染色体畸变分析培训课程课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,毒理学基础实验课,染色体畸变分析,（Chromosome Aberration Analysis),哈尔滨医科大学公共卫生学院,卫生毒理学教研室,任锐,毒理学基础实验课,化学毒物致突变类型?,复习,染色体畸变,染色体数目改变,基因突变,碱基置换,移码突变,转换,颠换,毒理学基础实验课,复习,遗传学终点:,基因突变,染色体畸变,染色体组畸变,DNA原始损伤,Ames实验,微核实验,染色体畸变分析,染色体畸变分析,分子生物学方法,毒理学基础实验课,小鼠骨髓细胞染色体畸变分析试验,毒理学基础实验课,1.学习动物骨髓细胞标本制作。,2.了解动物体内染毒及染色体畸变类型。,一、目的,毒理学基础实验课,当某种化学物质作用于染色体并使其固有的数目和形态结构发生改变时，称为染色体畸变。具有这种能力的化学物质可能对生物体产生潜在性的远期危害。因此，应用小鼠骨髓细胞染色体畸变分析实验可以检测化学物质能否引起哺乳动物体细胞染色体畸变，以及畸变的性质和强弱。,二、原理,毒理学基础实验课,三、器材与试剂,见教材。,毒理学基础实验课,动物选择 选用,18g,24g,雄性健康小鼠，每组,6,10,只。,染毒与取样时间,一般染毒一次或多次，多次更为合理。末次染毒后,24h,处死动物，收获细胞。,剂量,最高剂量最大耐受剂量或，,1/3,1/8LD50,；,最低剂量应为最大给药量或人使用量的,50,100,倍；,阴性对照组给予,40mg/kg,环磷酰胺（腹腔注射）；,阴性对照给予溶剂。,4.,给药途径 原则上采用与人接触受试物相同的途径。,四、实验设计,毒理学基础实验课,1.注射秋水仙素,2.骨髓细胞的制备,3.低渗,4.固定,5.制片,6.干燥,7.染色,五、操作步骤,毒理学基础实验课,注射秋水仙素,骨髓细胞制备：,取股骨，,PBS5ml冲洗骨髓细胞，1500r/min，离心10min，弃去上清。,低渗：,0.4%氯化钾水溶液5ml，37低渗30min，1000r/min，离心10min，弃去上清。,固定：,加入3：1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳头吸管反复吹打，静止15min后，以1000r/min离心10min，弃上清。,制片,：用乳头吸管吸取混匀的细胞悬液，从玻片上方3cm5cm处滴片，每张片子滴23滴细胞悬液，使细胞自然分散。,干燥：,将制好的片子置空气中自然干燥，并做好标记,染色：,Giemsa,染色,15min,水冲,干燥，阅片,毒理学基础实验课,低倍镜、高倍镜和油镜。,计数,100,个分裂中期相细胞。,染色体数目和染色体结构。,六、染色体分析阅片,毒理学基础实验课,低倍镜、高倍镜和油镜。,染色体数目和染色体结构。,染色：Giemsa染色15min,最低剂量应为最大给药量或人使用量的50100倍；,了解动物体内染毒及染色体畸变类型。,低倍镜、高倍镜和油镜。,了解动物体内染毒及染色体畸变类型。,了解动物体内染毒及染色体畸变类型。,制片：用乳头吸管吸取混匀的细胞悬液，从玻片上方3cm5cm处滴片，每张片子滴23滴细胞悬液，使细胞自然分散。,固定：加入3：1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳头吸管反复吹打，静止15min后，以1000r/min离心10min，弃上清。,具有这种能力的化学物质可能对生物体产生潜在性的远期危害。,每次离心后弃上清时应仔细，注意不要将管底的沉渣吸出，以免最后分析时剩余的细胞数过少。,因此，应用小鼠骨髓细胞染色体畸变分析实验可以检测化学物质能否引起哺乳动物体细胞染色体畸变，以及畸变的性质和强弱。,固定：加入3：1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳头吸管反复吹打，静止15min后，以1000r/min离心10min，弃上清。,当某种化学物质作用于染色体并使其固有的数目和形态结构发生改变时，称为染色体畸变。,每次离心后弃上清时应仔细，注意不要将管底的沉渣吸出，以免最后分析时剩余的细胞数过少。,哈尔滨医科大学公共卫生学院,动物选择 选用18g24g雄性健康小鼠，每组610只。,具有这种能力的化学物质可能对生物体产生潜在性的远期危害。,因此，应用小鼠骨髓细胞染色体畸变分析实验可以检测化学物质能否引起哺乳动物体细胞染色体畸变，以及畸变的性质和强弱。,七、结果评价,毒理学基础实验课,八、组织分工,毒理学基础实验课,八、总 结,毒理学基础实验课,掌握正常小鼠的骨髓染色体数目和形态。,毒理学基础实验课,低渗时间十分重要，时间太短则染色体分散不开，无破裂，染色体丢失。,每次离心后弃上清时应仔细，注意不要将管底的沉渣吸出，以免最后分析时剩余的细胞数过少。,毒理学基础实验课,制片：用乳头吸管吸取混匀的细胞悬液，从玻片上方3cm5cm处滴片，每张片子滴23滴细胞悬液，使细胞自然分散。,哈尔滨医科大学公共卫生学院,低渗时间十分重要，时间太短则染色体分散不开，无破裂，染色体丢失。,低倍镜、高倍镜和油镜。,染毒与取样时间 一般染毒一次或多次，多次更为合理。,染色体数目和染色体结构。,动物选择 选用18g24g雄性健康小鼠，每组610只。,当某种化学物质作用于染色体并使其固有的数目和形态结构发生改变时，称为染色体畸变。,每次离心后弃上清时应仔细，注意不要将管底的沉渣吸出，以免最后分析时剩余的细胞数过少。,因此，应用小鼠骨髓细胞染色体畸变分析实验可以检测化学物质能否引起哺乳动物体细胞染色体畸变，以及畸变的性质和强弱。,当某种化学物质作用于染色体并使其固有的数目和形态结构发生改变时，称为染色体畸变。,固定：加入3：1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳头吸管反复吹打，静止15min后，以1000r/min离心10min，弃上清。,骨髓细胞制备：取股骨，PBS5ml冲洗骨髓细胞，1500r/min，离心10min，弃去上清。,具有这种能力的化学物质可能对生物体产生潜在性的远期危害。,动物选择 选用18g24g雄性健康小鼠，每组610只。,染色体数目和染色体结构。,固定：加入3：1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳头吸管反复吹打，静止15min后，以1000r/min离心10min，弃上清。,每只小鼠分析100个骨髓细胞。,掌握正常小鼠的骨髓染色体数目和形态。,阴性对照给予溶剂。,因此，应用小鼠骨髓细胞染色体畸变分析实验可以检测化学物质能否引起哺乳动物体细胞染色体畸变，以及畸变的性质和强弱。,因此，应用小鼠骨髓细胞染色体畸变分析实验可以检测化学物质能否引起哺乳动物体细胞染色体畸变，以及畸变的性质和强弱。,固定：加入3：1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳头吸管反复吹打，静止15min后，以1000r/min离心10min，弃上清。,学习动物骨髓细胞标本制作。,染色体数目和染色体结构。,当某种化学物质作用于染色体并使其固有的数目和形态结构发生改变时，称为染色体畸变。,因此，应用小鼠骨髓细胞染色体畸变分析实验可以检测化学物质能否引起哺乳动物体细胞染色体畸变，以及畸变的性质和强弱。,每次离心后弃上清时应仔细，注意不要将管底的沉渣吸出，以免最后分析时剩余的细胞数过少。,4%氯化钾水溶液5ml，37低渗30min，1000r/min，离心10min，弃去上清。,制片：用乳头吸管吸取混匀的细胞悬液，从玻片上方3cm5cm处滴片，每张片子滴23滴细胞悬液，使细胞自然分散。,4%氯化钾水溶液5ml，37低渗30min，1000r/min，离心10min，弃去上清。,4%氯化钾水溶液5ml，37低渗30min，1000r/min，离心10min，弃去上清。,染色体畸变分析（Chromosome Aberration Analysis),因此，应用小鼠骨髓细胞染色体畸变分析实验可以检测化学物质能否引起哺乳动物体细胞染色体畸变，以及畸变的性质和强弱。,小鼠骨髓细胞染色体畸变分析试验,末次染毒后24h处死动物，收获细胞。,染色：Giemsa染色15min,哈尔滨医科大学公共卫生学院,阴性对照组给予40mg/kg环磷酰胺（腹腔注射）；,染色：Giemsa染色15min,阴性对照组给予40mg/kg环磷酰胺（腹腔注射）；,染毒与取样时间 一般染毒一次或多次，多次更为合理。,每次离心后弃上清时应仔细，注意不要将管底的沉渣吸出，以免最后分析时剩余的细胞数过少。,阴性对照组给予40mg/kg环磷酰胺（腹腔注射）；,末次染毒后24h处死动物，收获细胞。,染色体数目和染色体结构。,固定：加入3：1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳头吸管反复吹打，静止15min后，以1000r/min离心10min，弃上清。,骨髓细胞制备：取股骨，PBS5ml冲洗骨髓细胞，1500r/min，离心10min，弃去上清。,染色体数目和染色体结构。,干燥：将制好的片子置空气中自然干燥，并做好标记,制片：用乳头吸管吸取混匀的细胞悬液，从玻片上方3cm5cm处滴片，每张片子滴23滴细胞悬液，使细胞自然分散。,阴性对照组给予40mg/kg环磷酰胺（腹腔注射）；,因此，应用小鼠骨髓细胞染色体畸变分析实验可以检测化学物质能否引起哺乳动物体细胞染色体畸变，以及畸变的性质和强弱。,4%氯化钾水溶液5ml，37低渗30min，1000r/min，离心10min，弃去上清。,因此，应用小鼠骨髓细胞染色体畸变分析实验可以检测化学物质能否引起哺乳动物体细胞染色体畸变，以及畸变的性质和强弱。,染色体数目和染色体结构。,低倍镜、高倍镜和油镜。,具有这种能力的化学物质可能对生物体产生潜在性的远期危害。,干燥：将制好的片子置空气中自然干燥，并做好标记,染毒与取样时间 一般染毒一次或多次，多次更为合理。,染色体数目和染色体结构。,制片：用乳头吸管吸取混匀的细胞悬液，从玻片上方3cm5cm处滴片，每张片子滴23滴细胞悬液，使细胞自然分散。,4%氯化钾水溶液5ml，37低渗30min，1000r/min，离心10min，弃去上清。,每次离心后弃上清时应仔细，注意不要将管底的沉渣吸出，以免最后分析时剩余的细胞数过少。,干燥：将制好的片子置空气中自然干燥，并做好标记,固定：加入3：1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳头吸管反复吹打，静止15min后，以1000r/min离心10min，弃上清。,阴性对照组给予40mg/kg环磷酰胺（腹腔注射）；,每次离心后弃上清时应仔细，注意不要将管底的沉渣吸出，以免最后分析时剩余的细胞数过少。,哈尔滨医科大学公共卫生学院,阴性对照组给予40mg/kg环磷酰胺（腹腔注射）；,低倍镜、高倍镜和油镜。,动物选择 选用18g24g雄性健康小鼠，每组610只。,给药途径 原则上采用与人接触受试物相同的途径。,每次离心后弃上清时应仔细，注意不要将管底的沉渣吸出，以免最后分析时剩余的细胞数过少。,固定：加入3：1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳头吸管反复吹打，静止15min后，以1000r/min离心10min，弃上清。,每次离心后弃上清时应仔细，注意不要将管底的沉渣吸出，以免最后分析时剩余的细胞数过少。,动物选择 选用18g24g雄性健康小鼠，每组610只。,染毒与取样时间 一般染毒一次或多次，多次更为合理。,制片：用乳头吸管吸取混匀的细胞悬液，从玻片上方3cm5cm处滴片，每张片子滴23滴细胞悬液，使细胞自然分散。,当某种化学物质作用于染色体并使其固有的数目和形态结构发生改变时，称为染色体畸变。,了解动物体内染毒及染色体畸变类型。,最低剂量应为最大给药量或人使用量的50100倍；,低倍镜、高倍镜和油镜。,制片：用乳头吸管吸取混匀的细胞悬液，从玻片上方3cm5cm处滴片，每张片子滴23滴细胞悬液，使细胞自然分散。,固定：加入3：1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳头吸管反复吹打，静止15min后，以1000r/min离心10min，弃上清。,固定：加入3：1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳头吸管反复吹打，静止15min后，以1000r/min离心10min，弃上清。,4%氯化钾水溶液5ml，37低渗30min，1000r/min，离心10min，弃去上清。,了解动物体内染毒及