HPV与宫颈癌和HPV的基因芯片检测

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,子宫颈癌与人乳头瘤病毒（HPV）的研究进展,一、宫颈癌的概述及其病因学研究进展,二、HPV的生物学研究,三、宫颈癌的早期筛查,四、宫颈病变的治疗,一、宫颈癌的概述及其病因学研究进展,宫颈癌最常见的妇科恶性肿瘤,据世界范围内统计，每年大约有50万左右的宫颈癌新发病例，占所有癌症新发病例的5%，其中80%的病例发生在发展中国家。我国每年宫颈癌新发病例约13.15万，占世界宫颈癌新发病例总数的28.8%，,发病率,仅次于乳腺癌位居第二,。,随着筛查制度的建立，世界宫颈癌的发病率和死亡率已经大幅下降。我国由70年代的10.28/10万下降到90年代的3.25/10万，但在高发病区，死亡率仍高居不下。,地区,死亡率(/10万）,世界,8.00,中国,3.25,北京,2.54,上海,3.8,山西阳城,36.00,患病年龄更趋于年轻化（发病年龄提前到45岁），发病史缩短。如吉林省在80年代统计宫颈癌,患者中小于35岁的妇女占4.8，而2000年已经占到34.1,子宫颈癌的危险因素：,行为危险因素：如性生活过早、多个性伴侣、多孕多产、社会经济地位低下、营养不良及性混乱等；,生物学因素：如细菌、病毒和衣原体等各种微生物的感染。,目前仅有少量研究表明宫颈癌可能存在着家族聚集现象。,宫颈癌的生物学病因研究进展：,*,早在十九世纪四十年代，一位意大利医生Regoni Stern最早提出结婚与否与宫颈癌的发生可能有关；,*,6070年代，人们的主要研究对象是HSV,HCMV等病原体；,*,1974年zur Hausen首次提出HPV感染与宫颈肿瘤有密切关系；,*,1977年Laverty在电镜中观察到宫颈癌活检组织中存在人乳头状瘤病毒（Human papillomavirus，HPV）颗粒；,*,1995年IARC专题讨论会：,高危型HPV持续感染是宫颈癌的主要病因,。,-99.7的宫颈癌患者都能发现高危型HPV感染,。,二、HPV的生物学研究,人乳头瘤病毒（,Human Papillomaviruses,HPV）,双链DNA无包膜病毒,环状DNA，约8Kb；,病毒颗粒直径为5055nm；,依靠宿主细胞进行复制、转录和翻译。,HPV病毒电镜图,型别：,已发现100多种不同的亚型（如果DNA序列同源性小于90，则定为新的亚型）。其中超过35种可以感染人类的生殖器官，约30种与肿瘤有关。,1）,低危型,：宫颈上皮内低度病变，引起外生殖器湿疣等良性性病（HPV 6、11、42）；2）,高危型,：宫颈上皮内高度病变，与宫颈癌的发生有关,（HPV,16、18,、31、33、35、39、45、51、,52,、53、56、,58,、59、66及 68）；,3）,中间型：,不确定型,。,分布,：,有些亚型和地区、宫颈癌的病理类型有关。,HPV45在非洲西部很常见，HPV39和59在美洲中部和南部常见，HPV52，58在中国常见。在宫颈鳞状上皮细胞癌中以HPV16（占51），在腺癌和腺鳞癌中HPV18分别占56和39。,型别与分布,表 HPV型别与宫颈病变,常见HPV型别,宫颈病变,6，11,湿疣，CIN I,16,CIN,18,CIN,30，40，58，69,CIN,31，33，35，39,CIN,45，51，52，56,CIN I,42，43，44,CIN I,53,正常宫颈上皮,54,尖锐湿疣,55,鲍温样丘疹病,59,VIN,61，62，64，67,VaIN,66,鳞癌,70,外阴乳头状瘤,HPV感染率,最常见的低危型（HPV6、11）,最常见的高危型（HPV16、18、31、33、45、58）,HPV16,HPV18,HPV45,HPV31,HPV33,Other,宫颈癌患者中高危型HPV感染率,表 不同HPV亚型的检出频率统计表,注：1.本表统计样本数为1153例，其中阳性样本数为119例；,由于检测样本中存在复合感染，故亚型的检出频率（该亚型的检出次数/所有亚型的检出次数）100，,所有亚型检出次数为226。,2.,本表统计数据由深圳市计生中心提供，HPV分型基因检测试剂由亚能生物技术（深圳）有限公司提供。,HPV基因结构,按功能可分为早期区(E区)、晚期区(L区)和非编码区（LCR）三个区域。,E区分为E1E7开放阅读框架，主要编码与病毒复制、转录、调控和细胞转化有关的蛋白（HPV无E3）。,L区分L1和L2，分别编码主要衣壳蛋白和次要衣壳蛋白。,LCR是E区与L区间-6.41.0Kb的DNA片段，可负责转录和复制的调控,HPV的致癌机理,HPV以,游离态,感染上皮细胞后，可以持续存在于染色体外，不引起任何病变，或引起良性病变和低度病变，如尖锐湿疣或轻度不典型增生等。而,癌变则与病毒DNA整合入宿主染色体密切相关,。,高危型HPV DNA链通常在E1或E2的开放读码框内断裂，使HPV DNA整合入染色体脆弱区。E6和E7具有促进和维持整合状态的功能。,HPV,E6蛋白间接抑制 p53活性,，阻碍细胞对DNA损伤的反应。（负向调节细胞的生长和分化）,HPV,E7蛋白与pRb结合后使其功能失活,，改变细胞周期的正常调控。,HPV感染途径及危险因素,感染途径：,主要为性传播和直接皮肤接触,特别案例：母亲分娩过程中传播至婴儿的口腔,危险因素：,1、年龄因素：30岁以后,HPV,感染率下降；,2、性行为的影响：初次性交年龄越小，性伴侣数量越多，感染率越高；,3、避孕方法：尚无一致意见；,4、免疫抑制状态使,HPV,感染的危险性增加：如,HIV,感染后、肾移植等。,三、宫颈癌的早期筛查,未见上皮内病变鳞状上皮细胞异常腺上皮细胞异常,ASC（Atypical Squamous Cells)：非典型鳞状上皮细胞,ASC-US（ASC of Undetermined Signification）:意义不明确的非典型鳞状上皮细胞,ASC-H（ASC cannot exclude HSIL）：意义不明确的非典型鳞状上皮细胞不除外高度鳞状上皮内病变,L-SIL（Lowgrade Squamous Intraepithelial Lesion）：低度鳞状上皮内病变HPV感染、CIN I,H-SIL（Highgrade SIL）：高度鳞状上皮内病变与CIN II、CIN III或原位癌含义一致,SCC（Squamous Cell Carcinoma）：鳞状细胞癌,AGC（Atypical Glandular Cells)：非典型腺上皮细胞,AIS（Adenocarcinoma In Situ)：腺原位癌,ACA（Adenocarcinoma）：腺癌,组织学检查的分类：,CIN（Cervical Intraepithelial Neoplasm)：宫颈上皮内瘤变,CIN I：轻度不典型增生,CIN II：中度不典型增生,CINIII：重度不典型增生、原位癌,2001年版TBS（The Bethesda System)报告分类中常见的细胞学诊断宫颈癌前病变的几个术语解释：,正常妇女,HPV暴露,主要是性传播,感染几率：40,HPV,年龄30岁,平均824个月,CIN I（组织学）,CIN II/III（组织学）,无细胞学改变/HPV消除,子宫颈浸润癌,机体免疫机制,辅助致癌因素,图 HPV感染与宫颈病变的自然过程,潜伏感染期 亚临床感染期 临床症状期 HPV相关肿瘤期,510年,平均812年,病变,进展（恶化）,持续（稳定）,消退（逆转）,级别,单纯HPV,CIN I,CIN II,CIN III,风险率(%),5,15,30,45,持续率(%),15,37,35,56,消退率(%),80,57,43,32,表 CIN级别发展为CC的风险评估,说明：CIN级别越高，其消退和逆转的机会越小。,临床提示，从HPV的持续感染到一般的宫颈癌前病变并最终发展为宫颈癌大约需要5-,10,年。因此，必须采取适当的预防和筛查措施，才能够阻止宫颈癌的发生并有望最终根治。,筛查是早诊早治关键,筛查间隔时间,（年）,1,2,3,35,510,10,阳性病变风险系数,1,2,2.5,3,4,9,备注：13年筛查间隔比较安全，随着筛查间隔的增加，风险大幅度增加。,表：筛查间隔时间与阳性病变风险系数表,表：,不同的筛查频率，可以降低的宫颈癌的累积发病率,筛查频率,累积发病率的降低（）,每年筛查一次,90-93,每两年筛查一次,86-91,每三年筛查一次,75-88,一生筛查5次,61-74,一生筛查3次,35-55,一生筛查2次,29-42,一生筛查一次,17-32,摘自：Goldie SJ,et al.2001.13；筛查策略所应用方法包括：1-VIA检查，2-HPV检测，3-巴氏涂片。,筛查对象,：,三年以上性行为或21岁以上有性行为的妇女。,起始年龄,：,经济发达地区：2530岁，经济欠发达地区：3540岁，,高危人群起始年龄应相应提前。,终止年龄,：,65岁以上危险性极低。,筛查间隔,：每年一次，若连续两次,HPV,和细胞学筛查均为正常，可 延长筛查间隔时间至58年。,中国癌症研究基金会（CCRF）,宫颈癌筛查及早诊早治指南,中国癌症研究基金会（CCRF）,宫颈癌筛查及早诊早治指南,筛查方案：,基本方案：肉眼观察冰醋酸试验（碘液试验）,一般方案：,pap smear+HPV,检测,最佳方案：,TCT+HPV,检测,随访对象,：细胞学低度病变、,CIN I,以上者、“特殊职业”妇女人群、年龄 30 岁以上的高危,HPV,感染者，每年定期随访检查。,注意事项,：,1、月经来潮后1018天为最佳检查时间,2、检查前48,h,内不要做阴道冲洗，不用使用阴道内用药物,3、检查前48,h,内不要行性生活,宫颈癌的常规临床检测方法,临床检查：如肉眼观察、阴道镜等,操作简便，但准确率和特异性有待提高,（50-70）,细胞学检测,：,观察宫颈上皮细胞的变异，常见方法有：巴氏涂,片、LCT、TCT等,1,）长期宫颈糜烂可导致宫颈上皮细胞形态变异，但非HPV引起的细胞形态异常与宫颈癌病变没有直接联系。,2）在感染早期，细胞往往不会出现形态变化，但,此时,HPV,对细胞内遗传物质的损伤可能已经产生。,病毒学检测：HPV DNA检测（PCR方法），常见方法有：基因芯,片分型检测、荧光PCR等,特异性强、灵敏度高，操作简便快捷,(98%),HPV基因分型快速诊断试剂,应用膜杂交技术建立的敏感、特异、简便的检测方法，可同时对23种HPV亚型(18种高危型及5种低危型)进行检测。,HPV,基因分型快速诊断试剂操作流程,采集样本,提取DNA,PCR扩增,杂交,显色,结果判断,检测结果：HPV16、HPV43,检测结果：HPV33、HPV35,（,一）宫颈病变的筛查,1、,HPV,检测的最大优势之一在于发现高危型,HPV,阳性而细胞学涂片正常的妇女，因为这一人群中10会在四年内发展成,CIN。,2、,筛查并浓缩高风险人群，便于进行有效监控，早期发现宫颈癌。,3、,HPV,检测的阴性预测值为99，可将筛查间隔延长至3年一次，大大地降低了检查成本。,敏感性：88100,特异性：98,阴性预测值：几乎100,HPV检测的临床意义,图：德、法、英三个国家研究数据总概,HPV（）是宫颈病变的重要依据，持续的HPV感染是CINII/CIN III的重要条件。,（二）ASCUS和低度病变的分流,1、HPV检测通过排除可疑的或低度病变，从而提高诊断的可信度，降低漏诊的风险。,2,、,把具有潜在宫颈癌风险的妇女从低风险的妇女中区分出来，指导阴道镜的合理使用。,3、比起复查细胞学，HPV检测提供了更快捷的结果，从而很有信心地把HPV阴性的妇女重新放回常规筛查人群中。,病例数：3000例，图显示HPV的相对风险随CIN 的级别上升而明显增加,（三）CIN治疗后随诊,1、可预测病变恶化或术后复发的风险，有效指导术后追踪。,2,、,术后6个月、12个月检测H