分子生物学课件第十四章

,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,分 子 生 物 学 实 验,分子生物学实验综合规程,分子生物学实验常用仪器设备,分子生物学基本技术,实验准备,分子生物学实验综合规程,上课时间提前5分钟进入实验室；不迟到、不早退，无故旷课累计3次没成绩；,请假须医院病假条或班主任签字的假条；,上课时需穿实验服，不许在实验室内吃东西，不背着书包做实验，不穿拖鞋进实验室；,实验课期间不许打闹、闲聊等，不大声喧哗，保持课堂纪律，,实验过程中，至始至终需全组同学一起完成，任何人中途不得缺席。,必须做到课前认真预习，课间做好实验记录、课后详细总结实验结果并按时提交实验报告；,公用试剂不得污染！每次都必须用新枪头。公用台上公用试剂不得私自拿到自己实验台上；,不得私自拿走或乱放别人的实验物品、实验产品；,不得擅自使用实验室中非本实验仪器、试剂。,实验废液不随便倾倒，,随时保持实验台的整洁；,爱护实验器材，实验器材损坏必须按规定赔偿；,实验前按仪器性能与要求，进行仪器预热；,实验完成后检查电源插座，用完仪器后必须复位，仪器清洁干净、摆放整齐；,每组实验物品齐全，需教师验收，枪量程要归位，发现问题及时报修；,每位同学负责自己实验台面和柜体的卫生，值日生负责公用实验台、地面等处卫生；,每次轮到打扫卫生的小组，要认真做好值日工作，离开实验室须向教师声明；,同学与老师之间、同学与同学之间、实验班与实验班之间一定要互相协作配合保持公用房间卫生，注意门窗水电的安全。,遵守通用的实验室规则。,违反上述任何一条规则责任自负，并要扣分，造成损失要照价赔偿。,实 验 成 绩,实验技能 20分,实验报告 20分,实验态度 15分,实验室常识 15分,实验实施 30分,分子生物学实验教程 自编,分子生物学实验指导,魏群 高等教育出版社,分子生物学实验指导 刘进元 清华大学出版社,参 考 书,实 验 内 容,实验一 分子生物学实验的基本知识和基本技能培训,实验二 大肠杆菌感受态细胞的制备,实验三 质粒,DNA,的转化,实验四,碱裂解法提取,质粒,DNA,实验五 琼脂糖凝胶电泳检测,DNA,实验六,PCR,基因扩增,分子生物学实验综合规程,分子生物学实验,常用仪器设备,分子生物学基本技术,4,实验准备,样品、试剂和材料等的保存,温度控制系统-冰箱：4,、-20,、-70,纯 水 器,恒温培养箱,细菌平板的培养,恒温空气摇床,菌体的培养,灭菌器,培养基、试剂、耗材等的灭菌,PCR 仪,PCR 扩增、保温实验等,恒温水浴及微量加热器,保证实验温度的恒定,电 泳 仪,电泳时提供电压和电流,电泳槽,核酸或蛋白质的电泳定性分析时的凝胶支架,凝胶成像系统,电泳结果的定性和定量分析,紫外分析仪,电泳结果的定性分析,台式高速冷冻离心机,样品的分离,落地式高速冷冻离心机,样品的分离,分光光度计,样品的定量测定,超净工作台,提供洁净工作环境,电子天平,样品、试剂等的称量,精确的pH值测定,pH 计,液体试剂的精确取量,移 液 器,制冰机,分子生物学实验综合规程,分子生物学实验,常用仪器设备,分子生物学基本技术,3.1,实验规范训练仪器的操作,3.2,实验规范训练量程的选择,3.3,实验规范训练标签,3.4,实验规范实验操作,4,实验准备,3.1 实验规范训练仪器的操作,要求：,仪器在未经培训前，不得擅自使用,严格按操作规程使用仪器，,有些仪器必须有教师在场时才能使用，并由教师操作,违反规定的使用者，造成的后果由使用者承担,3.2 实验规范训练量程的选择,天平,烧杯、量筒、容量瓶、试剂瓶不同规格,量程的选择移液器,3.3 实验规范训练标签,所用的器皿上一定要做标记,标签一定要贴到固定的位置,标签上应包括具体的名称、组别、实验班、日期,3.4 实验规范实验操作,详细记录和分析实验结果并按时提交实验报告,实验中一定要处处用心、勤动手，多问为什么,仔细操作和观察,保留好每一步的实验样品，在确准的情况下才能当废液扔掉,分子生物学实验综合规程,分子生物学实验常用仪器设备,分子生物学基本技术,实验准备,4.1,清点和熟悉常用玻璃器皿、耗材等,4.2,洗涤本学期实验用玻璃器皿,4.3,配制试剂,4.4,高温灭菌,4 实验准备,4.1 清点和熟悉常用玻璃器皿、耗材等,4.1 洗涤本学期实验用玻璃器皿,4.3 配制试剂,1）0.1 mol/L CaCl,2,100 mL,2）5 mol/L NaOH 100 mL,胶塞,3）LB液体培养基 100 mL,胰蛋白胨（typtone)1g,酵母提取物（yeast extract)0.5g,NaCl 1g,加部分水溶解后加20,L 5 mol/L NaOH，定容到100 mL,4）10%(w/v)SDS储液 50 mL，,室温保存,5）1 mol/L Tris 200 mL,6）2 mol/L HCL 100 mL,7）0.5 mol/L EDTA 100 mL,80 mL水中加18.61g EDTA-Na,2,H,2,O，用NaOH调 pH 8（约需2g NaOH），后定容至100 mL,8）5xTAE 1000 mL,9）70%乙醇 500 mL,10）Amp：100 mg/mL 20ml，分装每管 1 mL，20,0,C保存,4.4 高温灭菌,LB,液体培养基,1.5mL,离心管,2,瓶,/,组,枪头,/1,组：,1mL 1,盒，,200uL 1,盒,培养皿,12,套,/,组,无菌水,100,mL,/,班,0.1 mol/L CaCl,2,