临床常见病原体检测课件

单击此处编辑母版标题样式,编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,文章如果有不当或者不妥的地方，请您联系我修改文章或者删除文章，文章来源于网络收集，如果有侵权的问题，请联系我沟通协调改正，非常感谢您！,单击此处编辑母版标题样式,编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,配套题库请下载,医学猫,APP,，,执业、三基、规培、主治、卫生资格、正副高等题库都已入库。,文章如果有不当或者不妥的地方，请您联系我修改文章或者删除文章，文章来源于网络收集，如果有侵权的问题，请联系我沟通协调改正，非常感谢您！,临床常见病原体检测,临床常见病原体检测,第1页,第一节 标本采集运输、试验室评价和检验方法,第二节 病原体耐药性检测,第三节 临床感染常见病原体检测,第四节 病毒性肝炎检测,第五节 性传输疾病病原体检测,第六节 医院感染常见病原体检验,临床常见病原体检测,第2页,重点难点,熟悉,了解,掌握,临床病原体检验标本采集运输及试验室质量评定标准,；,各种病原体检验结果临床意义。,医院感染概念及监控方法；,病原体耐药性概念及临床常见耐药株。,病原体常规检验项目和特殊检验方法,。,临床常见病原体检测,第3页,标本采集运输、试验室评价和检验方法,一,临床常见病原体检测,第4页,1.,采血时机,普通在发烧早期、寒颤时或发烧高峰到来前0.51小时采集血培养标本,，,对,已应用抗菌药品治疗者,，,应在下次用药前采集。,（一）,血液,2.,皮肤消毒,三步消毒法：70%乙醇30秒；1%2%碘酊1分钟；第三步70%乙醇擦拭皮肤30秒。,诊疗学（第,9,版）,一、,标本采集和运输,3.,采血部位及采血量,肘静脉,，,成人每次1020 ml,，,需氧瓶和厌氧瓶各一瓶；婴儿和儿童15ml,，,两个儿童瓶。,（二）,尿液,清洁,中段尿约1020 ml于灭菌容器内。,（三）,粪便,取含脓、血或黏液粪便置于清洁容器。,临床常见病原体检测,第5页,合格痰标本,：,低倍镜视野中鳞状上皮细胞,10个、白细胞,25个,（四）,呼吸道标本,诊疗学（第,9,版）,（五）,脑脊液与其它无菌体液,1.脑脊液,应马上保温送检或床边接种,2.胸水、腹水和心包液,宜采集较大量标本送检,，,可接种于血培养瓶,3.腹膜透析液,含菌量非常低,，,最少需采集50ml,（六）,眼、耳部标本,1.眼部标本,运输拭子,或,角膜刮屑,2.中耳标本,运输拭子采样,临床常见病原体检测,第6页,采集,尿道口分泌物、外阴糜烂面病灶边缘分泌物、阴道宫颈口分泌物和前列腺液等,（七）,生殖道标本,诊疗学（第,9,版）,（八）,创伤、组织和脓肿标本,1.开放性脓肿,用无菌拭子采集病灶边缘及深个别泌物,，,或采集组织标本,2.封闭性脓肿,则以无菌干燥注射器穿刺抽取脓肿边缘及底部脓汁,（九）,血清,用于检测,病人,产生特异性抗体效价以辅助诊疗感染性疾病,临床常见病原体检测,第7页,标本送至病原体试验室后,，,工作人员应对标本信息、采集方式、采集部位、运输方式等各方面进行质量评定,，,决定是否接收标本进行下一步检测或提议重新采集以确保检测结果准确性。质量不合格标本得出结果会给医生提供错误信息,，,造成误诊和治疗不妥。所以,，,试验室必须遵照严格标本接收和拒收准则。,取材尤其困难、储存运输条件简陋等情况下,，,即使标本质量不符合要求也必须要作检测。,诊疗学（第,9,版）,二、标本试验室质量评定标准,临床常见病原体检测,第8页,诊疗学（第,9,版）,三、检 查 方 法,（一）直接显微镜检测,1.涂片染色显微镜检验,观察细菌形态、染色性或观察宿主细胞内包涵体特征,2.涂片不染色显微镜检验,观察病原菌生长、运动方式、螺旋体形态和运动,3.荧光显微镜检验和免疫电镜检验,荧光显微镜检验结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌和白喉棒状杆菌,；电镜检验用于轮状病毒等病毒颗粒,（二）病原体特异性抗原检测,用已知抗体检测病人血清及其它体液中待测抗原。主要方法：免疫荧光技术、酶联免疫技术、化学发光技术、胶乳凝集试验、对流免疫电泳等,临床常见病原体检测,第9页,诊疗学（第,9,版）,（三）病原体核酸检测,1.,常见方法,聚合酶链反应（PCR）、核酸探针杂交技术和实时荧光定量PCR,2.适用病原体,不能分离培养或难分离培养微生物，如病毒,（四）病原体分离培养和判定,1细菌和真菌感染性疾病病原体分离培养,依据菌落性状、细菌形态和染色性、,生化反应、血清学试验等对分离菌作出判定并做药敏试验,2不能人工培养病原体感染性疾病,标本接种易感动物、鸡胚或适当细胞,临床常见病原体检测,第10页,诊疗学（第,9,版）,（五）血清学试验,1.,常见方法,凝集试验、沉淀试验、补体结合试验、间接免疫荧光技术、放射免疫测,定、酶联免疫吸附试验等,2.,用已知病原体抗原检测,病人,血清中对应抗体,（六）细菌毒素检测,1,.,内毒素,用于革兰氏阴性菌感染快速诊疗，可对病人血液、尿液及脑脊液进行直接检验。,2,.,外毒素,多年来发展生物传感器可检测出fg水平葡萄球菌肠毒素、肉毒毒素和霍乱肠毒素。,临床常见病原体检测,第11页,病原体耐药性检测,二,临床常见病原体检测,第12页,1.,革兰阴性菌,主要是铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、克雷伯菌和肠杆菌属细菌等,（一）耐药病原体,2.,革兰阳性菌,金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌和肠球菌为主,诊疗学（第,9,版）,一、耐药性及其发生机制,（二）耐药机制,2产生灭活抗生素水解酶和钝化酶等,1细菌水平和垂直传输耐药基因整合子系统,3细菌抗生素作用靶位改变,4细菌膜改变和外排泵出系统,5细菌生物膜形成,临床常见病原体检测,第13页,K-B纸片琼脂扩散法,、,稀释法、,浓度梯度纸条扩散法,（,E试验,）、,耐药筛选试验,（一）药品敏感试验,诊疗学（第,9,版）,二、检验项目、结果和临床应用,（二）耐药菌监测试验,1耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）,2高浓度,氨基苷类,耐药肠球菌,3耐青霉素肺炎链球菌（PRSP）,4-内酰胺酶,5超广谱-内酰胺酶（ESBL）,（三）病原体耐药基因检测,临床常见病原体检测,第14页,临床感染常见病原体检测,三,临床常见病原体检测,第15页,感染性疾病,指各种病原体（病原微生物、寄生虫）感染人体后机体组织细胞受到不一样程度损害并出现一系列临床症状和体征。,包含传染性感染疾病（传染病）（communicable infectious diseases）和非传染性感染疾病（non-communicable infectious diseases）,。,诊疗学（第,9,版）,感染性疾病（infectious diseases）,临床常见病原体检测,第16页,1.疾病谱发生变迁,新传染病陆续被发觉,：埃博拉病毒、SARS冠状病毒,2.多重耐药菌不停出现,MRSA、产ESBL菌株、碳青霉烯耐药肠杆菌、多重耐药鲍曼不动杆菌及铜绿假单胞菌等,3.,病人,免疫防御功效降低,器官移植、抗肿瘤化疗和放疗,（一）流行病学,诊疗学（第,9,版）,一、流行病学和临床类型,（二）临床类型,可造成人类感染性疾病病原体约500种以上,，,包含病毒、细菌、真菌、支原体、衣原体、立克次体、螺旋体和寄生虫等。,临床常见病原体检测,第17页,1.,检测细菌或其抗原,主要包含直接涂片显微镜检验、培养、抗原检测与分析,2.,检测抗体,3.,检测细菌遗传物质,主要包含基因探针技术和PCR技术,（一）细菌感染,诊疗学（第,9,版）,二、检验项目和临床应用,（二）病毒感染,1,.,病毒分离培养与判定,2,.,病毒核酸,3,.,抗原检测,临床常见病原体检测,第18页,1.,直接显微镜检验,2.,分离培养及判定,3.,免疫学试验,4,.,动物试验,（三）真菌感染,诊疗学（第,9,版）,（四）寄生虫病,1,.,病原学诊疗,2,.,免疫学诊疗,3,.,其它试验室常规检验,临床常见病原体检测,第19页,1,.,支原体检测,支原体（mycoplasma）是一群介于细菌与病毒之间,，,可经过滤菌器、无细胞壁,，,能在无生命培养基中生长繁殖最小原核微生物,。,2.,螺旋体检测,螺旋体（spirochetes）是一群细长、柔软、运动活泼、呈螺旋状微生物。,3,.,立克次体检测,立克次体（rickettsia）是一类严格细胞内寄生原核细胞型微生物,，,在形态结构、化学组成及代谢方式等方面均与细菌类似,。,4,.,衣原体检测,衣原体（chlamydiae）为专性细胞内寄生物,，,在宿住主细胞内繁殖有特殊生活周期,，,可观察到两种不一样颗粒结构,，,即原体和网状体。,（五）其它病原体感染,诊疗学（第,9,版）,临床常见病原体检测,第20页,1,.,临床标本分离和培养阳性结果最含有诊疗价值,2.,经病原体判定,，,可明确诊疗病原体,种类，,并可作药品敏感试验,3,.,抗原成份检测有利于早期诊疗感染性疾病,4,.,核酸检测已成为当代感染性疾病早期诊疗可靠方法之一,5,.,血清学试验是当前应用最广泛感染性疾病检测方法,（六）试验结果分析和临床应用,诊疗学（第,9,版）,临床常见病原体检测,第21页,病毒性肝炎检测,第四节,临床常见病原体检测,第22页,HAVAg普通于发病前115天可从粪中排出,，,2周后消失,，,临床上不易捕捉到。粪便中HAV或HAV抗原颗粒检测可作为甲肝急性感染证据。,（一）抗原检测,诊疗学（第,9,版）,一、甲型肝炎病毒检测,（二）抗体检测,1,.,抗HAV,-,IgM,在发病后2周抗HAV,-,IgM阳性率为100,，,12个月时可为阴性。,2,.,抗HAV,-,IgA,早期和急性期,，,由粪便中测得抗HAV,-,IgA呈阳性反应,，,是早期诊疗甲肝指标之一。,3,.,抗HAV,-,IgG,阳性出现于恢复期且持久存在,，,是取得免疫力标志,，,提醒既往感染,，,可作为流行病学调查指标。,（三）HAV-RNA测定,HAV-RNA阳性对诊疗尤其对早期诊疗含有特异性。,临床常见病原体检测,第23页,（一）乙肝六项检测,诊疗学（第,9,版）,二、乙型肝炎病毒检测,1,.,HBsAg,阳性见于急性乙肝潜伏期,，,发病时达高峰；假如发病后3个月不转阴,，,则易发展成慢性乙型肝炎或肝硬化。携带者 HBsAg也呈阳性。,2,.,抗-HBs,是保护性抗体,，,可阻止HBV穿过细胞膜进入新肝细胞。抗-HBs普通在发病后36月才出现,，,可连续多年。,3,.,HBeAg,阳性表明乙型肝炎处于活动期,，,并有较强传染性。,4,.,抗-HBe,阳性可见于慢性乙型肝炎、肝硬化、肝癌。,5,.,抗-HBc,抗-HBc总抗体主要反应是抗-HBc,IgG。抗-HBc比HBsAg更敏感,，,可作为HBsAg阴性HBV感染敏感指标。在HBsAg携带者中多为阳性。,6,.,HBcAg,阳性,，,提醒,病人,血清中有感染性HBV存在,，,含量较多表示复制活跃,，,传染性强,，,预后较差。,临床常见病原体检测,第24页,(二)乙型肝炎病毒表面抗原蛋白前S1和前S1抗体测定,诊疗学（第,9,版）,前S1抗原可识别肝细胞表面特异性病毒受体,，,是非常主要传染性指标。同时血清前S1抗原存在与病毒复制关系亲密。作为病毒复制指标较HBeAg敏感,，,能够反,映,HBeAg阴性乙肝,病人,体内病毒活动情况,，,防止因为HBeAg阴性造成误诊和漏检,，,对“二对半”检测起主要补充作用。前S1抗原阴转越早、前S1抗体阳转越早,，病人,病程越短、预后越好。,（三）乙型肝炎病毒表面抗原蛋白前S2和前S2抗体测定,Pre-S2阳性提醒HBV复制异常活跃,，,有传染性。抗 Pre-S2阳性见于乙肝急性期及恢复早期；提醒HBV已被去除,，,预后很好。,临床常见病原体检测,第25页,诊疗学（第,9,版）,HBV-DNA阳性是诊疗乙型肝炎佐证,，,表明HBV复制及有传染性。也用于监测应用 HBsAg疫苗后垂直传输阻断效果,，,若 HBV-DNA阳性表明疫苗阻断效果不佳。,（五）乙型肝炎病毒YMDD变异测定,YMDD是H