天然药化黄酮类化合物

Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,11/7/2009,#,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第五章,黄酮类化合物,FLAVONOIDS,第一页，共一百一十一页。,本 章 内 容,第一节 概述,第二节 理化性质,第三节提取别离,第四节检识与结构测定,结构类型,波谱特征,酸性、显色反响,第二页，共一百一十一页。,此类化合物多为,黄色,，且具有,酮式羰基,，故称黄酮类化合物。,广泛存在于植物中，不少的常用中药中主要含有此类成分。,以黄酮醇类最为常见，其次为黄酮类。大多与糖结合成苷，称为黄酮苷类；有的以游离形式存在，即未与糖结合，称为游离黄酮或黄酮苷元。,第三页，共一百一十一页。,一、根本结构和分类,一根本结构,1952年以前，黄酮类化合物主要是指根本母核为2-苯基色原酮的一系列化合物。,色原酮 2-苯基色原酮黄酮,第四页，共一百一十一页。,现在的黄酮类化合物那么泛指两个苯环A与B环通过中央三碳链相互连接而成的一类化合物。,C6-C3-C6,B,A,C,母核上取代基常有酚羟基、甲氧基、甲基、异戊烯基等,第五页，共一百一十一页。,根据B环连接位置2位或3位,C环氧化程度包括2，3位是否存在双键；4位,有无CO,C环是否成环1，2位是否开环,将黄酮类化合物分为以下七大类。,1 黄酮和黄酮醇,2 二氢黄酮和二氢黄酮醇,3 异黄酮和二氢异黄酮醇,4 查耳酮和二氢查耳酮,5 橙酮类,6 花色素和黄烷醇类,7 其他,二结构类型,B,C,A,第六页，共一百一十一页。,黄酮类flavones,约占黄酮类化合物总数的1/4,结构特点,2-苯基色原酮为根本母核,且3位上无含氧基团取代,第七页，共一百一十一页。,木犀草素luteolin,存在于忍冬藤、菊花、金银花、浮萍中，具有抗菌作用,第八页，共一百一十一页。,黄酮醇类flavonols,约占黄酮类化合物总数的1/3,结构特点,2-苯基色原酮为根本母核,3位上连有羟基或其他含氧基团,第九页，共一百一十一页。,槲皮素(quercetin)具有抗炎、止咳祛痰等作用。,芦丁(rutin)是槲皮素的O芸香苷。,第十页，共一百一十一页。,二氢,黄,黄酮类(flavanones),结构特点,2-苯基,色,色原酮母,核,核的2、3位双键,被,被氢化而,成,成,第十一页,，,，共一百,一,一十一页,。,。,第十二页,，,，共一百,一,一十一页,。,。,4二氢,黄,黄酮醇类(flavanonols),结构特点,具有黄酮,醇,醇类的,、,、位被,氢,氢化的根,本,本母核,常与相应,的,的黄酮醇,共,共存于同,一,一植物体,中,中,第十三页,，,，共一百,一,一十一页,。,。,水飞蓟素,是,是二氢黄,酮,酮醇与苯,丙,丙素衍生,物,物缩合成,的,的黄酮木,脂,脂素类成,分,分。,具有保肝,作,作用，用,于,于治疗急,、,、慢性肝,炎,炎及肝硬,化,化，代谢,中,中毒性肝,损,损伤。,第十四页,，,，共一百,一,一十一页,。,。,5查耳,酮,酮类与二,氢,氢查耳酮,结构特点,黄酮C环,的,的1、2,位,位键断裂,生,生成的开,环,环衍生物,，,，即三碳,链,链不构成,环,环。,查耳酮,，,，位双,键,键氢化,二氢查耳,酮,酮,第十五页,，,，共一百,一,一十一页,。,。,查尔酮其,邻,邻羟基衍,生,生物可视,为,为二氢黄,酮,酮的异构,体,体，二者,可,可相互转,化,化。,二氢黄酮,的,的吡酮环,芳,芳香性低,，,，在碱的,作,作用下易,开,开环生成6-羟,基,基查耳酮,，,，由无色,转,转为深黄,色,色，后者,经,经酸化又,能,能转化为,原,原来的二,氢,氢黄酮。,第十六页,，,，共一百,一,一十一页,。,。,红花苷,梨根苷,第十七页,，,，共一百,一,一十一页,。,。,6.异黄,酮,酮类与二,氢,氢异黄酮,类,类,结构特点,母核为3-苯基色,原,原酮的结,构,构，即B,环,环连接在C环的3,位,位上,异黄酮的2、3位,被,被氢化,第十八页,，,，共一百,一,一十一页,。,。,第十九页,，,，共一百,一,一十一页,。,。,7双黄,酮,酮类,结构特点,二分子黄,酮,酮衍生物,聚,聚合生成,的,的二聚物,，,，多为两,分,分子芹菜,素,素通过3,-8,8-8醚,键,键连接构,成,成，多分,布,布于裸子,植,植物中。,银,银杏中含,有,有多种双,黄,黄酮，如,银,银杏素。,第二十页,，,，共一百,一,一十一页,。,。,8,花色素类,一类以离子形式,存在的,色原烯的,衍,衍生物，,C环无羰,基,基。,是使花、,叶,叶、果、,茎,茎等呈现,蓝,蓝、紫、,红,红等颜色,的,的色素。,以,以苷的形,式,式存在于,细,细胞液中,。,。,飞燕草苷,元,元,第二十一,页,页，共一,百,百一十一,页,页。,9黄烷-3-醇,及,及黄烷-3，4-,二,二醇类,生源上是,由,由二氢黄,酮,酮醇类复,原,原而来，,可,可看成是,脱,脱去C4,位,位羰基氧,原,原子后的,二,二氢黄酮,醇,醇类化合,物,物,第二十二,页,页，共一,百,百一十一,页,页。,10橙,酮,酮类,可看作是,黄,黄酮的,C环分出,一,一个碳原,子,子变成五,元,元环,，其余部,位,位不变，,但,但C原子,定,定位有所,不,不同。,是黄酮的,同,同分异构,体,体，属于,苯,苯骈呋喃,的,的衍生物,硫磺菊素,第二十三,页,页，共一,百,百一十一,页,页。,11双,苯,苯吡酮类,根本母核,由,由苯环与,色,色原酮的,，3位,骈,骈合而成,石韦中的,异,异芒果素,具,具有止咳,祛,祛痰的成,效,效。,第,二,二,十,十,四,四,页,页,，,，,共,共,一,一,百,百,一,一,十,十,一,一,页,页,。,。,12,、,、,高,高,异,异,黄,黄,酮,酮,类,类,13,、,、,其,其,他,他,黄,黄,酮,酮,类,类,复,复,杂,杂,衍,衍,生,生,物,物,：,：,包,包,括,括,黄,黄,酮,酮,木,木,脂,脂,体,体,类,类,；,；,生,生,物,物,碱,碱,型,型,黄,黄,酮,酮,等,等,第,二,二,十,十,五,五,页,页,，,，,共,共,一,一,百,百,一,一,十,十,一,一,页,页,。,。,二,、,、,黄,黄,酮,酮,类,类,化,化,合,合,物,物,的,的,生,生,物,物,合,合,成,成,途,途,径,径,查,耳,耳,酮,酮,合,合,成,成,酶,酶,第,二,二,十,十,六,六,页,页,，,，,共,共,一,一,百,百,一,一,十,十,一,一,页,页,。,。,第,二,二,十,十,七,七,页,页,，,，,共,共,一,一,百,百,一,一,十,十,一,一,页,页,。,。,三,、,、,黄,黄,酮,酮,类,类,化,化,合,合,物,物,的,的,生,生,物,物,活,活,性,性,1.,对,对,心,心,血,血,管,管,系,系,统,统,的,的,作,作,用,用,Vp,样,样,作,作,用,用,：,：,芦,丁,丁,、,、,橙,橙,皮,皮,苷,苷,，,，,能,能,降,降,低,低,血,血,管,管,脆,脆,性,性,及,及,异,异,常,常,通,通,透,性,性,，,，,可,可,用,用,作,作,防,防,治,治,高,高,血,血,压,压,的,的,辅,辅,助,助,治,治,疗,疗,剂,剂,。,。,扩,冠,冠,作,作,用,用,：,：,芦,丁,丁,、,、,槲,槲,皮,皮,素,素,、,、,葛,葛,根,根,素,素,临,临,床,床,用,用,于,于,心,心,绞,绞,痛,痛,和,和,高,血,血,压,压,。,。,降,血,血,脂,脂,及,及,胆,胆,固,固,醇,醇,：,：,木,木,樨,樨,草,草,素,素,、,山,山,楂,楂,总,总,黄,黄,酮,酮,抑,制,制,血,血,小,小,板,板,聚,聚,集,集,2.,抗,抗,肝,肝,脏,脏,毒,毒,作,作,用,用,水,飞,飞,蓟,蓟,素,素,具,具,有,有,保,保,肝,肝,作,作,用,用,第,二,二,十,十,八,八,页,页,，,，,共,共,一,一,百,百,一,一,十,十,一,一,页,页,。,。,3.,抗,抗,炎,炎,芦,丁,丁,、,、,羟,羟,乙,乙,基,基,芦,芦,丁,丁,、,、,二,二,氢,氢,槲,槲,皮,皮,素,素,等,等,4.,抗,抗,菌,菌,及,及,抗,抗,病,病,毒,毒,作,作,用,用,黄,芩,芩,苷,苷,：,：,抗,抗,菌,菌,山,山,奈,奈,酚,酚,：,：,抗,抗,病,病,毒,毒,5.,解,解,痉,痉,作,作,用,用,异,甘,甘,草,草,素,素,、,、,大,大,豆,豆,素,素,：,：,解,解,除,除,平,平,滑,滑,肌,肌,痉,痉,挛,挛,；,；,6.,雌,雌,性,性,激,激,素,素,样,样,作,作,用,用,大,豆,豆,素,素,等,等,异,异,黄,黄,酮,酮,具,具,有,有,雌,雌,性,性,激,激,素,素,样,样,作,作,用,用,可,能,能,与,与,它,它,们,们,与,与,己,己,烯,烯,雌,雌,酚,酚,结,结,构,构,类,类,似,似,有,有,关,关,7.,去,去,除,除,人,人,体,体,自,自,由,由,基,基,作,作,用,用,8.,抗,抗,肿,肿,瘤,瘤,作,作,用,用,第,二,二,十,十,九,九,页,页,，,，,共,共,一,一,百,百,一,一,十,十,一,一,页,页,。,。,第,二,二,节,节,黄,黄,酮,酮,类,类,化,化,合,合,物,物,的,的,理,理,化,化,性,性,质,质,及,及,颜,颜,色,色,反,反,响,响,一,、,、,物,物,理,理,性,性,质,质,1,、,、,性,性,状,状,多,为,为,结,结,晶,晶,性,性,固,固,体,体,，,，,少,少,为,为,如,如,黄,黄,酮,酮,苷,苷,类,类,无,无,定,定,形,形,粉,粉,末,末,2,、,、,旋,旋,光,光,性,性,：,：,游,离,离,苷,苷,元,元,中,中,，,，,除,除,二,二,氢,氢,黄,黄,酮,酮(,醇,醇),、,、,黄,黄,烷,烷(,醇,醇),及,及,二,二,氢,氢,异,异,黄,黄,酮,酮,类,类,有,有,旋,旋,光,光,外,外,，,，,其,其,余,余,无,无,旋,旋,光,光,性,性,。,。,苷,类,类,由,由,于,于,结,结,构,构,中,中,引,引,入,入,糖,糖,的,的,分,分,子,子,，,，,均,均,有,有,旋,旋,光,光,性,性,，,，,且,且,多,多,为,为,左,左,旋,旋,。,。,第,三,三,十,十,页,页,，,，,共,共,一,一,百,百,一,一,十,十,一,一,页,页,。,。,3.,颜,颜,色,色,：,：,分,分,子,子,中,中,是,是,否,否,存,存,在,在,交,交,叉,叉,共,共,轭,轭,体,体,系,系,助,助,色,色,团,团,的,的,数,数,目,目,与,与,位,位,置,置,色,原,原,酮,酮,局,局,部,部,原,原,本,本,无,无,色,色,，,，,但,但,在,在2,位,位,引,引,入,入,苯,苯,环,环,后,后,，,，,即,即,形,形,成,成,交,交,叉,叉,共,共,轭,轭,体,体,系,系,，,，,且,且,通,通,过,过,电,电,子,子,的,的,转,转,移,移,，,，,重,重,排,排,，,，,使,使,共,共,轭,轭,链,链,延,延,长,长,，,，,而,而,表,表,现,现,出,出,颜,颜,色,色,。,。,第,三,三,十,十,一,一,页,页,，,，,共,共,一,一,百,百,一,一,十,十,一,一,页,页,。,。,黄,酮,酮,、,、,黄,黄,酮,酮,醇,醇,及,及,苷,苷,类,类,灰,灰,黄,黄-,黄,黄,色,色,查耳酮,黄,黄-橙黄色,二氢黄酮、,二,二氢黄酮醇,无,无,色,色,异黄酮,微,微黄色,其中，黄酮,、,、黄酮醇及,苷,苷类、查耳,酮,酮等因分子,中,中存在交叉,共,共轭体系，,在,在7,4,位,位引入-OH, OCH3等供电,子,子基团，使,化,化合物颜色,加,加深。,花色素及其,苷,苷的颜色随pH的不同,而,而改变：呈,现,现红pH8.5,第三十二页,，,，共一百一,十,十一页。,二. 溶解,性,性,符合苷的溶,解,解性规律。,但,但水溶性与,结构的平面,性,性,、,取代基团的,种,种类和数目等有一定关,系,系。,平面型分子,非,非平面型分,子,子,黄酮,二,二氢类C-环半椅,式,式结构,黄酮醇,异,异黄酮羰,基,基与B-环,立,立体障碍,查耳酮,R=OH,二,二氢黄酮,醇,醇,R=H,二,二氢黄酮,分子堆砌紧,密,密，分子间,引,引力较大，,水,水溶度小,分子间排列,不,不紧密，水,分,分子易于进,入,入，水溶度,大,大,1分子,的,的立体结构,第三十三页,，,，共一百一,十,十一页。,2取代,基,基团的性质,、,、数目、连,接,接位置,引入羟基数,目,目多，水溶,度,度较大。,羟基甲基化,-OCH3, 水,溶,溶度降低。,1三糖,苷,苷 双,糖,糖苷 ,单,单糖苷 ,苷,苷元,23-O-糖苷 7-O-糖苷平,面,面性分子,3花色,素,素(离子型) 非,平,平面性分子 平面,性,性分子,3黄酮,苷,苷(亲水性),易溶于H2O, MeOH, EtOH等，,难,难溶或不溶,于,于,苯，氯仿等,黄酮类化合,物,物溶解性,极,极性规律:,花色素,类虽系,平面型分子，,但因以离子形,式存在，具有,盐的通性，故,亲水性较强，水溶度较大。,第三十四页,，,，共一百一,十,十一页。,三、酸碱性,1 酸,性,性,多具有酚羟,基,基而呈酸性,可溶于碱性,水,水液：吡啶,，,，甲酰胺及,二,二甲基甲酰,胺,胺。,酸性规律,a、7，4,-OH酸,性,性强于其他,位,位置羟基的,酸,酸性处于,羰,羰基对位，,羰,羰基的共轭,诱,诱导。,b、5-OH酸性最弱,处于羰基,邻,邻位，形成,分,分子内氢键,。,c、酚羟基,数,数目越多，,酸,酸性越强。,羟基位置,酸,酸性,溶,溶解,性,性,7，4-,二,二羟基,强,强,溶,溶,于,于5%NaHCO3,7或4-,羟,羟基,溶,溶于5%Na2CO3,一般酚羟基,溶,溶,于,于0.2%NaOH,5-羟基,弱,弱,溶,溶于4%NaOH溶,液,液,第三十五页,，,，共一百一,十,十一页。,2碱性,-吡喃酮,上,上的1-位,氧,氧原子上有,未,未共用电子,对,对，表性微,弱,弱的碱性。,可与强无机,酸,酸如浓硫酸,，,，盐酸生成,洋,洋盐，但极,不,不稳定，加,水,水即可分解,。,。,在浓硫酸中,生,生成的洋盐,常,常表现特殊,的,的颜色，可,用,用于鉴别。,黄酮、黄酮,醇,醇黄,橙,橙色，并有,荧,荧光,二氢黄酮,橙红冷,、紫红,热,热,查耳酮,橙,橙红洋红,异黄酮二,氢,氢黄,色,色,橙酮 , 红洋,红,红,第三十六页,，,，共一百一,十,十一页。,四、显色反,响,响(一),复,复原反响,1. 盐酸-镁粉盐,酸,酸-锌粉,反,反响鉴,定,定,黄酮、黄酮,醇,醇及二氢黄,酮,酮、二氢黄,酮,酮醇,橙红-紫红,色,色,B环有-OH或OCH3取代时，,颜,颜色随之加,深,深,查耳酮、橙,酮,酮、儿茶素,但遇浓HCL色变，需,做,做空白对照,异黄酮,个,个别阳性，,大,大多阴性,第三十七页,，,，共一百一,十,十一页。,2. 四氢,硼,硼钠钾,反,反响专,属,属鉴别,二氢黄酮类,),红,红-紫色,其 它,取样品10mg溶于甲,醇,醇，加NaBH4 10mg，再,滴,滴加1%浓,盐,盐酸或浓硫,酸,酸，呈红-,紫,紫色。,3.磷钼酸,试,试剂反响,二氢黄酮类,棕褐色,第三十八页,，,，共一百一,十,十一页。,二金属,盐,盐类试剂的,络,络合反响,黄酮类化合,物,物分子结构,中,中多有一下,结,结构，常可,与,与铝盐、铅,盐,盐、锆盐、,镁,镁盐等试剂,生,生成有色络,合,合物。,1. 铝盐,常用试剂：,1%AlCl,3,或 Al(NO,3,),3,生成络合物,为,为,黄色(,max=415nm),，,，并有荧光,。,。,第三十九页,，,，共一百一,十,十一页。,络合物稳定,性,性次序：,3-OH,4-酮基络,合,合物5-OH,4-,酮,酮基络合物,第四十页，,共,共一百一十,一,一页。,第四十一页,，,，共一百一,十,十一页。,三硼酸,显,显色反响,当黄酮类化,合,合物分子中,适,适当位置上,有,有羟基时，,在,在无机酸或,有,有机酸存在,条,条件下，可,与,与硼酸反响,生,生成六元环,络,络合物，呈,亮,亮黄色,条件：,1 具有以,下,下结构5-羟基黄酮,，,，2-羟,基,基查耳酮,2 有无机,酸,酸或有机酸,存,存在,在草酸存在,下,下，显黄色,并,并带绿色荧,光,光。,在枸橼酸丙,酮,酮存在条件,下,下，只显黄,色,色而无荧光,。,。,第四十二页,，,，共一百一,十,十一页。,四碱性,试,试剂显色反,响,响,日光及紫外,光,光下，通过,纸,纸斑反响，,观,观察样品用,碱,碱性试剂处,理,理后的色变,情,情况。,1. 二氢,黄,黄酮类,易在碱液中,开,开环，转变,成,成相应异构,体,体(查耳酮,类,类化合物),，,，显橙-红,色,色。,2. 黄酮,醇,醇类,在碱液中先,呈,呈黄色，通,入,入空气后变,为,为棕色,据此可,与,与黄酮类区,别,别。,3. 黄酮,类,类,当分子中有,邻,邻二酚羟基,取,取代或3,4-二羟,基,基取代时，,在,在碱液中不,安,安定，很快,氧,氧化，由黄,色,色深红色,绿棕色沉,淀,淀。,第四十三页,，,，共一百一,十,十一页。,(五)与五,氯,氯化锑的反,响,响,查耳酮的CCl4溶液,红或紫,红,红沉淀,黄酮、黄酮,醇,醇、二氢黄,酮,酮类黄-橙黄色。,六Gibbs反响,5-OH对位未被,取,取代的黄酮,。,。,将样品溶于,吡,吡啶中，参,加,加Gibbs试剂显蓝,或,或蓝绿色。,Gibbs,试,试剂:,甲液：0.5%2,6-二氯苯醌-4氯亚胺,的,的乙醇溶液,。,。,乙液：硼酸-氯化钾-,氢,氢氧化钾缓,冲,冲液(pH9.4),第四十四页,，,，共一百一,十,十一页。,鉴别以下化,合,合物,1.,Molish反响,(+),C,(-),A B,锆盐枸橼,酸,酸,黄色褪去,A,黄色不褪,B,第四十五页,，,，共一百一,十,十一页。,鉴别以下化,合,合物,2.,第四十六页,，,，共一百一,十,十一页。,第三节,黄,黄酮类,化,化合物的提,取,取别离,一、提取,根据化合物,极,极性不同，,溶,溶解性不同,，,，采用不同,溶,溶剂提取。,1.苷元,多用CHCl3、Et,2,O、EtOAc等极性,较,较小有机溶,剂,剂提取,对于多OCH,3,化的成分，,用,用苯、石油,醚,醚提取；,对于极性大,的,的成分，如,查,查耳酮、橙,酮,酮、双黄酮,、,、羟基黄酮,等,等，用EtOAc、EtOH、Me,2,CO、MeOH等溶剂,提,提取。,第四十七页,，,，共一百一,十,十一页。,2. 苷类,水或热,水,水提取，,多,多糖苷在热,水,水中溶解度,较,较大，在冷,水,水中溶解度,较,较小；,也可用EtOH、MeOH、EtOAc,提,提取。,3. 含酚,羟,羟基的苷或,苷,苷元，可用,碱,碱水或碱性,醇,醇提取。,第四十八页,，,，共一百一,十,十一页。,二、粗提物,的,的精制处理,1溶剂萃,取,取法,黄酮与杂质,别离依据：,成,成分之间,苷,苷与苷元,之,之间,的,的极性差异,苷元与苷元,石油醚液,乙,乙醚,液,液 乙,酸,酸乙酯,水,水饱,和,和正丁醇,母,母液,叶绿素、,油,油脂素,蛋,白,白质、糖等,等脂,溶,溶性,杂,杂质,回,回,收,收,回,回,收,收,减,减,压,压回,收,收,水,水,溶,溶性,杂,杂质),苷元,单,单,糖,糖苷,多,多糖,苷,苷,原料,的,的提,取,取浓,缩,缩液,水,溶,溶液,第四,十,十九,页,页，,共,共一,百,百一,十,十一,页,页。,2,碱,碱水,提,提酸,沉,沉淀,法,法,适用,于,于含,酚,酚羟,基,基的,化,化合,物,物，,此,此类,易,易溶,于,于碱,水,水，,故,故可,用,用碱,水,水提,取,取，,再,再将,碱,碱水,提,提取,液,液调,成,成酸,性,性，,黄,黄酮,类,类即,可,可沉,淀,淀析,出,出。,本卷,须,须知,：,：,酸,碱,碱度,不,不宜,过,过大,防止,在,在强,碱,碱性,、,、加,热,热条,件,件下,，,，破,坏,坏黄,酮,酮母,核,核；,酸化,时,时酸,性,性也,不,不易,过,过强,，,，以,免,免生,成,成佯,盐,盐使,析,析出,黄,黄酮,又,又溶,解,解了,邻,二,二酚,羟,羟基,的,的保,护,护,碱性,条,条件,下,下，,邻,邻二,酚,酚羟,基,基易,被,被氧,化,化，,加,加硼,砂,砂保,护,护,加,石,石灰,乳,乳可,除,除去,果,果胶,、,、粘,液,液等,水,水溶,性,性酸,性,性杂,质,质,可,可,使,使,含,含,羟,羟,基,基,的,的,杂,杂,质,质,生,生,成,成,钙,钙,盐,盐,沉,沉,淀,淀,第,五,五,十,十,页,页,，,，,共,共,一,一,百,百,一,一,十,十,一,一,页,页,。,。,3,炭,炭,粉,粉,吸,吸,附,附,法,法,适,用,用,于,于,苷,苷,类,类,的,的,精,精,制,制,工,工,作,作,。,。,植,物,物,的,的,甲,甲,醇,醇,提,提,取,取,液,液,加,加,活,活,性,性,炭,炭,至,至,吸,吸,附,附,完,完,全,全,，,，,过,过,滤,滤,，,，,得,得,吸,吸,附,附,苷,苷,的,的,活,活,性,性,炭,炭,粉,粉,末,末,。,。,依,次,次,用,用,沸,沸,甲,甲,醇,醇,、,、,沸,沸,水,水,、,、7%,酚,酚/,水,水,、,、15%,酚,酚/,醇,醇,洗,洗,脱,脱,，,，,分,分,步,步,收,收,集,集,、,、,检,检,查,查,、,、,合,合,并,并,。,。,大,局,局,部,部,苷,苷,类,类,可,可,用,用7%,酚,酚/,水,水,洗,洗,下,下,，,，,经,经,减,减,压,压,浓,浓,缩,缩,至,至,小,小,体,体,积,积,，,，,乙,乙,醚,醚,除,除,酚,酚,，,，,余,余,下,下,水,水,层,层,经,经,减,减,压,压,浓,浓,缩,缩,得,得,较,较,纯,纯,黄,黄,酮,酮,苷,苷,。,。,第,五,五,十,十,一,一,页,页,，,，,共,共,一,一,百,百,一,一,十,十,一,一,页,页,。,。,吸,附,附,原,原,理,理,异,异,黄,黄,酮,酮,、,、,二,二,氢,氢,黄,黄,酮,酮,醇,醇,氯,氯,仿,仿-,甲,甲,醇,醇,不,不,同,同,比,比,例,例,105,，,，,高,高,度,度,甲,甲,基,基,化,化,或,或,乙,乙,酰,酰,化,化,黄,黄,酮,酮,醇,醇,混,混,合,合,溶,溶,剂,剂,洗,洗,脱,脱,活,化,化,极,极,性,性,小,小,加,加,水,水,失,失,活,活,或,或,不,不,活,活,化,化,极,极,性,性,大,大,80:20:1,等,等,比,比,例,例,1,硅,硅,胶,胶,柱,柱,色,色,谱,谱,2,氧,氧,化,化,铝,铝,柱,柱,色,色,谱,谱,少,少,具,有,有3-OH,或,或5-OH,、,、4-,羰,羰,基,基,及,及,邻,邻,二,二,酚,酚,羟,羟,基,基,黄,黄,酮,酮,类,类,化,化,合,合,物,物,与,与,铝,铝,离,离,子,子,络,络,和,和,而,而,被,被,牢,牢,固,固,吸,吸,附,附,，,，,难,难,于,于,洗,洗,脱,脱,。,。,三,、,、,别,别,离,离,一,一,柱,柱,色,色,谱,谱,法,法,分,配,配,原,原,理,理,多,多,羟,羟,基,基,黄,黄,酮,酮,醇,醇,或,或,黄,黄,酮,酮,苷,苷,类,类,氯,氯,仿,仿-,甲,甲,醇,醇-,水,水,第,五,五,十,十,二,二,页,页,，,，,共,共,一,一,百,百,一,一,十,十,一,一,页,页,。,。,3.,聚,聚,酰,酰,胺,胺,层,层,析,析(,适,适,用,用,于,于,别,别,离,离,醌,醌,、,、,酚,酚,、,、,黄,黄,酮,酮),原,理,理,：,：,酰,酰,胺,胺,羰,羰,基,基,与,与,黄,黄,酮,酮,酚,酚,羟,羟,基,基,形,形,成,成,氢,氢,键,键,缔,缔,合,合,而,而,吸,吸,附,附,，,，,吸,吸,附,附,能,能,力,力,与,与,酚,酚,羟,羟,基,基,多,多,少,少,、,、,位,位,置,置,及,及,介,介,质,质,有,有,关,关,。,。,制,制,备,备,别,别,离,离,洗,脱,脱,剂,剂,：,：,常,常,用,用,水,水-,乙,乙,醇,醇,水,可,可,洗,洗,下,下,非,非,黄,黄,酮,酮,的,的,水,水,溶,溶,性,性,成,成,分,分,及,及,少,少,数,数,黄,黄,酮,酮,苷,；,；10%-30%,醇,醇,可,可,洗,洗,下,下,黄,黄,酮,酮,苷,苷,；,；50-95%,乙,乙,醇,醇,可,可,洗,下,下,黄,黄,酮,酮,苷,苷,元,元,各,种,种,溶,溶,剂,剂,在,在,聚,聚,酰,酰,胺,胺,柱,柱,上,上,洗,洗,脱,脱,能,能,力,力,由,由,弱,至,至,强,强依,次,次,为,为,：,：,水,，,，,甲,甲,醇,醇,，,，,丙,丙,酮,酮,，,，,氢,氢,氧,氧,化,化,钠,钠,水,水,溶,溶,液,液,，,，,甲,甲,酰,酰,胺,胺,，,，,二,二,甲,甲,基,基,甲,甲,酰,酰,胺,胺,，,，,脲,脲,素,素,水,水,溶,溶,液,液,第,五,五,十,十,三,三,页,页,，,，,共,共,一,一,百,百,一,一,十,十,一,一,页,页,。,。,吸,附,附,规,规,律,律,：,：,1,酚,酚,羟,羟,基,基,数,数,目,目,越,越,多,多,，,，,吸,吸,附,附,能,能,力,力,越,越,强,强,。,。,2,酚,酚,羟,羟,基,基,数,数,目,目,相,相,同,同,的,的,情,情,况,况,下,下,，,，,酚,酚,羟,羟,基,基,所,所,处,处,的,的,位,位,置,置,有,有,利,利,于,于,形,形,成,成,分,分,子,子,内,内,氢,氢,键,键,，,，,吸,吸,附,附,能,能,力,力,减,减,弱,弱,。,。,3-OH,或,或5-OH,黄,黄,酮,酮,的,的,吸,吸,附,附,力,力,小,小,于,于,其,其,他,他,位,位,置,置-OH,黄,黄,酮,酮,；,；,邻,二,二,酚,酚,羟,羟,基,基,黄,黄,酮,酮,的,的,吸,吸,附,附,力,力,弱,弱,于,于,间,间,位,位,或,或,对,对,位,位,酚,酚,羟,羟,基,基,黄,黄,酮,酮,3,分,分子内,芳,芳香化,程,程度越,高,高，共,轭,轭双键,越,越多，,吸,吸附力,越,越强。,查耳酮,二,二氢黄,酮,酮,4,不,不同黄,酮,酮母核,被,被吸附,强,强弱：,黄,黄酮醇,黄,黄酮 二,氢,氢黄酮,醇,醇 ,异,异黄,酮,酮,5,与,与介质,的,的关系,：,：吸附,力,力,水,水中,甲,甲醇、,乙,乙醇,浓,浓度,由,由低到,高,高,丙,丙酮,碱,碱性溶,剂,剂 ,甲,甲酰,胺,胺 DMF ,尿,尿素,水,水,洗脱规,律,律：与,吸,吸附规,律,律正好,相,相反，,即,即吸附,能,能力越,强,强，越,难,难洗脱,第五十,四,四页，,共,共一百,一,一十一,页,页。,聚酰胺,“,“双重,色,色谱,原,原理,类似正,相,相色谱,类,类,似,似反相,色,色谱,聚酰胺,：,：极性,固,固定相,极性,酰,酰胺基,团,团,非,非极性,固,固定相,非极,性,性脂肪,链,链,洗脱剂,：,：有机,溶,溶剂,氯,氯仿-,甲,甲醇，,极,极性小, 含,水,水溶剂,甲醇-水，,极,极性大,先洗脱,：,：苷元,苷,苷,叁,叁糖,苷,苷 ,双,双糖,苷,苷 ,单,单糖,苷,苷 ,苷,苷元,柱色,谱,谱别离,Rf值,：,：,苷,苷元 苷,苷,苷元,流,流动相,Rf规律：,极,极性小的化,合,合物Rf大,极,极,性,性大的化合,物,物Rf大,苷元0.7以上,单,单糖苷双,糖,糖苷0.7以下,苷元中，平,面,面型分子,非,非平面型分,子,子Rf规律与,左,左边相反,母核相同，,一,一OH二OH三OH四OH五OH黄,酮,酮,苷元的别离,鉴,鉴别,黄,黄酮苷及花,色,色素类,第六十一页,，,，共一百一,十,十一页。,2. 薄层,层,层析(TLC),硅胶薄,层,层,用于弱极性,黄,黄酮。,聚酰胺,层,层析,适用范围广,，,，可别离含,游,游离酚羟基,或,或其苷类。,各种色谱的,检,检识：,日光下观察,多数黄酮,有,有黄色斑点,紫外光下观,察,察多数黄,酮,酮呈黄绿色,荧,荧光斑点,氨蒸气熏,多,多数黄酮有,颜,颜色变化,喷显色剂2%AlCl3甲醇液,多数黄,酮,酮黄色变,深，荧光加,强,强,第六十二页,，,，共一百一,十,十一页。,二、紫外光,谱,谱在黄酮类,鉴,鉴定中的应,用,用,可用于确定,黄,黄酮母核类,型,型及确定某,些,些位置是否,含,含有羟基。,一般程序：,测定样品,在,在甲醇中的UV谱以了,解,解母核类型,；,；,在甲醇溶,液,液中分别参,加,加各种诊断,试,试剂后测UV谱以了解3,5,7,3,4,有无羟基,及,及邻二酚羟,基,基；,常用的诊断,试,试剂有甲醇,钠,钠NaOMe、醋,酸,酸钠NaOAc、,醋,醋酸钠/硼,酸,酸NaOAc/H3BO3、,三,三氯化铝AlCl3,及三氯化,铝,铝/盐酸AlCl3/HCl,等,等,苷类可水,解,解后或先,甲,甲基化再水,解,解，再用,上,上法测苷元,的,的UV谱以,了,了解糖的连,接,接位置。,第六十三页,，,，共一百一,十,十一页。,一在甲,醇,醇溶液中的,紫,紫外光谱,多数黄酮类,化,化合物由两,个,个主要吸收,带,带组成：,带300-400nm,由,由B环桂皮,酰,酰基系统引,起,起，主要反,响,响B环取代,情,情况；,带220-280nm,由A环苯,甲,甲酰基系统,引,引起，主要,反,反响A环取,代,代情况,第六十四页,，,，共一百一,十,十一页。,1黄酮,、,、黄酮醇：,在200-400 nm之间出现,两,两个主要吸,收,收峰，二者,峰,峰形相似，,但,但带位置,不,不同，可据,此,此进行分类,。,。,母核上如7-及4位,引,引入羟基、,甲,甲氧基等供,电,电基取代,相应吸,收,收带红移,通常整个母,核,核上氧取代,程,程度越高，,带,带越向长,波,波方向位移,。,。,带的峰位,主,主要受A-,环,环氧取代程,度,度的影响，,但,但B-环的,取,取代基可影,响,响它的形状,。,。当B环有3，4-二氧取代,时,时，带将,为,为双峰。,第六十五页,，,，共一百一,十,十一页。,2查耳,酮,酮及橙酮类,：,：,共同特征是,带,带强，为,主,主峰；带,较,较弱，为次,强,强峰。,查耳酮：带,位于220270nm；,带位于340390 nm；,橙酮：常显,现,现34个,吸,吸收峰，但,主,主要吸收峰,一,一般位,于370430 nm。,3异黄,酮,酮、二氢黄,酮,酮及二氢黄,酮,酮醇,有由A-环,苯,苯甲酰系统,引,引起的带,吸,吸收,但因B环不,与,与吡喃酮环,上,上的羰基共,轭,轭或共轭,很,很弱，故,带,带很弱。,二氢黄酮,醇,醇,异,异黄酮,第六十六页,，,，共一百一,十,十一页。,带II(240-285nm)（苯甲酰系统）,带I(300-400nm) 桂皮酰系统,类 型,说 明,250-285,304-350,黄酮类,-OH越多，带I、II越红移；B环3,4有-OH基，带II为双峰（主峰伴肩峰）,328-357,黄酮醇类(3-OR),352-385,黄酮醇类(3-OH),245-270,异黄酮,B环上有-OH, OCH3对带I影响不大,270-295,二氢黄酮（醇）,220-270(较弱),340-390 或340-390(Ia)和300-320(Ib),查耳酮类,查耳酮2或4-OH使带I红移,370-430(3-4个小峰),橙酮类,第六十七页,，,，共一百一,十,十一页。,第六十八页,，,，共一百一,十,十一页。,2参加诊,断,断试剂后引,起,起的位移及,结,结构测定,P191,表,表511,第六十九页,，,，共一百一,十,十一页。,诊断试剂,带II,带I,说明,样品+MeOH,250-285,304-385,两峰强度基本相同，具体位置与母核上电负性取代基(-OH, -OCH3)有关，-OH, -OCH3越多，越红移,NaOMe,红移40-60nm（强度不变）,有4-OH,红移50-60nm（强度下降）,有3-OH，无4- OH,带I，II随加NaOMe时间延长，逐渐衰减,有3,4-OH或3,3,4-OH等（对碱敏感）,NaOAc (未熔融),红移5-20nm,长波一侧有肩峰,7-OH,有4OH，但无3-OH或7-OH,NaOAc (熔融),红移40-65nm（强度下降）,4OH,随时间而衰退,有3,4-OH或3,3,4-OH等（对碱敏感）,第七十页，,共,共一百一十,一,一页。,诊断试剂,带II,带I,说明,NaOAc/ H,3,BO,3,红移1230nm,B环有邻二酚羟基,红移510nm,A环有6,7-OH或7,8-OH (5,6-OH无),AlCl,3,及AlCl,3,/HCl,AlCl3/HCl图AlCl3图,无邻二酚羟基,AlCl3/HCl图AlCl3图,有邻二酚羟基,紫移3040nm,B环有邻二酚羟基,紫移5065nm,A、B环均可能有邻酚二羟基,AlCl3/HCl图MeOH图,无3及5OH,AlCl3/HCl图MeOH图,可能有3及或5OH,红移3555nm,有5OH,红移60nm,有3OH,红移5060nm,可能同时有3及5OH,红移1720nm,除有5OH外还有6含氧取代,第七十一页,，,，共一百一,十,十一页。,说明：,1+NaOMe碱,性,性强,所,所有酚OH,解,解离，红移,另有有3,4-OH,或,或3,3,4-OH时，在NaOMe作,用,用下易氧化,破,破坏，故峰,有,有衰减。,2NaOAc为弱碱,，,，仅使酸性,较,较强者，如7,4-OH解离。,第七十二页,，,，共一百一,十,十一页。,3与ALCL3形成,络,络合物的能,力,力：,3-OH黄,酮,酮醇 5-OH黄,酮,酮 邻二,酚,酚羟基 5-OH,二,二氢黄酮醇,不在酸性条,件,件下，五者,皆,皆与Al3+络合,但酸性条件,下,下，邻二酚,羟,羟基和5-OH二氢黄,酮,酮醇不与AlCl3络,合,合,二者相减可,检,检测邻二酚,羟,羟基。,形成络合,物,物越稳定,，,，红移越,多,多。,第七十三,页,页，共一,百,百一十一,页,页。,A 环质,子,子B,环,环质子C环质子,糖,糖上质,子,子,取,取代基,团,团质子,芳环质子,芳,芳环质,子,子,与类型有,关,关,端基质子-OH,、,、-CH,3,、,其它质子-OCH,3,、,-OCOCH3,黄酮类化,合,合物各质,子,子的信号,特,特征,、,、峰形状,、,、J、峰,面,面积,A-H,5.77.1,常见5，7-二OH或7-OH取代,B-H,6.57.9,常见4-氧代或3、4,-二氧,代,代,glu,H-1, 位于,低,低场,较大4.85.70ppm,三、1H-NMR,第七十四,页,页，共一,百,百一十一,页,页。,一A,环,环质子,15,7-二OH黄酮,H-6及H-8,5.76.9,J=2.5Hz二重,峰,峰,H-6较H-8在,高,高场,7-OH,成,成苷时，,那,那么H-6及H-8信号均,向,向低场位,移,移。,第七十五,页,页，共一,百,百一十一,页,页。,1) 黄,酮,酮醇,及,及异黄酮,：,：,H-6(6.06.2,d,J=2.5Hz),；,；,H-8(6.36.5,d,J=2.5Hz),7-O-,糖,糖苷：H-6(6.26.4,d, J=2.5Hz)；,H-8(6.56.9,d,J=2.5Hz),2) 二,氢,氢黄酮及,二,二氢黄酮,醇,醇：,H-6(5.75.9,d,J=2.5Hz),；,；,H-8(5.96.1,d,J=2.5Hz),7-O-,糖,糖苷：H-6(5.96.1,d, J=2.5Hz)；,H-8(6.16.4,d,J=2.5Hz),第七十六,页,页，共一,百,百一十一,页,页。,27-OH黄酮,H-5较H-6、H-8低,场,场,，是由于,羰,羰基的负,屏,屏蔽效应,的,的影响。,H-6、H-8较5, 7-二OH,黄,黄酮中处,于,于低场，,且,且相互位,置,置可能颠,倒,倒。,第七十七,页,页，共一,百,百一十一,页,页。,1黄酮,、,、黄酮醇,及,及异黄酮,：,：,H-57.98.2,d,J=9.0Hz,H-66.77.1,dd,J=9.0,2.5Hz,H-86.77.0,d,J=2.5Hz),2二氢,黄,黄酮及二,氢,氢黄酮醇,：,：,H-5(7.77.9,d,J=9.0Hz),H-6(6.46.5,dd,J=9.0,2.5Hz),H-8(6.36.4,d,J=2.5Hz),第七十八,页,页，共一,百,百一十一,页,页。,二B环,质,质子,14-氧取代,黄,黄酮类化,合,合物,6.5-8.1,C环对H-2,6的,负,负屏蔽作,用,用大于对H-3, 5,；,；,H-3, 5,受,受4-OR的屏,蔽,蔽作用,H-2, 6,较,较H-3, 5,处于低,场,场,；,C环氧化,程,程度越高,，,，H-2, 6,处于越,低,低场的位,置,置。,H-3, 5,6.5-7.1,d,J=8.5Hz,H-2, 6,7.1-8.1,d,J=8.5Hz,第七十九,页,页，共一,百,百一十一,页,页。,H-2, H-6,7.1,8.1(d,J=79Hz),与C环有,关,关，据此,可,可判断C,环,环氧化程,度,度。,二氢黄酮,类,类(7.17.3, d);,二氢黄酮,醇,醇类(7.27.4,d);,异黄酮类(7.2,7.5, d),；,；,查耳酮类H-2,H-6(7.47.6, d);,橙酮类(7.67.8,d)；,黄酮类(7.77.9,d);,黄酮醇类(7.9,8.1, d),第八十页,，,，共一百,一,一十一页,。,。,23, 4-二氧取,代,代黄酮类,化,化合物,H-2,受,受C环负,屏,屏蔽和3,-OR,屏,屏蔽作用,，,，,H-6,也,也受C,环,环负屏蔽,作,作用，,H-5,那,那么仅4,-OR,屏,屏蔽作用,故由低场,到,到高场的,顺,顺序为：H-6, H-2 H-5,。,。,13, 4,-二氧,取,取代黄酮,及,及,黄,黄酮,醇,醇,H-5,6.7-7.1d,J=8.5Hz,H-2,7.2-7.9d,J=2.5Hz,H-6,7.2-7.9dd,J=2.5,8.5Hz,第八十一,页,页，共一,百,百一十一,页,页。,23, 4,-二氧,取,取代异黄,酮,酮、二氢,黄,黄酮及二,氢,氢黄酮醇,H-2, 5,6常,作,作为一个,复,复杂多重,峰,峰通常,为,为两组峰, 6.7-7.1,3,3,4,5,-,三,三,氧,氧,取,取,代,代,黄,黄,酮,酮,类,类,化,化,合,合,物,物,假,设,设R1=R2=R3=H,，,，,那,那,么,么H-2,6,为,为,单,单,峰,峰,，,，,6.7-7.5,假,设,设,上,上,述,述,条,条,件,件,不,不,成,成,立,立,，,，,那,那,么,么H-2,6,分,分,别,别,为,为,二,二,重,重,峰,峰,J=2Hz,第,八,八,十,十,二,二,页,页,，,，,共,共,一,一,百,百,一,一,十,十,一,一,页,页,。,。,三,三,C,环,环,质,质,子,子,C,环,环,特,特,征,征,是,是,区,区,别,别,各,各,类,类,型,型,黄,黄,酮,酮,类,类,化,化,合,合,物,物,的,的,主,主,要,要,依,依,据,据,1.,黄,黄,酮,酮,类,类,H-3,6.3,s,第,八,八,十,十,三,三,页,页,，,，,共,共,一,一,百,百,一,一,十,十,一,一,页,页,。,。,2.,异,异,黄,黄,酮,酮,类,类,H-2,位,位,于,于,羰,羰,基,基,位,，,，,同,同,时,时,受,受,羰,羰,基,基,和,和,苯,苯,环,环,的,的,负,负,屏,屏,蔽,蔽,作,作,用,用,，,，,且,且,通,通,过,过,碳,碳,与,与,氧,氧,相,相,连,连,，,，,故,故,较,较,一,一,般