20章自动化仪器分析-XXXX

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,第二十章,免疫检验自动化仪器分析,1了解,免,免疫检,测,测自动,化,化的基,本,本概念,2了解,免,免疫检,测,测自动,化,化设计,的,的基本,原,原理,3了解,免,免疫检,测,测自动,化,化仪器,在,在临床,上,上的应,用,用,4掌握,常,常用的,几,几种免,疫,疫检测,自,自动化,仪,仪器的,检,检测原,理,理、应,用,用以及,评,评价，,本章重,点,点,免疫检,验,验自动,化,化,(automationofimmunoassays,),),是将免,疫,疫学反,应,应检测,过,过程中,的,的取样,、,、加试,剂,剂、混,合,合、温,育,育、固,相,相载体,分,分离、,信,信号检,测,测、数,据,据处理,、,、打印,报,报告和,检,检测后,的,的仪器,清,清洗等,步,步骤由,计,计算机,控,控制，,自,自动化,进,进行。,第一节,自,自,动,动化免,疫,疫浊度,分,分析系,统,统,免疫浊,度,度分析,属,属液相,沉,沉淀试,验,验，其,基,基本原,理,理是：,抗原、,抗,抗体在,特,特定的,电,电解质,溶,溶液中,反,反应，,形,形成小,分,分子免,疫,疫复合,物,物（19S），使,反,反应液,出,出现浊,度,度。在,抗,抗体稍,微,微过量,且,且固定,的,的情况,下,下，形,成,成的免,疫,疫复合,物,物量随,抗,抗原量,的,的增加,而,而增加,，,，反应,液,液的浊,度,度亦随,之,之增大,，,，即待,测,测抗原,量,量与反,应,应溶液,的,的浊度,呈,呈正相,关,关。,一、免,疫,疫透射,比,比浊法,【原理】一定波,长,长的入,射,射光线,通,通过抗,原,原抗体,反,反应后,的,的溶液,时,时，被,其,其中的,免,免疫复,合,合物微,粒,粒吸收,、,、反射,和,和折射,而,而减弱(图9-7,),)，在一,定,定范围,内,内，吸,光,光度与,免,免疫复,合,合物量,呈,呈正相,关,关，而,形,形成的,免,免疫复,合,合物量,与,与参与,反,反应的,抗,抗原和,抗,抗体的,量,量呈函,数,数关系,。,。与已,知,知浓度,的,的抗原,标,标准品,比,比较，,可,可确定,标,标本中,抗,抗原含,量,量。,二、免,疫,疫胶乳,比,比浊法,原理用抗体,致,致敏的,大,大小适,中,中、均,匀,匀一致,的,的胶乳,颗,颗粒（一般,为,为0.2m），在遇到,相,相应抗,原,原时，,胶,胶乳颗,粒,粒上的,抗,抗体与,抗,抗原特,异,异结合,，,，引起,胶,胶乳颗,粒,粒凝聚，使透射光,和,和散射,光,光即出,现,现显著,变,变化。,如,如图所,示,示：a为单个,胶,胶乳颗,粒,粒不阻,碍,碍光线,透,透过，b为抗原,抗,抗体结,合,合形成,的,的凝聚,胶,胶乳大,颗,颗粒使,透,透射光,减,减弱或,散,散射光,增,增强。,三、免,疫,疫散射,比,比浊法,【原理】,粒子对,光,光线的,散,散射作,用,用是溶,液,液中的,微,微粒子,受,受到光,线,线照射,后,后，微,粒,粒子对,光,光线产,生,生反射,和,和折射,而,而形成,散,散射光,。,。悬浮,微,微粒对,光,光散射,形,形成的,散,散射光,强,强度与,微,微粒的,大,大小、,数,数量、,入,入射光,的,的波长,和,和强度,、,、测量,角,角度等,因,因素密,切,切相关,，,，其公,式,式如下,：,：,式中I为与入,射,射光成角处散,射,射光强,度,度；和I0为入射,光,光的波,长,长和强,度,度；dn/dc为校正,因,因子，,反,反映了,溶,溶液折,射,射指数,和,和颗粒,浓,浓度的,变,变化；M为颗粒,分,分子量,；,；c为浓度,；,；N为阿佛,加,加德指,数,数；为颗粒,到,到检测,器,器的距,离,离；为散射,光,光与入,射,射光的,夹,夹角（,散,散射夹,角,角）。,II,0,42（dn/dc,),)2Mc(1+cos,),N24,颗粒直,径,径1/10Rayleigh散射,1/10颗粒直,径,径Debye散射,颗粒直,径,径Mile散射,定时散,射,射比浊,法,法（fixedtimenephelometry）,定时散,射,射比浊,法,法是在,保,保证抗,体,体过量,的,的情况,下,下，加,入,入待测,抗,抗原，,此,此时反,应,应立即,开,开始，,在,在反应,的,的第一,阶,阶段，,溶,溶液中,产,产生的,散,散射光,信,信号波,动,动较大,，,，所获,取,取的信,号,号计算,出,出的结,果,果会产,生,生一定,的,的误差,。,。定时,散,散射比,浊,浊法是,避,避开抗,原,原抗体,反,反应的,不,不稳定,阶,阶段，,即,即散射,光,光信号,在,在开始,反,反应7.5s2min内的第,一,一次读,数,数，专,门,门在抗,原,原抗体,反,反应的,最,最佳时,段,段进行,读,读数，,将,将检测,误,误差降,到,到最低,。,。,速率散,射,射比浊,法,法（ratenephelometry）,速率散,射,射比浊,法,法是抗,原,原抗体,结,结合反,应,应的动,力,力学测,定,定法。,所,所谓速,率,率是指,抗,抗原抗,体,体反应,在,在单位,时,时间内,形,形成免,疫,疫复合,物,物的速,度,度（不,是,是免疫,复,复合物,累,累积的,量,量），,连,连续测,定,定各单,位,位时间,内,内复合,物,物形成,的,的速率,与,与其产,生,生的散,射,射光信,号,号联系,在,在一起,，,，形成,动,动态的,速,速率散,射,射比浊,法,法，每,项,项检测,仅,仅1min2min即可完,成,成。,表抗,原,原抗体,复,复合物,形,形成的,速,速率,累计时间（,s,）,形成,IC,总量速率,累计时间（,s,）,形成,IC,总量速率,5,8,10,13,5,15,25,12,20,60,35,25,150,90,30,230,80,35,300,70,40,360,60,45,415,55,50,450,45,55,480,30,60,500,20,抗原抗,体,体反应,速,速率的,动,动态变,化,化,BNProSpec全自动,特,特定蛋,白,白分析,仪,仪,BNP防抗原,过,过量的,设,设计：,优化反,应,应条件,，,，令初,始,始稀释,度,度分析,范,范围更,宽,宽，保,证,证抗原,抗,抗体反,应,应呈最,佳,佳比例,预反应,程,程序：IgM，LamU，AlbU，,2,MU,VLinIntegral计算程,序,序,定时散,射,射比浊,法,法测定,原,原理示,意,意图,IMMAGE全自动,特,特定蛋,白,白分析,仪,仪,一、特,异,异性,二、比,例,例性,三、可,逆,逆性,一、抗,体,体来源,：,：兔，,羊,羊，-,-,-,二、亲,合,合力,三、浓,度,度,四、电,解,解质，,(,(增浊,剂,剂),五、pH,六、温,度,度,抗原抗,体,体反应,的,的特点,抗原抗,体,体反应,的,的影响,因,因素,抗体,抗体的,质,质量,特异性,强,强，效,价,价高，,亲,亲和力,强,强，R型,抗体的,含,含量,抗体过,量,量,抗体的,特,特异性,抗体只,针,针对相,应,应的抗,原,原，非,特,特异性,的,的交叉,反,反应会,引,引起伪,浊,浊度。,抗体的,效,效价,一个合,格,格的比,浊,浊用抗,体,体其效,价,价必须,在,在1：20（抗体,稀,稀释度,）,）以上,，,，否则,易,易形成,伪,伪浊度,。,。,抗体的,亲,亲和力,亲和力,强,强则抗,体,体活性,高,高，不,仅,仅可以,加,加快抗,原,原抗体,反,反应速,度,度，而,且,且形成,的,的免疫,复,复合物,较,较牢固,，,，不易,发,发生解,离,离。,R型抗血,清,清,以家兔,为,为代表,的,的小动,物,物血清,，,，如豚,鼠,鼠、大,白,白鼠、,家,家兔、,家,家禽、,羊,羊等动,物,物的免,疫,疫血清,。,。,这类抗,血,血清亲,和,和力高,，,，与抗,原,原结合,后,后不易,再,再解离,，,，抗体,过,过剩时,易,易形成,大,大而稳,定,定的复,合,合物，,抗,抗原过,剩,剩时则,形,形成可,溶,溶性复,合,合物。,H型抗血,清,清,以马为,代,代表的,大,大动物,血,血清，,如,如驴、,骡,骡、马,等,等动物,的,的免疫,血,血清。,该血清,亲,亲和力,弱,弱，抗,原,原抗体,结,结合后,极,极易再,解,解离，,抗,抗原过,剩,剩和抗,体,体过剩,皆,皆易形,成,成可溶,性,性复合,物,物。,pH：6.5,8.5,离子强,度,度：,在一定,范,范围内,，,，离子,强,强度大,，,，IC形成快,；,；离子,强,强度过,低,低或无,电,电解质,存,存在，,则,则不易,出,出现可,见,见的沉,淀,淀反应,。,。,3.增浊剂,的,的使用为了提,高,高抗原,抗,抗体复,合,合物的,形,形成速,度,度，常,常,常要加,入,入增浊,剂,剂，如,分,分子量,为,为60008000的3%4%聚乙二,醇,醇（PEG）或吐温-20（tween-20），以消除,蛋,蛋白质,分,分子周,围,围的电,子,子云和,水,水化层,，,，促进,抗,抗原抗,体,体结合,。,。但PEG浓度过,高,高，分,子,子量过,大,大会引,起,起血清,中,中其他,蛋,蛋白质,（,（如IgM、2巨球蛋,白,白、脂,蛋,蛋白）,非,非特异,性,性沉淀,，,，形成,伪,伪浊度,。,。因此,，,，使用,恰,恰当的,增,增浊剂,，,，合适,的,的浓度,是,是准确,测,测定所,必,必须的,。,4.伪浊度,非抗原,抗,抗体特,异,异性结,合,合形成,的,的浊度,，,，称为,伪,伪浊度,，,，可导,致,致抗原,检,检测结,果,果假性,升,升高。,伪,伪浊度,形,形成的,原,原因包,括,括混,浊,浊标本,、,、高血,脂,脂标本,、,、反复,冻,冻融标,本,本；,抗体效,价,价低（1:20）、抗,血,血清灭,活,活处理,、,、抗血,清,清含有,交,交叉反,应,应性抗,体,体等；,增浊剂PEG浓度过,高,高；,抗血清,细,细菌污,染,染和变,质,质；,器材尤,其,其是比,色,色杯不,清,清洁、,尘,尘埃污,染,染等；,缓冲,液,液的离,子,子强度,太,太高，pH和温度,不,不适合,等,等，都,对,对浊度,产,产生影,响,响。,5.标,准,准曲线,制,制备与,质,质量控,制,制应用仪,器,器规定,的,的标准,品,品制备,剂,剂量-反应曲,线,线，一,般,般采用5点或6点定标,，,，然后,选,选择适,当,当的数,学,学方法,进,进行曲,线,线拟合,；,；每更换,一,一批试,剂,剂，应,重,重新制,备,备剂量-反应曲,线,线。,为,为保,证,证结果,准,准确可,靠,靠，选,取,取合适,的,的质控,血,血清，,每,每次开,机,机进行,室,室内质,量,量控制,是,是极其,必,必要的,。,。,根据全,自,自动酶,联,联免疫,分,分析系,统,统的处,理,理模式,，,，人们,通,通常将,全,全自动,酶,酶免分,析,析仪分,成,成二类,，,，一类,为,为分体,机,机，一,类,类为连,体,体机。,分,分体机,是,是由“,前,前处理,系,系统”,即,即全自,动,动样本,处,处理工,作,作站和“后处理,系,系统”,即,即全自,动,动酶免,分,分析仪,两,两个独,立,立的部,分,分组成,。,。连体,机,机是由,多,多个模,块,块组成,，,，使用,一,一台计,算,算机、,一,一套操,作,作系统,实,实现了,从,从标本,稀,稀释、,加,加样到,酶,酶标板,孵,孵育、,洗,洗涤、,加,加试剂,、,、再孵,育,育、洗,涤,涤、读,数,数和结,果,果打印,全,全自动,进,进行。,自动化,酶,酶联免,疫,疫分析,系,系统,全自动,酶,酶免分,析,析仪可,对,对630块板酶,标,标板同,时,时进行,工,工作，,具,具有一,套,套完整,的,的工作,和,和分析,系,系统，,不,不同的,仪,仪器大,小,小不同,、,、配置,不,不同，,但,但性能,基,基本相