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流式细胞术,细胞染色，制备单细胞悬液,上机获取数据,数据分析,PMT,PMT,PMT,PMT,4,Dichroic,Filters,Bandpass,Filters,流式细胞检测原理,Laser,1,2,3,4,Flow cell,流式数据表现形式,FS:,细胞大小,SS:,胞内颗粒性,流式血液肿瘤数据分析步骤,1,、寻找异常细胞,2,、 定义异常细胞,-,异常细胞是什么细胞？,-,异常细胞的量有多少？,3,、结论,如何寻找异常细胞,?,正常细胞群的分布,粒细胞,单核细胞,淋巴细胞,CD45:,白细胞共同抗原，表达于所有白细胞,异常细胞群,异常细胞群,异常细胞的量如何计算,?,流式如何定义细胞,?,-,以白血病细胞表达的抗原标志作为依据,粒细胞成熟过程,阶段,表达,不表达,I,原粒,CD45+CD34+CD117+DR+,CD13+CD33+,CD15,CD11b,CD16, CD10,II,早幼粒,CD45+CD117+CD13+CD33+,CD15+,CD34, HLA-DR, CD11b,CD16,III,中幼粒,CD45+CD13+CD33+,CD15+CD11b+,CD34, CD117, DR, CD16,IV,晚幼粒,CD45+CD13+CD33+,CD15+CD11b+CD16+,CD34, CD117, DR, CD10,V,成熟粒,CD45+CD13+CD33+,CD15+CD11b+CD16+CD10+,CD34, CD117,DR,不同阶段粒细胞,CD,分子的表达情况,单核细胞的成熟过程,不同阶段单核细胞,CD,分子的表达情况,阶段,表达,不表达,I,原单,CD45+CD34+CD117+,DR+CD13+CD33+,CD11b, CD14,CD15,II,幼单,CD45+DR+CD34+/CD117+/-,CD13+CD33+,CD11b+CD15+,CD34, CD117, CD14,III,成熟单,CD45+ DR+,CD13+CD33+CD11b+,CD15+,CD14+,CD34,CD117,红系的成熟过程,阶段,表达,不表达,I,原红,CD45+CD71+CD117+,Glycophorin A (CD235a),II,有核红,CD71+Glycophorin+,CD45,III,成熟红,Glycophorin+,CD45,CD71,B,淋巴细胞成熟过程,T,淋巴细胞的成熟过程,其他血液系统肿瘤的特异性标志,毛细胞性白血病：,CD19+,，,CD103+,，,CD11c/CD22,双阳性高表达,CLL,：,CD19+/CD5+,CMML,：,CD14+/CD68+/CD13+CD33+/,高,SSC,MM,：,CD19+,，,CD38+,流式报告单的结论如何得出,?,病例分析,病例一,异常细胞,髓系？淋系？,流式细胞术检测结果表明骨髓细胞中髓系母细胞（,CD34+,或,/,和,CD117+,）约占骨髓细胞总数,32%,；同时伴有单核细胞系列分化倾向的细胞约占骨髓细胞总数约,70%,。结果符合急性髓性白血病伴单核细胞系列分化（,AML-M5,）。,因为原始单核细胞幼稚单核细胞大于等于,80,为,M5a,x,小于,80,为,M5b,，在分界线上，所以不区分,a,b.,治疗方法类似。,淋巴细胞,-4.2 T,细胞占淋巴细胞,44.9%,，,CD4:CD8=0.66,，未见明显异常；,NK,细胞占淋巴细胞,3.9%,，未见明显异常；成熟,B,细胞占淋巴细胞,40.7%,，为多克隆,B,细胞,未见明显异常。,粒细胞,-22.7,相对比例未见明显减少。免疫表型提示粒细胞发育成熟标记物表达紊乱。,单核细胞,-37.7,相对比例明显增多，其中约,70%,为成熟单核细胞，免疫表型为,CD14+,CD64+,CD11b+, CD13+,CD33+,HLA-DR+,和,CD4+,。,CD45 Dim-33.0,相对比例明显增多，为髓性原始,/,幼稚细胞,免疫表型为,CD34+,，,CD117+,，,CD13+,CD33+,和,HLA-DR+,。,非白细胞,-0.2,未见明显异常。,病例二,淋巴细胞,-41.5 T,细胞占淋巴细胞,70.9%,，,CD4:CD8=1.42,，未见明显异常；,NK,细胞占淋巴细胞,4.7%,，未见明显异常；成熟,B,细胞占淋巴细胞,17.6%,，为多克隆,B,细胞,未见明显异常。,粒细胞,-10.9,其相对比例明显减低，免疫表型未见明显异常。,单核细胞,-4.9,未见明显异常。,CD45 Dim-36.1,主要为原始,/,幼稚,B,淋巴细胞，其免疫表型为,CD34-,、,CD117-,、,CD19+,、,HLA-DR+,和,CD10+,。,非白细胞,-6.1,主要为细胞碎片。,流式细胞术检测表明结果原始,/,幼稚,B,淋巴细胞约占骨髓细胞白细胞总数,30%,， 其免疫表型为,CD34-,、,CD117-,、,CD19+,、,HLA-DR+,和,CD10+,，提示为前,B,淋巴细胞。结果符合急性,B,淋巴细胞白血病（,B-ALL,）。,谢谢！,
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