支气管肺泡灌洗液相关实验室操作课件

单击此处编辑母版标题样式,编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,31,4,*,*,11,大家好,支气管肺泡灌洗液相关实验室操作,LOGO,COMPANY LOGO,目 录,CONTENTS,1,2,3,BALF,标本保存运送,形态学检查,病原学检查,支气管肺泡灌洗液（,BALF,）,BALF,是通过支气管镜向支气管肺泡内注入生理盐水并进行抽吸，收集肺泡表面液体，通过检查细胞成分、可溶性物质和感染性病原体，诊断肺部相关疾病、评价疗效和预后。标本包括：,BALF,和保护性毛刷（,PSB,）,适应症,肺部感染，特别是免疫受损患者肺部机会性感染的病原体诊断。,肺部不明原因阴影、疑似肺部感染或需与其他疾病鉴别。,BALF,采集,BALF,收集,：由专科医生采集。用于病原学分析的标本需用无菌容器收集；细胞学分析需选择塑料容器或硅化的玻璃容器以减少细胞的黏附。,送检量至少,5,毫升（,10-20,毫升最佳）,。,检测目的,转运条件,保存条件,检测方法,细菌,无菌容器，室温，,2h,4,，,24h,革兰染色,定量培养,奴卡菌,革兰染色,弱抗酸染色,培养,军团菌,培养（,BCYE营养培养基、GVPC及MWY筛选培养基）,核酸检测,抗原检测（DFA）,真菌,无菌容器，室温，,2 h,4,，,24 h,KOH压片、荧光白染色,真菌培养,曲霉,KOH压片或荧光白染色,真菌培养,半乳甘露聚糖抗原试验（GM）,肺孢子菌,六胺银染色,核酸检测,抗原检测,隐球菌,墨汁染色,真菌培养,隐球菌荚膜多糖抗原,分枝杆菌,无菌容器，室温，,2 h,4,，,24 h,涂片抗酸染色,(萋-尼染色、荧光染色),分枝杆菌培养,核酸检测（,Xpert MTB/RIF）,病毒,病毒转运培养基，室温，,2 h,4,，,5 d；-70,，,5 d,核酸检测,病毒抗原检测（DFA、胶体金法）,分离培养,寄生虫,无菌容器，室温，,2 h,4,，,24 h,直接镜检,核酸检测,抗原检测（ELISA、ICT）,2024/11/26,8,BALF标本运送与保存,室温条件下2h内送至实验室。,若延迟送检，可将标本放置于,2,8,保存，但不可超过,24h,。,BALF,临床应用,BALF,诊断的疾病,弥漫性间质性肺病,2,3,1,4,职业性肺部疾病,延迟符,5,肺部感染,肺部肿瘤,儿科肺部疾病,延迟符,形态学检查（细胞分类）,淋巴、中性粒细胞 高倍,纤毛上皮细胞 油镜,细胞学分类的临床意义,中性粒细胞比例增高为主时，见于各种细菌或真菌等感染；,淋巴细胞比例增高为主时，见于病毒性肺炎、结节病或过敏性肺炎。,嗜酸粒细胞比例增高为主时，见于嗜酸粒细胞浸润症、支气管哮喘等。,延迟符,病原学检查,BALF标本病原体实验室检测,显微镜检查,革兰染色及,BALF,质量评价：建议使用细胞离心机制片，取适量,BALF,标本,600,1 000 r/min,离心,10,20 min,进行革兰染色。低倍镜下若鳞状上皮细胞占全部细胞比例,1%,，提示标本被上呼吸道分泌物污染；柱状上皮细胞,5%,时,提示,BALF,并非来自于远端气腔。观察革兰染色结果及白细胞情况，如果见到噬菌现象，须报告吞噬细菌的中性粒细胞占或全部中性粒细胞的比例，通常数值为,5%,时可作为肺炎诊断的阈值。,BALF标本病原体实验室检测,抗酸染色：,用于检测分枝杆菌，弱抗酸染色可用于检测奴卡菌。,氢氧化钾,(KOH),压片：,用于真菌，特别是丝状真菌的形态学观察。,墨汁染色：,用于隐球菌的检测。,六胺银染色：,常用于肺孢子菌的检测。,免疫荧光显微镜：,可用于军团菌、肺孢子菌及病毒的检测。,BALF标本病原体实验室检测,一般细菌培养（定量培养）：,（,1,）涡旋震荡,BALF,标本,30,60s,。,（,2,）定量接种：用经校准的加样器（或定量接种环）取,10,l,的,BALF,标本，分别点种于血平板和巧克力平板上且密集划线，有条件时最好采用灭菌,L,型玻棒涂布平板。还可取,100lBALF,接种于麦康凯或中国蓝培养基。,（,3,）孵育：将接种的平板放在二氧化碳培养箱（,5%,10%CO,2,）中，,35,培养,48 h,。,BALF标本病原体实验室检测,一般细菌培养（定量培养）：,（,4,）结果判定：分别对不同形态的菌落进行计数，乘上稀释倍数即为此细菌的菌落数。菌落计数,BALF,10,4,CFU/ml,或无菌防污染,BALF,10,3,CFU/ml,时认为是可能的病原菌，但不能机械使用该阈值，还要结合患者的实际情况及有无使用抗菌药物等因素综合判断。,BALF标本病原体实验室检测,真菌培养：,BALF,标本,1500,1800,g,，,离心,15,20min,，沉淀物混匀后接种于沙保平板上，,30,和,35,孵育,7d,，怀疑双相真菌时应使用带螺帽的培养基，孵育,6,周。,特殊病原菌培养：,BALF,离心后的沉淀物还可用于分枝杆菌、军团菌及病毒等的培养。,BALF标本病原体实验室检测,核酸检测：,用于病毒、军团菌、肺孢子菌或分枝杆菌等的检测。,真菌抗原：,半乳甘露聚糖试验（,GM,试验）主要用于曲霉的检测；目前有关,BALF,检测隐球菌荚膜抗原的研究证据较少，可考虑作为诊断的补充手段。,BALF标本病原体实验室检测,涡旋震荡,30,60 s,沉淀物混匀后,特殊病原菌培养：,分枝杆菌,真菌,军团菌,病毒等,真菌抗原：,半乳甘露聚糖,隐球菌荚膜多糖抗原,BALF,接种,10l BALF,上清液,显微镜检查：,不染色镜检,革兰染色,抗酸染色,弱抗酸染色,六胺银染色,墨汁染色,KOH,压片,免疫荧光染色,核酸检测：,病毒,军团菌,肺孢子菌,分枝杆菌等,定量培养,适量,BALF,标本,6001 000r/min,离心,1020 min,剩余的,BALF,标本,1 500,1 800,g,离心,15,20 min,革兰染色,标本质量评估,临床意义,微生物学涂片检查：,BALF,中的沉淀物进行革兰染色、抗酸染色及真菌的特殊染色，对细菌、分枝杆菌、真菌及寄生虫的检出有较大意义。,微生物学培养：,在严格无菌操作下采集的,BALF,进行直接接种培养或取其沉淀物进行培养，对检测细菌及真菌具有较大的临床意义，,BALF,细菌培养计数,10,4,CFU/ml,或无菌防污染,BALF,10,3,CFU/ml,时具有临床诊断意义。,灌洗液中,GM,测定：,取,510ml,灌洗液置于无菌容器中，,4 h,内送检；对于早期快速诊断侵袭性肺曲霉病，特别是气道曲霉感染的患者具有重要的临床价值。,对于某些特殊病原体，,如病毒、肺孢子菌及寄生虫等可通过,BALF,中的抗原或核酸测定进行诊断。,THANK YOU,延迟符,