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Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,11/7/2009,#,紫外可见分光光度法的原理及应用,第一页，共22页。,紫外,-,可见分光光度法的原理,物质对光的选择吸收,当一束光照射到某种物质的固态物或溶液上时，一部分光会被,吸收,或被,反射,，不同的物质对于照射它们的光束的吸收程度是不同的，对某个波长的光吸收强烈，对另外波长的光吸收很小或不吸收，我们把这种现象称为光的选择吸收。一切物质都会对可见和不可见光中的某些波长的光进行吸收。,物质呈现各种各样颜色，就是它们对可见光,中某些特定波长的光线选择吸收的结果。,第二页，共22页。,物质的结构决定了物质在吸收光时只能吸收某些特定波长的光。我们可以利用测量物质对某种波长的光的吸收来了解物质的结构特性。,用经过分光后的不同波长的光依次透过该物质，通过测量物质对不同波长的光的吸收程度（吸光度），以波长为横坐标，吸光度为纵坐标作图，就可以得到该物质在测量波长范围内的吸收曲线。这种曲线体现了物质对不同波长的光的吸收能力，称为吸收光谱。,紫外,-,可见分光光度法的原理,入射光,透射光,不同波长光,检测器,吸收光谱,第三页，共22页。,紫外,-,可见分光光度法的原理,-,定性分析,不同结构的物质吸收光谱也不同，这是对物质进行定性分析的基础：通过检测吸收光谱来比对鉴定分析物质。,波长范围,吸光度,利用标准物质定性分析,在相同条件下，测定未知物的吸收光谱，与标准物的吸收光谱进行比较，如果两吸收光谱的形状和吸收峰的数目、位置、拐点等完全一致，就可初步判定未知物与标准物是同一种物质。,紫外,-,可见分光光度法是利用物质对光的吸收光谱，对物质进行定性分析或定量分析的方法。,按所吸收光的波长区域不同，分为紫外分光光度法和可见分光光度法，合称为紫外,-,可见分光光度法。,第四页，共22页。,紫外,-,可见分光光度法的原理,-,定量分析,Lambert Beer,光,吸收定律：,当一束平行单色光通过均匀的样品时，其吸光度与吸光组分的浓度、吸收池的厚度乘积成,正比,.,入射光,I,0,透射光,I,t,L,C,吸收系数,第五页，共22页。,吸光系数,1,定义,一定条件下，吸光物质在单位浓度及单位液层厚度时的吸光度，叫这个物质的吸光系数。,2,两种表示方法,(1),摩尔吸光系数,(),：一定波长下，吸光物质的溶液浓度为,1mol/L,，液层厚度为,1cm,时，溶液的吸光度。,(2),百分吸光系数,(),：一定波长下，吸光物质的溶液浓度为,1g/100ml(1%),，液层厚度为,1cm,时，溶液的吸光度。,第六页，共22页。,紫外,-,可见分光光度法的原理,-,定量分析,波长范围,吸光度,最大吸收波长,利用标准曲线法定量分析,在一定波长（,max,）下测定某物质的标准系列溶液的吸光度作标准曲线，然后测定样品溶液的吸光度值，由标准曲线求得样品溶液的浓度或含量。,0 1.0 2.0 3.0 4.0,c,(mg/mL),。,0.80,0.60,0.40,0.20,0.00,A,x,c,x,第七页，共22页。,测定步骤,首先配制一系列被测物的标准溶液，测其吸光度，绘出,A-c,工作曲线；,在相同条件下，测出被测物的吸光度,Ax;,根据,Ax,的值在工作曲线上查处,cx,的大小。,适用范围,大批重复试样的分析。,标准曲线法,(,工作曲线法,),第八页，共22页。,未知物的吸光度,未知物的浓度,第九页，共22页。,根据,Lambert-Beer,定律，以该物质吸收光谱图中的,max,为入射光，首先配制一个与被测溶液浓度相近的标准溶液,c,s,，测其,A,s,，再将样品溶液推入光路，测其,A,x,，则试样溶液的浓度,c,x,为：,此法适于非经常性的分析工作，准确度不如标准曲线法。,紫外可见,分光光度法的定量方法,单一组分的测定,（,1,）标准对照法,第十页，共22页。,*,例：维生素,B12,的含量测定精密吸取,B12,注射液，加水,稀释至；另配制对照液，精密称定对照品，加水稀释至,1000mL,。在,361nm,处，用,1cm,吸收池，分别测定吸光度为和，求,B12,注射液注射液的浓度（单位,ug/mL),1,）对照法,第十一页，共22页。,2.,吸收系数法,C=A/E,1%,L,当其为百分吸收系数,E,1%,时,第十二页，共22页。,吸光度的测量：紫外,-,可见分光光度计,0.575,光源,单色器,吸收池,检测器,显示,第十三页，共22页。,在紫外可见分光光度计中，常用的光源有两类：可见光光源，如钨灯和卤钨灯；紫外光源，如氢灯和氘灯。,1,光源,紫外,-,可见分光光度计的组成,根据测定时所选用的光源：,可见分光光度法,(,400800nm),紫外分光光度法,(200,400 nm),红外分光光度法,(800nm,50m),氙灯,氢灯,钨灯,第十四页，共22页。,单色器以棱镜或光栅分光，提供单色光。,2,单色器,入射狭缝,准直透镜,棱镜,聚焦透镜,出射狭缝,白光,红,紫,1,2,800,600,500,400,第十五页，共22页。,3,吸收池,吸收池也称比色皿，用于盛放参比溶液或待测溶液。,它是由无色透明、耐腐蚀、化学性质相同、厚度相等的玻璃制成的，按其厚度分为,0.5 cm,，,1 cm,，,2 cm,，,3 cm,和,5 cm,。在可见光区测量吸光度时使用玻璃吸收池，紫外区则使用石英吸收池。使用比色皿时应注意保持清洁、透明，避免磨损透光面。,第十六页，共22页。,紫外,-,可见分光光度计的组成,4,检测器,检测器的作用是检测光信号，并将光信号转变为电信号。现今使用的分光光度计大多采用光电管或光电倍增管作为检测器。,5,信号显示系统,常用的信号显示装置有自动记录和数字显示装置等。,第十七页，共22页。,仪器,可见分光光度计,第十八页，共22页。,仪器,紫外,-,可见分光光度计,第十九页，共22页。,优点：,灵敏度高,主要用于微量分析；,准确度高,浓度测量相对误差仅有,13%,；,操作简便、迅速，所需设备并不复杂；,应用广泛。,缺点：,仅适合微量分析；,所需仪器相对昂贵。,紫外分光光度法的优缺点,第二十页，共22页。,1,1.,定性分析,各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同，因此，每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线,2,纯度的鉴定,用紫外吸收光谱确定试样的纯度是比较方便的。,如果一化合物在紫外区没有吸收峰，而其杂质有较强吸收，就可方便的检出该化合物中的痕量杂质。,3,结构分析,紫外-可见吸收光谱一般不用于化合物的结构分析，但利用紫外吸收光谱鉴定化合物中的共轭结构和芳环结构还是有一定价值。,应用,21,第二十一页，共22页。,紫外,-,可见分光光度法的应用范围,几乎所有的无机元素和在紫外及可见光区有特征吸收的有机物或有机化合物都能用紫外/可见分光光度法进行测定。目前，紫外可见分光光度计已成为全世界 最悠久、使用最多、覆盖面最广的常规分析仪器。,第二十二页，共22页。,
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