革兰氏阳性产芽孢杆菌

单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,第十二章,革兰氏阳性产芽孢杆菌,内容提要,第一节,芽孢杆菌属,炭疽芽孢杆菌,第二节,梭菌属,产气荚膜梭菌,肉毒梭菌,破伤风梭菌,第一节,芽孢杆菌属,（,Bacillus),炭疽芽孢杆菌,炭疽芽孢杆菌,炭疽的病原体,人兽共患病,一、形态及染色特性,革兰氏阳性,大杆菌,，无鞭毛，不运动。,形成芽孢,、,荚膜,。,动物组织和血液:,单在或呈短链,，,竹节状、,有丰厚的,荚膜,人工培养物:,形成长链,，,形成芽胞，一般不形成荚膜,二、培养特性,需氧菌，适温37，营养要求不高,普通肉汤：,37，24,h,培养，上层液,透明,，形成,白色絮状沉淀,普通琼脂：,大而扁平、灰白色，不透明、表面干燥、边缘不整齐,火焰状菌落,。低倍镜观察菌落边缘呈,卷发状,，,不溶血,。,明胶高层：,呈,倒置松树状,串珠反应：,0.5单位/,ml,青霉素,的培养基中，细胞壁,合成受抑制,，,菌体膨胀相互粘连形成,“,串珠状,”,普通琼脂上的菌落,低倍镜观察菌落,串珠反应试验,三、抵抗力,繁殖体的抵抗力不强,6030-60,min,即可杀死,常用消毒剂均能将其杀死,青霉素等多种抗生素高度敏感,芽胞的抵抗力特别强,在干燥状态下可长期存活,121,灭菌5-10,min,芽胞对碘特别敏感,0.04,-10 min,四、抗原结构,是芽胞外膜层含有的抗原决定簇，,特异性抗原,具有,免疫原性和血清学诊断价值,。,荚膜,半,抗原，与毒力有关，无保护作用,不稳定，反应性特异,可用于血清学鉴定,细胞壁及菌体内的半抗原（,多糖）,，与毒力无关,性质稳定,（耐腐败、热）,Ascoli,反应,胞外蛋白质抗原（,炭疽毒素,），具有免疫原性,免疫保护,荚膜抗原：,菌体抗原：,保护性抗原：,芽孢抗原：,五、致病性,本菌可引致各种家畜、野兽和人类的,炭疽,易感性最强,牛、绵羊、鹿等,其次,马、驼、猪、山羊等次之,犬、猫、食肉兽等则有相当大的抵抗力,禽类一般不感染,感染途径：,消化道、呼吸道、皮肤创伤或通过吸血昆虫传播,食草动物炭疽常表现为,急性败血症,猪炭疽多表现为慢性的咽部,局限感染,犬、猫和食肉兽则多表现为,肠炭疽,感染表现,人类,肠炭疽,、,肺炭疽,或,皮肤炭疽,实验动物：小鼠、豚鼠、家兔易感,荚膜多肽：,荚膜,抗吞噬,，,抑制抗体,的作用，使易于扩散，引起,感染乃至败血症。动物无保护作用，可用于细菌鉴定,毒力因素：,炭疽毒素：,水肿毒素,(,edema,factor,EF,),致死毒素,(,lethal,factor,LF,),保护性抗原,（,PA）,三种成分单独无生物学,活性（毒性），,三种相结合时，表现毒性作用,增强微血管的通透性，,改变血液循环，,损害肾功能，,干扰糖代谢,导致动物死亡,具有免疫原性，,有保护作用,六、免疫性,患过炭疽的动物，能获得坚强的免疫力。,菌苗有第二号炭疽芽胞苗,无毒炭疽芽胞苗,抗炭疽血清,保护性抗原,炭疽毒素,刺激机体产生的抗体,抗感染作用,七、微生物学诊断,1.细菌学检查,采病料：,严禁剖检，,局部采料（耳根部、肋间采取,脾脏,、,水肿液,或,渗出物,、肠炭疽可采取,粪便,等,（1）涂片镜检：,碱性美蓝,瑞氏染色,姬姆萨染色,有荚膜竹节状大杆菌,组织病料,碱性美蓝,革兰氏染色,具有芽胞的链杆菌,培养物,（2）分离培养：,普通琼脂,血液琼脂,碳酸氢钠琼脂,观察生长特性,生物学特性检测,被检材料,强度株形成荚膜,动物机体内,含,碳酸氢钠,或,血清,培养基,（在,CO2,条件下培养）,炭疽杆菌与,噬菌体,具有高度的特异性,裂解炭疽杆菌,形成噬菌斑,被检菌,含青霉素,培养基,形成串珠,生长抑制,穿刺接种于,明胶培养基,18-20,培养4-7,d,呈倒置松树状,*荚膜检查：,*噬菌体裂解试验,：,*串珠试验,：,*明胶穿刺,试验：,细菌,噬菌斑,细菌噬菌体裂解试验,串珠试验,串珠,细菌,2.动物实验：,在内脏、血液中有大量,带荚膜的竹节状菌体,剖检变化：,注射部位呈,胶样水肿,脾脏肿大,3.血清学检查：,热沉淀反应,（,Ascoli,氏沉淀反应）,间接血凝试验,串珠荧光抗体检查,被检抗原,炭疽芽孢,串珠试验与,荧光抗体法结合,病料(1:5乳悬液),或培养物,皮下接种：小鼠0.1,ml,兔0.2-0.3,ml,败血症,而死亡,第二节 梭菌属,(,Clostridium),一、属的特征,*菌体杆状,，两端钝圆或尖锐，常单在，,革兰氏染色阳性,*形成,卵圆形或圆形的,芽孢,，常使菌体膨大，呈,梭状,二、梭菌分布,*梭菌,在自然界分布广泛,土壤、污水、腐烂植物、动物肠道,*人,与动物的伤口及软组织感染灶,三、病原梭菌及梭菌病的诊断原则,*本属,有80多种，多为非病原菌，常见的致病菌约11种,*多,为人,兽共患病病原,*病原,梭菌通常均能产生,外毒素,，其毒力强,产气荚膜梭菌,(,Cl,.,Perfringens,),*本菌,又称,魏氏梭菌,或,产气荚膜杆菌,*在自然界,分布极广,土壤、饲料、污水、乳汁、消化道粪便等,*在一定,条件下，可引起多种严重疾病,一、形态及染色特性,菌体,直杆状,，两端钝圆，,革兰氏阳性，形成芽胞（,中央或近端）,多数菌株在动物体内,可形成荚膜,二、培养及生化特性,本菌对,厌氧,条件要求不太严格加入葡萄糖、血液则生长更好，适温37,肝片肉汤,；生长迅速，5-6,h,出现混浊，产生,大量气体,葡萄糖琼脂,；,37，24,h,形成，,勋章样菌落,血液琼脂,；,灰白色，圆形，边缘呈锯齿状的大菌落，,周围有棕绿色溶血区，出现,双层溶血环,为,溶血（内环透明，外环淡绿色）。,牛乳培养基,：,汹涌发酵,或,暴烈发酵,分解乳糖产酸产气，,酪蛋白凝固，变成海绵状,三、致病性,菌型：,根据产生毒素种类，细菌分为,A、B、C、D、E,等5个型,*致病,作用主要在于所,产生的毒素,蛋白质,*,毒素有12种，小写希腊字母表示,、,.,；,其中,、,、,和,是主要坏死、致死性、溶血性毒素,有些菌株还产生,肠毒素,细菌菌型,所致疾病,产气荚膜梭菌,A,型,人气性坏疽和食物中毒,坏死性肠炎(牛,仔猪),兔腹泻等,产气荚膜梭菌,B,型,羔羊痢疾,犊牛、羔羊、绵羊和山羊的肠毒血症或坏死性肠炎,产气荚膜梭菌,C,型,绵羊猝狙,羔羊、犊牛、仔猪、绵羊的肠毒血症和坏死性肠炎以及人的坏死性肠炎,仔猪红痢,产气荚膜梭菌,D,型,羔羊、绵羊、山羊、牛的肠毒血症,人肠毒血症,产气荚膜梭菌,E,型,犊牛、羔羊肠毒血症,兔腹泻.,表:产气荚膜梭菌菌型及所致疾病,四、微生物学诊断,*A,型所,致气性坏疽及人食物中毒,依靠细菌分离鉴定,*其余,各型所致的各种疾病,肠道内产生,毒素,所致，靠,毒素检测,1.,细菌学检查,肠内容物,肝片肉汤,热处理,80，15,min,37,培养,观察,观察要点：,形态及染色特点：,革兰氏阳性粗大杆菌,培养特性：,厌氧，生长快，不运动，菌落形状，双层溶血环,生化特性：,暴烈发酵,细菌分离培养,2.肠内容物毒素检查,方法及程序：,肠内容物,（回肠）,离心,(3000,rmp,30min),取上清夜,一份加热（破坏）,（60，30,min）,一份不加热,动物静注,小鼠；0.1-0.3,ml,兔；1-3,ml,观察结果,不加热组常于数分,钟至十小时内死亡,加热组不死亡,3.细菌菌型测定：,被检毒素,+,各型抗毒素血清,中和毒素,37.,40,min,小鼠静注,观察24,h,定型,肉毒梭菌,(,Cl,.,botulinum,),*,广泛分布于土壤，动物肠道，饲料以及食品中,*当有适宜,营养和,厌氧环境,时，生长繁殖产生,肉毒毒素,1.形态及染色特性,菌体多呈,直杆状,，单在或成双，革,兰氏阳性,。着生周鞭毛,形成,芽胞位于菌体近端,，大于菌体直径，使细胞膨大,2.培养特性,专性厌氧，,适温37（,产毒素最适温25-30），,6.5%,NaCl,20%,胆汁，,pH8.5,抑制生长，,营养要求不高,血液琼脂平板：成圆形到扇状（1-6,mm,），不规则菌落，,溶血,3.抵抗力,本菌繁殖体抵抗力弱：,加热80,30min,或100,10min,杀死,芽孢抵抗力极强：,湿热1005-7,h,高压105100,min,120 5-20,min,干热18015,min,肉毒毒素抵抗力较强,耐酸（耐受,pH,3-6），,对碱敏感,（,pH8.5,以上即破坏）,0.1高锰酸钾,加热80,30min,或100 1,0min,，破坏,4.抗原性及分型,*根据,毒素,抗原性,分为,A、B、C、D、E、F、G,等7个型,*具有良好免疫,原性,抗毒素，,有型特异性，无交叉反应,5.肉毒毒素,*蛋白质,外毒素，性质稳定，毒性最强的,神经麻痹毒素之一,如,A,型毒素,毒素,lmg,杀死2亿只小鼠，,人致死量约0.1,ug,*A-G,型毒素合成时为,无毒性的毒素前体,，被水解后表现毒性,*G,型毒素,须胰酶激活后才有毒性,神经毒亚单位,非毒性亚单位,肉毒毒素前体,小肠吸收,亚单位分解,抗胃蛋白酶水解,淋巴、血流作用于靶器官细胞,阻断乙酰胆碱的释放,导致肌肉弛缓型麻痹,6.致病性,*所有温血动物,和冷血动物对肉毒毒素均有感受性,*A、B、E,及,F,型毒素引起人的食物中毒,7.微生物学诊断,主要方法,被检材料中,检查肉毒毒素,（1）肉毒毒素检测,A.,材料处理,：,被检材料,离心,取上清液,胰酶液,37，60,min,不处理,B.,检出试验,：,分别小鼠腹腔注射（0.5,mL,/,只）,观察4,d,24,h,内发病、死亡,最终死于呼吸麻痹,主要表现,竖毛、四肢瘫软、呼吸困难,可能有肉毒毒素存在,C.,证实试验：,第一组（毒素中和组）+,肉毒抗毒素,第二组（毒素灭活组）+,煮沸10,min,第三组（毒素对照组）+,缓冲液,小鼠腹腔注射,保护存活,发病死亡,肉,毒,毒,素,阳,性,被检材料,小鼠腹腔注射,保护存活,小鼠腹腔注射,原理：,*肉毒毒素,+,抗毒素,能中和毒素,*肉毒毒素,煮沸10,min,破坏毒素,D.,定型试验：,原理：,*肉毒毒素,+,抗毒素,能中和毒素,*抗毒素,能中和相应的毒素,有型特异性,（2）细菌分离与鉴定,A.,被检材料热处理：,检验材料,庖肉培养基,80 加热30,min,处理,（利用芽胞耐热特点）,增菌液,B.,细菌分离及鉴定：,检验材料,增菌液,血液琼脂,乳糖牛奶卵黄琼脂平板,3,7,厌氧培养48,h,挑取可疑菌落,形态学观察,生化特性检查,C.,产毒素检查：,分离菌株,庖肉培养基，置30培养5,d,毒素检测,毒素定型,定菌型,破伤风梭菌,（,Cl.tetani,),本菌又名,破伤风杆菌,，,引起人畜破伤风的病原,一.生物学特性,形态特征：,菌体两端钝圆、细长、正直杆菌，单在,革兰氏阳性菌,体内外均,能形成圆形芽胞，位于顶端,鼓槌状,无荚膜，多具周鞭毛而能运动,培养特征：,严格厌氧,，含有血液、肝汤、庖肉培养基中易生长,肉肝汤和庖肉培养基,：轻微浑浊，有颗粒状或粘稠状沉淀，产生 特殊臭味,血液琼脂培养基：,形成直径46,mm,菌落，伴有狭窄,溶血环,。,二、致病性,病原体,皮肤黏膜,创伤感染,产生,强烈毒素,局部生长,骨骼肌痉挛,1.易感动物：,马属动物的易感性最高,其次是牛、羊、猪，犬、猫等,禽类和冷血动物不敏感,实验动物家兔、小鼠、大鼠、豚鼠对毒素易感,人易感,2.毒素：,破伤风,痉挛毒素,破伤风,溶血素,毒力非常强，外毒素，良好,抗原性,不耐热，对氧敏感，与致病性无关,破伤风的临床症状特征比较典型，故根据流行病学和临床症状，可以基本确诊。一般不需微生物学诊断。,必要时，可采集创伤部的,分泌物或坏死组织,进行细菌学检查。另外，还可以检测毒素。,三、微生物学诊断,四、免疫防治,主动免疫预防,破伤风类毒素,紧急预防和治疗,破伤风抗毒素血清,第十二章 复习思考题,1.试述炭疽芽孢杆菌的抵抗力及其实际意义。,2.试述炭疽的微生物学诊断，采取检验材料应注意哪些事项？,3.试述产气荚膜梭菌的