大实验三米曲霉固体发酵制曲

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,大实验三 米曲霉固体发酵制曲,1、,学习固体发酵工艺,2、,制备米曲霉固体曲，测定蛋白酶活力,实验目的要求,实 验 原 理,实 验 步 骤,1、制备麸皮固体培养基：,25g麸皮，加15ml水（加水量40%60%），拌匀；,装茄瓶。,2、灭菌：,0.1Mpa 灭菌2030min，冷却至室温。,已培养好的米曲霉孢子斜面一支，加入约10ml无菌水，洗下孢子，制成孢子悬液。,注意：勿使孢子飘落实验室,3、制备孢子悬液菌种：,实验步骤(continued),实验步骤(continued),每茄瓶加入孢子悬液,2ml,，抖动茄瓶，使孢子悬液与麸皮培养基混匀。,4、接种：,28,培养,4,天,其间，于接种,24,48h,左右抖动茄瓶翻曲一次,观察记录菌丝生长及孢子形成情况,5、培养：,实验步骤(continued),另一次实验,实验步骤(continued),6、蛋白酶活力测定：,1）粗酶液制备：,向一茄瓶中加入无菌水约,100ml,，浸泡固体曲,1h,；过滤得粗酶液。,2）倒平板：,融化酪蛋白明胶双基质固体培养基，每人倒一平板。,实验步骤(continued),3）打孔：,打孔器经酒精燃烧灭菌后，每平板打,1,3,孔，并在酒精灯火焰上稍稍加热打孔处，使孔周围的培养基微融，然后平放冷却。,4）加样：,往孔内加入粗酶液适量（约,100ul,），可设对照。,实验步骤(continued),5）培养（反应）：,将加样后的平板小心平端放入,30,培养箱，放置,20,小时左右。,6）观察结果：,可直接观察透明圈有无、测定透明圈直径；也可向平板滴加少量,10%,三氯乙酸，以增强观察效果。,实验结果,实验报告,1、实验原理、方法步骤、结果及分析,2、思考题,准 备：,1、10%,三氯乙酸,2、双基质固体培养基,（以对应的,L-R,组配制，每,L-R,组配,400ml,，分装,3,瓶）,配方：,10g,干酪素，,10g,明胶，,18g,琼脂，,1000ml,，,pH7.0,配法：,干酪素先用,0.2N NaOH,溶解，倒入热水中加热搅拌至完全溶解；适量,1N HCl,调至,pH7.0,；加入明胶和琼脂，继续加热至完全融化。,附：,大实验四“苏云金芽孢杆菌（,Bacillus thuringiensis;B.t,）杀虫剂液体摇瓶发酵”方案设计,研究内容：1）培养基组成对B.t芽孢形成的影响,2）通气状况对B.t芽孢形成的影响,以实验小组为单位，根据研究内容自行查阅资料，拟定实验方案，于下次实验课提交教师审阅、修改、确定实验方案。,