实验2植物细胞切片的制作(精品)

,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,实,验,2,植物,细胞,切片的制作,一、,实验,目的要求,掌握各种植物切片的制作方法，认识植物细胞在显微镜下的基本结构及组织类型，了解各种植物组织的形态特征和分布。,二、,实验,用品和材料,1,、,显微镜、尖嘴镊子、刀片、载玻片、盖玻片、吸水纸、解剖针、纱布、碘液。,2,、,蚕豆（芹菜）茎和叶,3,、,洋葱或玉米根尖纵切永久制片,4,、,南瓜或向日葵茎横、纵切永久制片,.,5,、,洋葱鳞叶、马铃薯块茎。,三、内容与方法,（一）临时切片制作,、,徒手切片法,（重点）,、,整体装片,适合于植物体形小而扁平的材料。如菌丝、孢子束、藓类。,、,涂抹法,用于极小的植物体或组织。如细菌，酵母，花粉，淀粉，晶体等。,4,、,撕片法,适用于某些植物茎、叶容易撕下表皮的植物，如洋葱鳞茎、蚕豆叶等。,5,、,压片法,适用于幼嫩组织中细胞的观察，如根尖，茎尖生长点的细胞有丝分裂及花粉母细胞染色体等。,徒手切片法,徒手切片法,1,、取材,选取待观察的植物材料，初步切取大约3cm长的小块，再依切片的具体要求，将组织块修整为0.5cm的材料块。,2,、切片,1,）,以左手夹住材料，用右手平稳地握住刀片。,2,）,使刀片与材料的断面保持平行，刀口自左上方斜向右下方，动作要均匀有力。,3,）,材料与刀片须常以水湿润。,4,）,切下的薄片,，,立即用毛笔蘸水后粘取,，,移入盛有清水的培养皿内。,3,、选片,1,）,切片完整，在培养皿中选择薄而均匀,，,且切面完整的组织切片捞,出,;,2,）放,在载玻片上作临时水装片，然后置于显微镜下观察,；,3,）,如,果,结构能被清晰地显示出来，则可制成永久保存封片。,石蜡切片机,（二）永久装片的制作,1,、,材料预处理,将材料装在25ml规格的小指管，加入甘油酒精软化剂（甘油1份，70%酒精1份）8ml封盖后在电热恒温水浴锅5018h，第二天升温至608h进行软化。,2,、,蜡块制取,1）逐级脱水,将上述经软化的材料转入250ml已洗净的输液瓶中加入40ml，70%酒精脱水24h。分别加入各级酒精40ml，70%酒精脱水24h，85%酒精脱水12h，95%酒精脱水2h，无水酒精脱水1h。同时回收各级酒精。,2）染色,番红酒精染液染色（1g番红溶于100ml 50%酒精中，纱布过滤）染色24h。,3）透明,转入1/2二甲苯1/2无水酒精混合液20ml透明1h，纯二甲苯20 ml透明1h,再用纯二甲苯20ml透明40min，并回收各液。,4）浸蜡,将透明过的材料转入50ml小烧杯,在恒温箱内加入预先在温度保持在,5658恒温箱溶化并过滤的石蜡15ml，使材料完全被纯二甲苯与石蜡浸没，并使温度保持在3638,过夜浸蜡,24h，待二甲苯完全挥发，回收石蜡,再加入溶化并过滤的纯石蜡,40ml，温度保持在36381h，升温至56，使石蜡保持溶化状态。,5,）包埋：,将浸蜡完全的材料倒入预先制成的光滑的硬纸（,10.01.01.0,）制成的纸盒中制取蜡块，在恒温箱门的低坎处摆好纸盒，并写上名称，使其一面紧贴恒温箱的受热金属板，纸盒底面紧贴恒温箱底面金属板，倒入溶化石蜡,0.2,0.3,厚的薄层，,2min,后待薄层稍有凝固时将材料依次排列于其上，再倒入溶化石蜡，并用烧热的解剖针刺破其中的气泡，提着纸盒两端预留的盒耳将纸盒浸入盛有冷水的盆中冷却制成石蜡,块。,6,）石蜡块的修整：,剥去纸盒，用锐利的单面刀片把石蜡块切分为,2,长的小蜡块，并将各小蜡块的各面修整平，再将其修成长楔形。,3,、切片,1）固定石蜡块,：,用在酒精灯上预热,好,的解剖刀,，融,化修整好的石蜡块中少许蜡后,，,立即粘牢在小木块,（,2.5,21.5cm）上，待蜡完全凝固结实后,，,将小木块夹入切片机的固定夹板中固定,；,2,）,切片,：,调整切片机,的,切片厚度为814,m,切取石蜡块薄片,。,4,、,粘贴展平,选取洁净的载玻片,，,于中央用火柴棒粘取明胶粘贴剂（明胶2g电热恒水浴锅60水浴溶于1000ml蒸馏水，纱布过滤）,，,展成一薄层或滴加一滴蛋白甘油（取鸡蛋一个敲破流出蛋清，甘油即丙三醇，此粘贴剂较明胶粘贴剂理想）,，,用细玻棒展成一薄层，加蒸馏水一滴，挑取理想的蜡带贴于粘贴剂上，在酒精灯火焰稍过34来回,，,或恒温37展片台6min，使蜡展在粘贴剂上并展平。将展平的材料连同一侧贴有标签的载玻片,，,置于37电热恒温箱24h,，,使水分蒸干,，,或恒温37展片台12h,，,或室内自然晾干。,5,、,染色制片,1,）脱蜡：,将粘有蜡片的载玻片排列在装片架上，转入盛有,400ml,纯二甲苯的,1000ml,大烧杯中,20min,，杯口用塑料袋封严，再转入盛有,400ml,纯二甲苯的,1000ml,大烧杯中,10min,，杯口同样用塑料袋封严，使石蜡完全溶解。,2,）过渡：,将脱蜡完全的装片架转入盛有,400ml1/2,二甲苯,1/2,纯酒精混合液的,1000ml,大烧杯中过渡,5min,，杯口仍用塑料袋封严。,3,）下降至,70%,酒精（水）：,分别经,400 ml,纯酒精、,95%,、,85%,、,70%,酒精割,400 ml,（,50%,及,30%,酒精下降至蒸馏水），并回收各液。,4,）番红复染色：,400 ml 1%,番红酒精（水液）再染色,2h,。回收染液，并用自来水洗去多余的染液。,5,）继续脱水：,用,30%,、,50%,和,70%,酒精,400 ml,各处理,30s,1 min,，并回收各液。,6,）固绿复染：,用,0.1%,固绿的,95%,酒精,400 ml,复染,10,30s,，回收染液。,7,）再继续脱水：,用,95%,酒精和两次纯酒精彻底脱水，每次,10 s,1 min,，回收各液。,8,）透明：,用纯酒精和二甲苯各半的混合液,400 ml,处理,5 min,，再用,400 ml,纯二甲苯浸,5 min,，使材料完全透明，并回收各液。,9,）封片：,将载玻片自二甲苯中取出，立即滴一滴用二甲苯溶解的加拿大树胶于材料之上，加盖盖玻片。置玻片标本于烘箱中烘干即可。,