酵母核糖核酸的提取及组分鉴定卢忠燕

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,Biochemical experimental technology,实验七 酵母核糖核酸的提取,核 酸,(nucleic acid),是以核苷酸为基本组成单位的生物大分子，携带和传递遗传信息。,N,u,c,l,e,i,c,A,c,i,d,基因的化学本质,核酸,核酸的分类及分布,90%,以上分布于细胞核，其余分布于核外,如线粒体，叶绿体，质粒等。,分布于胞核、胞液。,(deoxyribonucleic acid,DNA),(ribonucleic acid,RNA),脱氧核糖核酸,核糖核酸,携带遗传信息，决定细胞和个体的基因型,(genotype),。,是,DNA,的转录产物，参与细胞内,DNA,遗传信息的表达。,除,RNA,病毒以外，所有有机体的遗传物质（基因）都是,DNA,。,一、实验目的,1.,掌握从酵母中提取核糖核酸的原理。,2.,学会核糖核酸提取的基本操作。,二、实验原理,酵母，即酵母菌，是一些单细胞真菌，是人类文明史中被应用得最早的微生物，繁殖速度快，生长周期短，其细胞质中的核酸大部分是,RNA,，而,DNA,很少；,RNA,提取液与菌体分离比较容易，所以生产中常选用酵母作为,RNA,提取的原材料。,工业上提取,RNA,的方法主要有三种，包括,稀碱法、浓盐法和自溶法,。本实验采用的是,稀碱法,。稀碱法是利用,RNA,可溶于碱性溶液的性质，先使,RNA,溶于稀,NaOH,溶液中，然后再利用核酸不溶于乙醇的性质，向溶液中加入酸性的乙醇溶液，从而使,RNA,沉淀出来，如此得到的即是,RNA,的粗制品；再用乙醇、乙醚等有机溶剂洗涤脂类杂质，即得到纯化的,RNA,。,三、实验步骤,1.,酵母,RNA,的提取,(1),准确称取,15g,酵母，加入干净的研钵中,加入适量石英砂；然后，向研钵中加入,30-40mL0.04M,的,NaOH,溶液，并用力研磨约,10min,。,(2),待研磨均匀后，将钵中溶液倒入锥形瓶中，并再取,30-40mL0.04MNaOH,溶液洗涤研钵，一并转入锥形瓶中，然后放于沸水浴中加热,20-30min,，取出冷却。,2.,酵母,RNA,分离及沉淀,将锥形瓶中溶液转移到,100ml,离心管中，在,4200rpm,离心,8-15min,后，将上清液缓缓倾入,30ml,酸性乙醇溶液中，边倾倒边轻轻搅拌，待,RNA,沉淀完全后，,3500rpm,离心,3-5min,，弃上清，沉淀即为,RNA,粗制品。,3.,洗涤及干燥,（,1,）向离心管中加,15-20ml,的,95%,乙醇，轻摇后，静置,3-5min,3500rpm,离心,3-5min,，弃上清，留沉淀。,（,2,）再加入,15-20ml,乙醚，轻摇后，静置,3-5min,3500rpm,离心,3-5min,，弃上清，沉淀即为酵母,RNA,。,四、实验结果,将提取的,RNA,在空气中或用吹风机风干，称重，计算,RNA,的含量。,参考公式如下：,实验八 核糖核酸的组分鉴定,核酸,(,DNA,和,RNA,),核苷酸,核苷和脱氧核苷,磷酸,戊糖,碱基,嘌呤,嘧啶,核糖,脱氧核糖,核酸组成,分子组成,碱基,(base),：嘌呤碱，嘧啶碱,戊糖,(pentose),：核糖，脱氧核糖,磷酸,(phosphate),核苷酸是构成核酸的基本组成单位,碱基,苦,碱基,甜,戊糖,酸,磷酸,一、实验目的,掌握核糖核酸组分鉴定的原理。,学会鉴定核糖核酸组分的方法。,二、实验原理,核糖核酸的组成成分主要包括,核糖、磷酸和碱基,。,在碱性环境下，嘌呤碱能与银离子反应形成沉淀，但此处碱性环境不能用一般的强碱，否则强碱会与银离子反应产生沉淀而干扰结果判定。,3.,核糖核酸与浓盐酸共热时，会发生降解，形成的核糖继而转变成糠醛，后者可与,3,，,5-,二羟基甲苯（地衣酚）反应，在,Fe,3+,或,Cu,2+,催化下，生成绿色复合物。,4.,磷酸组分可与定磷试剂在酸性环境中反应，生成蓝色物质。因此，可以根据以上性质，设计实验对各组分进行鉴定。,三、实验步骤,1.,取,200-500mg,实验七中提取的酵母,RNA,，加入,1.5M H,2,SO,4,溶液,10mL,，在沸水浴中加热,10-20,分钟，使核酸充分水解后，用于对各组分的鉴定。,2.,磷酸组分鉴定：取水解液,1mL,，加入干净的试管中，再加入等体积的新配制的定磷试剂,1mL,，混匀后，在,45,左右的水浴中加热,15-30min,，观察颜色变化。,3.,嘌呤碱的鉴定：取水解液,1mL,，加入干净的试管中，加入过量的浓氨水，再加入,1mL,的,0.1M,的硝酸银溶液，观察沉淀的生成。,4.,核糖的鉴定：取水解液,1mL,，加入干净的试管中，再加入,2mL,三氯化铁,-,浓盐酸溶液和,0.2mL,苔黑酚,-,乙醇溶液，放置在沸水浴中加热,10-30min,，观察颜色变化。,