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to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,*,理工大课件常用临床病原学检测,(优选)理工大课件常用临床病原学检测,一、标本采集和运送,(一)微生物标本采集的一般原则:,1.早期采集:,采集时间最好是病程早期、急性期或症状典型时,而且必须在使用抗生素或其他抗菌药物之前采集。,2.无菌采集:,采集的标本应无外源性污染。在采集血液、脑脊液、胸腔积液、关节液等无菌标本时,应注意对局部及周围皮肤的消毒,严格进行无菌操作;对于与外界相通的腔道,如窦道标本应由窦道底部取活组织检查,而不应从窦道口取标本,以免受皮肤表面正常菌群的污染,造成混淆和误诊;对于从正常菌群寄生部位(如口腔)采集的标本,应明确检查的目的菌,在进行分离培养时,采用特殊选择性培养基。采集的标本均应盛于无菌容器内,盛标本的容器须先经高压灭菌、煮沸、干热等物理方法灭菌,或用一次性无菌容器,而不能用消毒剂或酸类处理,。,2,3.,方法得当,:,即根据检测的目的菌采用适宜的方法。如,,厌氧菌、需氧或兼性厌氧菌,以及L型菌采用的方法不同。如尿液标本,疑为厌氧菌感染时,应以无菌注射器从耻骨上缘行膀胱穿刺术抽取;若怀疑是需氧或兼性厌氧菌的感染。则可通过自然导尿获取标本。,4.标本适量:,采集量不应过少,或过多,,而且要有代表性,同时有些标本还要注意在不同时间采集不同部位标本。如肠热症患者,发病的第1周应采集血液,第2周应采集粪便和尿液。否则影响细菌检出率。,5.,安全采集:,采集标本时不仅要防止皮肤和黏膜正常菌群对标本的污染。同时也要注意安全,防止传播和自身感染。,3,(二)微生物标本运送的一般原则:,1.,及时送检!,-,标本采集后应立即送至微生物学实验室。,-,标本采集后在室温下超过2h未送达实验室者可视为不合格标本。,2.,标识无误!,-,送检标本必须与检验申请单有相同的唯一标识,而且送检标本应注明标本来源和检验目的。,3.,正确运送!,如:棉拭子宜用运送培养基;可能混有正常菌群的标本不能用肉汤培养基运送;血培养瓶室温运送;尿液标本不能及时送检时,可,4,冷藏,但若用于淋病奈瑟菌培养时则需室温保存和运送;胸腹水等无菌体液可用无菌小瓶送检,也可直接注入血培养瓶中送检,等等。当标本不能及时送检时,应使用运送培养基。,4.,安全运送!,-,标本在运送过程中保证无渗漏、无污染等。,4,(一)直接显微镜检测法,(即形态学检查),-,涂片染色法,:常用的有革兰染色、抗酸染色,主要用于直接观察细菌形态、染色性状或观察宿主细胞内包涵体的特征等。,-,悬滴法或压片法,:需借助暗视野显微镜或相关显微镜,主要用于观察病原体的生长、运动方式、螺旋体的形态或动动。,2.,病原体特异性抗原检测,-,用已知抗体,借且免疫荧光技术、酶联免疫技术、化学发光技术、胶乳凝集试验、对流免疫电泳等技术检测标本中未知的病原体抗原。,二、微生物检查方法,5,形态学检查,革兰氏染色,6,-涂片染色法:常用的有革兰染色、抗酸染色,主要用于直接观察细菌形态、染色性状或观察宿主细胞内包涵体的特征等。,(三)病原体的分离培养和鉴定,但对于革兰阴性微生物则否,由于大多产b-内酰胺酶。,现在的药敏判断标准和疗效判定的指标不一致,优点:选药灵活、便宜、一个平皿可测多个药,头孢噻肟或头孢曲松治疗脑膜炎需用最大剂量,尿液标本不能及时送检时,可4冷藏,但若用于淋病奈瑟菌培养时则需室温保存和运送;,从脑脊液中分离的流感嗜血杆菌,常规只测试和报告:氨苄西林、一种三代头孢菌素(多为头孢曲松或头孢噻肟)、氯霉素和美罗培南,头孢噻肟/克拉维酸-头孢噻肟,如:棉拭子宜用运送培养基;,(优选)理工大课件常用临床病原学检测,头孢噻肟或头孢曲松治疗脑膜炎需用最大剂量,氧化酶、接触酶等单项检测试验。,但对于革兰阴性微生物则否,由于大多产b-内酰胺酶。,(优选)理工大课件常用临床病原学检测,(即检测为敏感即为敏感,耐药即为耐药)。,一、观察细菌的培养特征来判断,观察内容包括:细菌培养物的颜色、气味、溶血性、菌落形态、细菌动力及在液体、半固体、固体培养基中的生长状态;,MIC接近血、体液中药物的浓度,治疗反应率低于敏感株,常规用药时达到的平均血药浓度超过细菌的MIC 5倍以上。,MICMIC,:,内酰胺类,大环内酯类,浓度依赖型(,AUC/MIC,比率:,AGS,FQ,这些参数可用于计算具有最佳药效的给药方案,选药原则,主要根据,细菌种类,和,抗生素作用机制,选药。选择试验的药物应具有确切的临床疗效,试验药物的体外试验结果可以接受,并且试验药物具有,代表性,。,22,预报用药,测试药菌名 推测其它药物的敏感性,苯唑西林葡萄球菌所有,-内酰胺类,四环素所有(除葡多西环素,米诺环素,萄球菌和不,动杆菌,红霉素,G,球,菌,罗红,霉素,,克拉,霉素,,阿奇,霉素,克林霉素所有林可霉素,测试药 菌名 推测其它药物的敏感性,氨苄西林 肠球菌青霉素,青霉素,G,葡萄球菌,氨苄,美洛,替卡,头孢噻吩,肠杆菌科,拉定,氨苄,克罗,万古霉素,s,所有,替考拉宁,s,奈啶酸,肠杆菌科,所有,FQ,s,预报用药,报告结果方式,敏感(,S,),用常规用量治疗有效,常规用药时达到的平均血药浓度超过细菌的,MIC 5倍以上。,耐药(,R,),用常规用量治疗不能抑制细菌的生长,MIC,高于药物在血、体液中可能达到的浓度,中介,(I),MIC接近,血、体液中药物的浓度,治疗反应率低于敏感株,药物生理浓集部位有效,(,尿,FQ),加大用药剂量可能有效,非敏感(,NS,):,由于没有耐药菌株或耐药菌发生罕见,此分类特指仅有敏感解释标准的分离菌株。,报告结果方式,现代感染的特点是,低免疫人群大大增多,条件致病菌、非致病菌引起的感染增多,这些特点给致病菌的判断带来了困难。,头孢曲松25mm(或MIC2ug/ml),MIC(g/ml),(优选)理工大课件常用临床病原学检测,-悬滴法或压片法:需借助暗视野显微镜或相关显微镜,主要用于观察病原体的生长、运动方式、螺旋体的形态或动动。,头孢他啶22mm(或MIC2ug/ml),-标本采集后应立即送至微生物学实验室。,即根据检测的目的菌采用适宜的方法。,=抑菌圈直径增大值5mm(或MIC减低3个倍比稀释度),一、观察细菌的培养特征来判断,观察内容包括:细菌培养物的颜色、气味、溶血性、菌落形态、细菌动力及在液体、半固体、固体培养基中的生长状态;,红霉素G球菌 罗红霉素,克拉霉素,阿奇霉素,生物化学法又叫生化反应试验,它是利用各种不同细菌在进化中形成的独特的酶系统,在其生长环境中加入相应作用底物和指示剂,经培养一定时间后,细菌的代谢产物呈现肉眼可
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