶液配制,0.01M pH7.4的PBS缓冲液：,称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可。,质控品：,用PBS缓冲液将标准品配制成6、3、1.5ng/ml三个质控品，每质控品1ml。,试验方法,1 标准曲线各浓度的配制,用PBS缓冲液将标准品配制成8、4、2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625ng/ml。,2 测定方法,设计标准品、质控品及空白分配方案；,取出试剂盒中已包被酶标板，取出板条，按需要重新配制；,在相应孔中参加系列标准品、质控品及空白对照，每孔50ul；,37温育30min，洗板4次；,参加酶标抗体，生物素二抗，50 ul/孔；,37温育30min，洗板4次；,参加A、B液,50 ul/孔，37温育15分钟。,参加终止液，50 ul/孔。,3 标准曲线制作及结果计算,酶标板放入酶标仪，盖上盖子；,在电脑上翻开Microplate Manager 5.2软件,选择450nm波长参照波长630nm，设置LAYOUT和报告模式，测定各孔吸收值；,输入标准品各浓度值，以双对数法制备标准曲线，获取各孔的浓度值，打印标准曲线图和计算结果。,ELISA法标准曲线示意图,4 准确度回收率计算,按例如表1样式列表并计算回收率。,5 按例如表列表并计算精密度。,板内精密度,板间精密度,6 检测限LOD计算：,取空白孔的OD值的均数加2倍标准差。,本卷须知,标准品和质控品配制要准确。,实验各个环节都很重要，每步操作都要认真。,讨 论,1.实验背景介绍目的、采用的方法、检测原理、方法学验证的根本知识介绍,2.本实验的设计及实施特点,3.实验结果分析,4.临床应用及分析,本实验报告要求,按科研论文格式,有摘要和关键词,字数不限,以WORD形式打印，元月18日前集体上交。,