临床标本细菌检验课件

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,六原则,避免杂菌污染,不同期不同标本,用抗生素以前,采集病变明显部位,运送注意保存,标本必须新鲜,一、临床标本的采集和送检,第一节 概 述,认真核对：,了解诊断：,联系临床,：,（一）临床标本的采集：,肠道、痰、口咽含涑液、血液、脑脊液、骨髓、粪便、尿液、胸腹水等、,1.,细菌学检验单,2.,标本容器：无菌容器,3.,采集时间、部位：,4.,无菌操作：对无菌或有菌标本不同处理,（二）临床标本的送检,1.,送检时间、方法：及时送检、低温或保温保存,2.,常规性细菌培养标本：应保存,4,摄氏度,3.,厌氧菌培养的标本：厌氧保存,4.,低温敏感的细菌（奈瑟菌，流感嗜血杆菌）应立即处理,5.,任何临床标本。应专人运送、注意防护,6.,了解标本的来源和临床信息,（三）临床标本的处理,原则：立即接种、适宜培养,1.,组织：切碎,2.,体液：离心,3.,棉拭子：取多个标本,4.,粪便：先观察，再取材,5.,痰：先观察，再取材,6.,厌氧培养标本：早接种，厌氧培养,7.,血液：立即接种,二、细菌学检验的基本程序,（一）培养基的选择原则,（二）细菌检验的基本流程,（三）诊断试验的选择,选择合适的培基养和培养方法,EB,血平板,(BA),SS,MAC/EMB,巧克力培养基,(CA),奈瑟菌选择培养基,新耶尔森培养基,沙保培养,备注,血液,骨髓,+,+,+,+,可同时做厌氧、需氧培养，做菌计,尿液,+,+,+,做菌计、需要时做厌氧,粪,/,肛拭,+,+,+,弧菌培养选用碱性蛋白胨水和,TCBS,培养基,痰,/,咽拭,+,+,+,+,直接涂片镜检,脓液,分泌物,+,+,+,+,直接涂片镜检、可同时做厌氧、需氧培养,生殖道,标本,+,+,+,+,+,可直接涂片镜检,眼耳口鼻,标本,+,+,+,+,+,直接涂片镜检,体液,+,+,+,直接涂片镜检，可同时做厌氧、需氧培养,临床标本的检验程序,标本,直接检查,分离培养：选择培养基,BA,，,SS,，,MAC,可疑菌落,药物敏感试验,鉴定 生化，血清学鉴定，补充试验,诊断试验选择原则,1.,选择最有鉴定价值的试验,2.,选择简易、快速、方便的试验,3.,综合考虑试验的敏感性和特异性,三、细菌学鉴定的方法,1.,细菌的形态学检验,2.,生物化学试验,3.,血清学试验,4.,抑菌试验,5.,分子生物学检测,6.,噬菌体分型试验,7.,动物实验,四、细菌学检验报告原则,1.,初步报告,2.,细菌鉴定,3.,药敏试验,（一）血液中常见病原体,确诊菌血症和败血症,金黄色葡萄球菌见疖、痈、脓肿引起的败血症,革兰阴性菌见尿路、胆道、胃肠道引起的败血症,草绿色链球菌引起亚急性心内膜炎,铜绿、金葡引起烧伤后败血症,第二节 临床常见标本的细菌学检验,（一）血液中常见病原体（见表,18-2,）,确诊菌血症和败血症,金黄色葡萄球菌见疖、痈、脓肿引起的败血症,革兰阴性菌见尿路、胆道、胃肠道引起的败血症,草绿色链球菌引起亚急性心内膜炎,铜绿、金葡引起烧伤后败血症,一、血液及骨髓标本的细菌学检验,（三）细菌学检验,1.,检验程序：,2.,检验方法,普通培养,：分别做厌氧和需氧培养,阳性表现,：,均匀浑浊，革兰阴性菌,浑浊有绿色，肺炎链球菌,表面有菌膜有绿色荧光，铜绿假单胞菌,下面沉淀，链球菌,溶血，溶血性链球菌,浑浊有胶胨，葡萄球菌,灰白色菌膜，枯草芽孢杆菌,涂片革兰染色镜检,，直接药敏、分离培养,报告临床,阴性结果,7,天报告,特殊培养,脑膜炎奈瑟菌培养：,37,加,5-10%CO,2,伤寒或其它沙门菌：接种葡萄糖胆汁肉汤或胆盐肉汤,草绿色链球菌：胰酶酪蛋白大豆肉汤，同时做需要、,CO,2,和厌氧培养,L,型细菌：高渗液体培养基，,“,油煎蛋,”,菌落,厌氧培养：,真菌培养,：,二、脑脊液标本的细菌学检验,（二）标本采集,医师以最严格的无菌技术做腰椎穿刺。气温较低时，应保温送检或床边接种后，立即孵育,（一）脑脊液中常见病原体（表,18-3,）,（三）细菌学检验,2.,检验方法,-,脑脊液外观,：结核性膜炎常为毛玻璃样。,其它细菌引起化脓性脑膜炎，脑脊液都明显浑浊。,-,涂片镜检,：混浊或脓样脑脊液可直接涂片,革兰染色，镜检。无色透明的脑脊液,应以,3000r/min,离心,10-15,分钟,取沉淀物涂片,革兰染色镜检，根据染色反应及形态特征，可初步提出感染细菌的种类。,1.,检验程序：见表,18-3,注意增菌培养,（,3,）分离培养,用接种环挑取混浊脑脊液或离心沉淀物，分别接种于,BA,或,CA,平皿上，置,35,5%CO2,环境中培养,18-24,小时，检视有无细菌生长。根据菌落特点及染色后镜检的特征，初步判断细菌种类，并进一步做生化鉴定及血清学检查加以鉴定，并作出报告。,3.,结果报告,细菌性脑膜炎的病原学诊断,鉴别诊断病毒性脑膜炎,（一）尿液标本中常见的细菌,革兰阳性细菌,金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、酿脓链球菌、肠球菌、厌氧链球菌、结核分支杆菌,革兰阴性细菌,淋病奈瑟菌,大肠埃希菌、变形杆菌、伤寒及副伤寒沙门菌、肺炎克雷白菌、产气肠杆菌、铜绿假单胞菌、不动杆菌、沙雷菌、厌氧菌,其它,支原体、衣原体、念珠菌,三、尿液的标本的细菌学检验,（二）标本采集,标本采集：,一般培养采用清洁,中段尿,。采样前，用肥皂水或清水清洗外阴，排出尿液前段需丢弃，中段和后段尿液,10-20ml,盛装于无菌的容器。,肾盂尿采集法,膀胱穿刺尿采集法,结核菌涂片或培养用,24,小时尿取沉淀。,(,三）细菌学检验,1.,检验程序：见图,18-4,2.,检验方法：,直接镜检,-,离心沉淀涂片革兰染色,-,淋球菌镜检,假丝酵母镜检,结核分枝杆菌镜检,检测方法和报告,分离培养,-,普通,培养：,-,淋,球菌培养：,-,厌氧菌,培养：,-,真菌,培养：,检测方法和报告,菌落计数,倾注平皿法：尿液稀释成,1,：,10,、,1,：,100,、,1,：,1000,，取此液,1ml,放入直径,9cm,灭菌平皿内，同时加入已熔化并冷至,50,的培养基与尿混合，待凝固后置,35,培养。,定量接种环涂抹法：使用,1ul,的定量接种环沾满尿液，在分离培养基分离培养。生长的菌落数乘以,1000,，等于每毫升尿中的菌数。,报告：,革兰阴性菌,10,5,cfu/ml,，,革兰阳性菌,10,4,cfu/ml,有临床意义,阴性报告为,“,48h,培养无菌生长,”,四 粪便标本的细菌学检验,（一）粪便中常见病原体,正常人的肠道内存在大量正常菌群,粪便中常见病原体见表,18-5,（二）标本的采集,自然排便法：挑取脓血、黏液的粪便,2-3g,于无菌的纸盒中，或放置于增菌液中送检,直肠肛拭子法：直接送检或放入运送培养基中送检,（三）细菌学检验,1.,检验程序,2.,检验方法,针对特殊细菌，如霍乱弧菌、结核、真菌等,-,霍乱弧菌：鱼群样排列的革兰阴性菌，动力阳性,-,葡萄球菌：金葡菌引起的假膜性肠炎,-,结核分枝杆菌：,-,艰难梭菌：革兰阳性粗大杆菌，无荚膜、有芽孢,-,空肠弯曲杆菌：细小、弧形、,S,形或螺旋形革兰阴性,（,1,）直接镜检,（,2,）分离培养,-,沙门菌及志贺菌,：增菌培养或直接接种于,SS,和,MAC,、,CB,，,3718-24h,培养，挑取可疑菌落接种,KIA/MIU,，进一步做生化和血清凝集试验,-,霍乱弧菌,：碱性蛋白胨水,37,增菌,6h,，挑取菌膜接种,TCBS,平板，,37,培养,16-20h,，挑选可疑菌落氧化酶阳性，多价,“,O,”,诊断血清凝集试验,-,大肠杆菌培养,：挑取脓血、黏液的粪便接种于,MAC,或,EMB,，,37,培养,18-24h,，挑取可疑菌落接种,KIA/MIU,，进一步做生化和血清凝集试验,-,金黄色葡萄球菌培养,：接种于高盐甘露醇琼脂，,37,培养,18-24,小时,-,副溶血弧菌培养,：增菌后接种与弧菌选择性培养基与,SS,培养基。,3.,结果报告,（,1,）涂片镜检,（,2,）分离培养,检测引起腹泻、食物中毒的肠道菌致病菌,检测肠道正常菌群，预防菌群失调,（,3,）阴性结果：未检出*菌,五、（痰）呼吸道标本,（一）痰液中常见病原体（见表,18-6,）,呼吸道标本有正常菌群,用于检测呼吸系统，鼻咽部的感染。,与临床联系，找到病原菌,（二）,标本采集：,咽拭子采集法：,自然咯痰法：,小儿取痰法：,气管镜采集法：,胃内采痰法：,气管穿刺法：,（三）细菌学检验,1.,检验程序,2.,检验方法,显微镜检查,直接镜检：观察痰液质量,染色镜检：观察细菌或分枝杆菌,分离培养,培养前处理：,均质化：,净化：,普通培养：接种于,BA,，,10%CO,2,37,培养,18-24,小时，挑取可疑菌落涂片、染色，进一步做生化鉴定。,结核杆菌培养：,分离培养,厌氧菌培养：接种两个,BA,，同时做厌氧与需氧培养,真菌培养：接种,SA,，,37,或,22,培养,48,小时,白喉棒状杆菌：接种亚碲酸盐培养基上，,37,培养,48,小时，典型菌落做生化、毒力试验,百日咳鲍特菌：接种,BG,培养基，,37,培养,2-5,天，挑取可疑菌落涂片、血清学试验,六、脓液及创伤分泌物,（二）标本采集,封闭性脓肿：注射器抽取,开放性脓肿：,烧伤创面：,（一）脓液中常见病原体见表,18-7,（三）细菌学检验,2.,检验方法,（,1,）涂片镜检：,革兰染色镜检,放线菌挑取硫磺颗粒镜检,1.,检验程序,（见表,18-7,）,（,2,）分离培养,-,普通细菌培养,：分别接种于,BA,或,EMB,平皿上，置,37,培养,18-24,小时，检视有无细菌生长。根据菌落特点及染色镜检特征，初步判断细菌种类，并进一步做生化鉴定,-,厌氧培养,：疑似炭疽芽孢杆菌：接种,BA,，或增菌后,8020,分钟加热后移种,BA,，,37,培养,18-24,小时，挑取可疑菌落染色镜检，并进一步做生化试验、动物试验。,3.,结果报告,（,1,）初步报告,（,2,）分离培养鉴定,（,3,）,48,小时无细菌生长,谢谢！,谢谢！,