实验一细菌形态结构的观察

单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,医学微生物学实验,Experiment of Medical Microbiology,基础医学院病原生物学教研室,基础医学实验教学中心病原生物学与免疫学实验室,杨致邦,2010.1,教材,高等医学院校基础医学实验教学系列教材,病原生物学实验,科学出版社，2008年6月,主编,杨致邦 叶彬,掌握病原生物学的基本方法与基本操作技术；,强化实验室生物安全观念，,掌握无菌操作技术；,加深对病原生物学基本理论知识的理解与认识；,培养独立操作、独立观察和思考、独立分析问题和解决实际问题的能力；,增强科技创新能力；,培养严谨的作风、科学的方法和严肃认真的工作态度。,实验教学的目标,临床医学本科实验内容及安排,实验课的带教内容,学时数,显微镜,录像,1,细菌形态观察,4,需要,2,细菌的生长现象与消毒灭菌,4,有,3,致病性球菌,4,需要,有,4,肠道杆菌,4,有,5,白喉杆菌、厌氧菌,4,需要,6,四体、真菌、病毒,4,需要,有,临床药学本科实验内容及安排,实验课的带教内容,学时数,显微镜,录像,1,细菌形态观察,4,需要,2,细菌的生长现象与消毒灭菌,4,有,3,致病性球菌,4,需要,有,4,药物的微生物检测,4,5,药物的敏感性实验,4,6,四体、真菌、病毒,4,需要,有,非临床医学本科实验内容及安排,实验课内容,学时数,显微镜,录像,1,细菌形态,结构的,观察,4,需要,2,细菌的,生长现象与消毒灭菌,4,有,3,四体、真菌、病毒,4,需要,有,实验一,细菌形态结构的观察,Observe on Morphology and Structure,of Bacteria,【,目的要求,】,1.,熟悉实验室生物安全规则,掌握无菌操作技术；,2.,掌握细菌标本革兰染色的操作步骤和方法；,显微镜(油镜)下细菌形态的观察;革兰染色结果判断；,3.,掌握细菌的特殊结构（荚膜、鞭毛、芽孢）的形态特点。,【,实验内容,】,1.,实验室生物安全规则,(P3),；,2.细菌标本革兰染色,观察,（,Grams Stain,)(每人做）,(P10),；,3.复习显微镜(油镜)的使用(每人做）；,4.细菌特殊结构（荚膜、鞭毛、芽胞）的观察（示教镜）,(P104),。,【实验材料】,(1)菌种:,葡萄球菌、大肠杆菌斜面培养物。,(2)试剂:革兰染色液。,(3)其他:,生理盐水、载玻片、酒精灯、接种环、显微镜、香柏油、擦镜纸、二甲苯等。,【实验方法】,1细菌涂片的制作,步骤：,涂片 干燥 固定,注意点：,1）无菌操作,2）加生理盐水（固体培养物）,生理盐水 生理盐水 生理盐水,+,葡萄球菌 大肠杆菌 葡萄球菌+大肠杆菌,载玻片,2.革兰染色,1)方法,初染:结晶紫和碳酸氢钠各13滴,3s-5s，水冲净,甩干。,媒染:碘液13滴,3s-5s秒钟，水冲净,甩干。,脱色,:95%乙醇数滴,5s-10s,水冲净,甩干。,复染:稀释石炭酸复红液13滴,10s，水冲净,甩干。,关键步骤：,掌握脱色程度。,【结果观察】,指标:,形态、,染色性、排列。,染色性判断：,革兰阳性菌染成蓝紫色,革兰阴性菌染成红色。,3.观察,标本片自然干燥或在酒精灯火焰上烤干后,在涂菌处滴加1滴香柏油,油镜下观察。,Grams Stain,1000,葡萄球菌:,革兰阳性球菌,成堆或呈葡萄状排列。,大肠杆菌:,革兰阴性杆菌,不规则分散排列。,Grams Stain,1000,4.细菌特殊结构（荚膜、鞭毛、芽胞）的观察,注意点：,观察时只能动显微镜的微调,不要动位置。,要求：,画图记录。,1）破伤风杆菌的芽胞:,芽胞染色1000,鞭毛染色1000,2)变形杆菌的鞭毛:,3)肺炎链球菌的荚膜:,荚膜染色1000,【实验注意点】,1.生物安全、无菌操作,菌种管清理；,2.显微镜(油镜)的使用用后擦镜头；,3.用过的载玻片放进有消毒水的玻缸。,4.做好清洁卫生。,【实验报告内容】,1.细菌标本革兰染色观察（方法、结果画图、讨论）；,2.细菌特殊结构（荚膜、鞭毛、芽胞）观察（画图）。,【实验报告示范】,实验一,细菌形态结构的观察,【实验内容】,1.实验室生物安全规则（每人掌握）；,2.细菌标本革兰染色观察（Grams Stain)(每人做）；,3.复习显微镜(油镜)的使用(每人做）；,4.细菌特殊结构（荚膜、鞭毛、芽胞）的观察（示教镜）。,【实验材料和方法】,一、细菌标本革兰染色观察,1细菌涂片的制作,菌种：,葡萄球菌、大肠杆菌斜面培养物,方法：,涂片 干燥 固定,1）涂片：在酒精灯火焰旁用接种环无菌操作取生理盐水和葡萄球菌、大肠杆菌斜面培养物，涂抹、混匀于载玻片上，如下图：,生理盐水 生理盐水 生理盐水,+,葡萄球菌 大肠杆菌 葡萄球菌+大肠杆菌,3）固定,将载玻片以均匀的速度通过酒精灯火焰来回3次。,2）干燥,将涂片在酒精灯火焰上方约20cm高处烤干。,2.革兰染色,1)方法,初染:结晶紫和碳酸氢钠各13滴,3s-5s，水冲净,甩干。,媒染:碘液13滴,3s-5s秒钟，水冲净,甩干。,脱色:95%乙醇数滴,5s-10s,水冲净,甩干。,复染:稀释石炭酸复红液13滴,10s，水冲净,甩干。,3.观察,将标本片在酒精灯火焰上烤干后,在涂菌处滴加1滴香柏油,油镜下观察。,4.结果,见图1:,葡萄球菌:,革兰阳性球菌,成堆或呈葡萄状排列,大肠杆菌:,革兰阴性杆菌,不规则分散排列,Grams Stain,1000,图1：,细菌标本,革兰染色观察,结果,5.讨论,本实验结果表明,通过革兰染色在油镜下可清楚地观察到标本片上细菌的形态、染色性和排列状态。革兰染色可将细菌分为2大类，即染成蓝紫色的革兰阳性菌和染成红色的革兰阴性菌。其原理是革兰阳性菌和革兰阴性菌细胞壁结构的差异。,结果不正确的影响因素分析：,二、细菌特殊结构（荚膜、鞭毛、芽胞）的观察,结果见图2-4,。,鞭毛染色1000,图2 变形杆菌的鞭毛,图,3,破伤风杆菌的芽胞,芽胞染色1000,图,4,肺炎链球菌的荚膜,荚膜染色1000,请班干部,填写实验运行记录，,安排做好清洁卫生。,谢谢！,