岛津hplc使用

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,岛津高效液相的使用,高效液相色谱仪主要包括,输液系统，进样系统，色谱柱系统，检测系统和数据处理系统。,运用高效液相色谱仪可以对微量及痕量样品进行定性及定量处理，方法简便高效且实用。,1,、输液系统,主要为高压输液泵以及在线脱气装置,(1),高压输液泵,高压输液泵是液相色谱仪的关键部件，其作用是将流动相以稳定的流速或压力输送到色谱系统。,输液泵的稳定性直接关系到分析结果的重复性和准确性。,(2),在线脱气装置,在线脱气装置用于脱去流动相中的溶解气体，流动相先经过脱气装置再输送到色谱柱。,除在线脱气装置外，目前也采用超声脱气、真空脱气等方式。,脱气不好时有气泡，导致流动相流速不稳定，造成基线飘溢，噪音增加。,2,、进样系统,进样器是将试样送入色谱柱的装置。通常采用六通伐进样,3,、色谱柱,色谱柱是实现分离的核心部件，要求柱效高、柱容量大和性能稳定。柱性能与柱结构、填料特性、填充质量和使用条件有关。,4,、检测器,作用,用来连续监测经色谱柱分离后的流出物的组成和含量变化的装置，把色谱洗脱液中组分的量转变成电信号。,目前最常用的检测器主要有：紫外,-,可见检测器、荧光检测器、电化学检测器、蒸发光散射检测器、质谱检测器,三、液相色谱分离模式,1,、吸附色谱（,adsorption chromatography,）,原理：基于被测组分在固定相表面具有吸附作用，且各组分的吸附能力不同，使组分在固定相中产生保留和实现分离。,固定相：固定相通常是活性硅胶、氧化铝、活性炭、聚乙烯、聚酰胺等固体吸附剂，所以吸附色谱也称液固吸附色谱。活性硅胶最常用。,流动相：弱极性有机溶剂或非极性溶剂与极性溶剂的混合物，如正构烷烃（己烷、戊烷、庚烷等）、二氯甲烷,/,甲醇、乙酸乙酯,/,乙腈等。,应用：吸附色谱用于结构异构体分离和族分离仍是最有效的方法，如农药异构体分离、石油中烷、烯、芳烃的分离。缺点是容易产生不对称峰和拖尾现象。,2,、分配色谱,原理：主要基于样品分子在流动相和固定相间的溶解度不同（分配作用）而实现分离的液相色谱分离模式。,非极性键合固定相：键合在载体表面的功能分子是烷基、苯基等非极性有机分子。如最常用的,ODS,（,Octa,Decyltrichloro,Silane,）柱或,C18,柱就是最典型的代表，其极性很小。,极性键合固定相：键合在载体表面的功能分子是具有二醇基、醚基、氰基、氨基等极性基团的有机分子。,正相,HPLC,（,normal phase HPLC,）：,是由极性固定相和非极性（或弱极性）流动相所组成的,HPLC,体系。其代表性的固定相是改性硅胶、氰基柱等，代表性的流动相是正己烷。吸附色谱也属正相,HPLC,。,反相,HPLC,（,reversed phase HPLC,）：,由非极性固定相和极性流动相所组成的液相色谱体系，与正相,HPLC,体系正好相反。其代表性的固定相是十八烷基键合硅胶,(ODS,柱），代表性的流动相是甲醇和乙腈。是当今液相色谱的最主要分离模式。,ODS,（,Octa,Decyltrichloro,Silane,),3,、体积排斥色谱,（又称凝胶色谱和分子筛色谱）,原理：以多孔性物质作固定相，样品分子受固定相孔径大小的影响而达到分离的一种液相色谱分离模式。,4,、离子交换色谱,（,ion exchange chromatography,IEC,）,IEC,使用表面有离子交换基团的离子交换剂作为固定相。带负电荷的交换基团（如磺酸基和羧酸基）可以用于阳离子的分离，带正电荷的交换基团（如季胺盐）可以用于阴离子的分离。不同离子与交换基的作用力大小不同，在树脂中的保留时间长短不同，从而被相互分离。,高效液相色谱仪的使用方法,仪器名称：高效液相色谱仪,仪器型号：岛津,LC-2010AHT,生产厂家：岛津,检测器类型：,软件介绍：,此仪器运行的程序为,Class-,vp,。,Class-,vp,软件分为几种模式：,Offlineprocessing,模式,Board configuration,模式,Instrument 1 Online,模式,1,、,Offlineprocessing,模式：,即为脱机处理模式。当仪器正进行样品采集和方法开发时，可用于开发方法，创建及编辑方法及顺序，以及用样品顺序再处理已经储存的数据，进行采集数据后执行数据分析。,2,、,board configuration,模式：,插板配置和系统管理用于设置系统资源。,3,、,Instrument 1 Online,模式：,用于进入仪器或色谱控制和需要实时数据时，仪器模式用于方法开发和样品处理。,常用工具栏中按钮功能,工具栏按钮：前三个按钮比较常用。用于建立一个新文件、打开和保存文件。,新建,：用于建立一个新的方法、顺序、库或自动进样文件。,打开,：用于打开一个已有的方法、顺序、报告模板、库或自动进样文件。,保存,：用于保存一个方法、顺序、报告模板、库或自动进样文件。,此外较常用的工具按钮有：,采集设置,：显示采集设置对话框,峰,/,组表格按钮,：显示峰,/,组表格,积分事件表格,：显示积分事件,检查峰的校准,：显示检查峰校准窗口,分析,：分析全部色谱图,单一运行,：显示“单一运行采集”对话框，用于采集单一数据文件。,顺序运行,：显示“顺序运行”对话框，用于开始顺序采集。,显示运行队列,：显示运行队列表框。,停止运行,：自动停止运行正在运行的程序。,使用方法流程,：,开机准备工作,数据采集及方法编辑工作,后期文件数据分析处理工作,关机,(,一,),、开机：,1,、打开稳压器保护电源,2,、打开计算机,进入,Windows,xp,（或,Windows 2000,）画面，运行,Class-,vp,程序。,3,、打开,LC2010AHT,液相色谱仪器各模块电源，待各模块自检完成（根据提示按,F5,）。,4,、若进行在线实时工作，则双击,Instrument 1 Online,（在线工作站）图标，化学工作站自动与,LC2010AHT,液相色谱仪器通讯，进入的工作站画面如下所示。,5,、从“,View”,菜单中选择“,preferences(,选项,)”,单击”,general,（首选项）”菜单中的“,minutes”,，“,show toolbar”,，“,tooltips”,”show,status bar”,，使其命令前有“”标志，来调用所需的界面。,6,、把流动相放入溶剂瓶中。四个瓶子标号,ABCD,。一般常用的,A,瓶中为甲醇；,B,瓶中为水。,C,D,瓶为其他流动相，每次换流动相时,流动相溶剂需要超滤，用超纯水配制，溶剂瓶需要洗干净，不能残留洗衣粉等溶剂，要用超纯水冲洗干净并用流动相润洗。,7,、在,Class-VP,中打开,instrument,所有工作站，包括泵。,8,、打开,Instrument 1 Online,中的,Pump,图标，出现参数设定菜单，进入泵编辑画面。设,Flow,：,10ml/min,，单击,OK,。,9,、在液相仪器上打开脱气阀，按,purge,键，选择通道进行在线脱气，,(F1,，,F2,，,F3,，,F4,，分别代表,A B C D,四个溶剂瓶所在的流动相通道,),，直到脱气自动停止,切换通道继续,Purge,，直到所有要用通道脱气自动停止，每次新换溶剂后如果泵头离开液体接触空气，则需进行脱气。,（二）数据采集方法编辑：,1,、开始编辑完整方法：,从“,File”,菜单中选择“,Method”,选项，弹出“,open”,项，选择一个已编辑过并保存的,Method,（方法）打开，可以进行需要的改写，修改完毕后单击“,save as”(,另存为,),，写入想保存的其他的名称，以“*,.met”,为结尾保存文件，单击,Ok,保存完毕。,2,、方法信息参数设定（以四元泵为例）：,在打开的“,Method”,中加入方法的参数设定信息，单击,Ok,进入下一画面。,在“,pumps”,栏目下的“,B,C,D”,输入流动相的比例。若,B,C,D,为,0,，则默认输入为,A,流动相为,100%,。“,Flow”,处输入流量,如,1ml/min,；在“,spd-10AVvp”,栏目下的“,wavelength”,设置波长。在“,Pressure Limits Max”,处输入柱子的最大耐高压，以保护柱子。此液相色谱仪一般设置最大耐受高压为,2025,。,单击,Ok,进入下一画面。,3,、顺序项设定：,4,、单针进样项设定：,