实验三 叶绿体色素的提取、分离和性质分析(精品)

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验三 叶绿体色素的提取、分离、性质及含量,一、实验目的,掌握叶绿体色素的提取方法；,掌握纸层析法分离叶绿体色素的原理和步骤；,掌握叶绿体色素的部分理化性质。,二、实验原理,2.,类胡萝卜素,（一）叶绿体色素：,胡萝卜素,叶黄素,叶绿素,a,叶绿素,b,1.,叶绿素,（二）四种色素的化学性质,均为亲脂性,亲水性：,均不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇、丙酮等有机溶剂提取。,极性大小：,叶绿素,b,叶绿素,a,叶黄素,胡萝卜素,根据相似相溶原理，在有机溶液中的溶解度：,叶绿素,b,叶绿素,a,叶黄素,胡萝卜素,叶绿素的卟啉环：,叶绿素分子头部的金属卟啉环中心均为,Mg,2+,。,在弱酸作用下，叶绿素分子中的镁可被,H,+,取代而形成褐色的去镁叶绿素，后者遇铜则可形成绿色的铜代叶绿素。,铜代叶绿素很稳定，在光下不易被破坏，故常用此法制做植物的原色标本。,（三）叶绿素的光学性质,叶绿素与类胡萝卜素都具有光学活性，表现出一定的吸收光谱，可用分光光度计精确测定。,叶绿素的荧光现象,叶绿素溶液在透射光下呈绿色，而反射光下呈红色的现象。,三、实验材料与试剂,新鲜的菠菜叶片。,95%,乙醇、,CaCO,3,、醋酸铜结晶、浓盐酸、汽油。,量筒，滤纸，大培养皿一只，小培养皿一只，长滴管，剪刀。,四、实验步骤,1,、叶绿体色素提取：,将菠菜叶片,擦净,，去中脉后取,10g,剪碎，加少许碳酸钙和石英砂，再,分次,加入,10mL,酒精,研磨，过滤，定容至,50ml,，分装于,5,个试管内，容量分别为,10ml,。,2,3,4,5,1,2,、叶绿体色素的分离,（纸层析法）,用滤纸条浸色素提取液（,试管,1,），吹干，反复多次；将带色素的滤纸条卷成灯芯，将表面皿放在培养皿内，注上汽油，把灯芯浸在汽油内，加盖，色素层分清后，取下吹干，即可看到分离的各种色素。,标明各层成分名称和判断依据。,3,、叶绿体色素吸收光谱曲线,取,1ml,提取液于比色杯中（,试管,2,），加,3ml95%,乙醇。,用,95%,乙醇作为对照，在,400700nm,之间每隔,20nm,测一次光。,记录波长和吸光度,A,于下表中，并在标准绘图纸上绘出叶绿体色素的吸收光谱曲线。,（,nm,）,400,420,440,460,480,500,.,600,620,640,660,680,700,A,4,、叶绿体色素含量的计算,在标准曲线上查出波长,600nm,时的叶绿体色素浓度。,叶绿体色素含量（,mgg,-1,）,=,样品鲜重（,g,）,叶绿体色素浓度（,mgL,-1,）,提取液体积（,mL,）,10,-3,5,、叶绿素提取液荧光现象观察,取试管,3,：,从与入射光垂直的方向观察；,再在透射光方向观察叶绿体色素溶液的颜色；,记录叶绿素体色素溶液颜色有何不同，分析原因。,6,、光对叶绿素的破坏作用,将试管,4,置于暗处，试管,3,置于强光下，照射,23,小时后，观察试管颜色的变化，解释这种现象。,7,、铜代叶绿素反应,向试管,5,中,逐滴,加入浓盐酸，并不断摇匀，至颜色变化，观察并记录现象；,向变色后的叶绿素溶液中加入,少量,醋酸铜，并在酒精灯上缓缓加热，观察并记录颜色的变化。,分析原因。,五、注意事项,分离色素用的圆形滤纸，在中心打的小圆孔，周围必须整齐，否则分离的色素不是一个同心圆。,每次改变波长后，要用,95%,乙醇重新调零。,六、实验结果,画图说明叶绿体色素纸层析结果，并解释原因。,在标准绘图纸上绘出叶绿体色素的吸收光谱曲线并计算色素含量。,解释叶绿素的荧光现象。,解释光对叶绿素的破坏作用现象。,解释叶绿体色素分子的替代作用现象。,七、思考题：,1,、用不含水的有机溶剂如无水乙醇、无水丙酮等提取干燥材料中的叶绿体色素，结果会如何？为什么？,、研磨提取叶绿素时，为何要加入,CaCO,3,？,3,、铜在叶绿素分子中具有替代镁的作用，这有何实用意义？,