注意事项目的要求掌握溶剂萃取法提取微生物药物的原理和方法掌握课件

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用,液,-,固萃取,属于用液体提取固体原料中有用成分的扩散分离操作。,多用于提取存在于胞内的有效成分。,液,-,液萃取,溶剂萃取,利用溶质在两个互不混溶的液相（通常为水相和有机溶剂相）中溶解度和分配性质上的差异进行的分离操作。,可用于有机酸、氨基酸、维生素等生物小分子的分离纯化。,双水相萃取,利用物质在互不相溶的两水相间分配系数的差异进行,的分离操作。,主要用于蛋白质、酶，特别是胞内蛋白的提取纯化。,反胶团萃取,利用表面活性剂在有机相中形成的反胶团，从而在有机相中形成分散的亲水微环境，使生物分子在有机相（萃取相）内存在于反胶团的亲水微环境中。,适用于氨基酸、肽和蛋白质等生物分子的分离纯化，特别是蛋白质类生物大分子的分离。,液膜萃取,液膜能将与之不互溶的液体分开，使其中一侧液体中的溶质选择性地透过液膜进入另一侧，实现溶质之间的分离。,适用于金属离子、烃类、有机酸、氨基酸和抗生素的分离及废水处理，在酶的包埋固定化和生物医学方面的应用也前景广阔。,超临界流体萃取,利用超临界流体作为萃取剂，对物质进行溶解和分离。,适用于脂肪酸、植物碱、醚类、酮类、甘油酯、芳香成分等物质的萃取分离。,几种萃取方法的比较,萃取方法原 理应 用液-固萃取属于用液体提取固体原料中有,8,溶 剂 萃 取,溶 剂 萃 取,9,溶剂萃取,溶剂萃取,法（有机溶剂,萃取,）属于液,-,液萃取，,是一种常用的化工单元操作,。,它是利用溶质在两个互不混溶的液相（通常为水相和有机溶剂相）中 溶解度和分配性质上的差异进行的分离操作。,溶剂萃取 溶剂萃取法（有机溶剂萃取）属于液-液萃取，是一,10,溶剂萃取操作方式,混合：,分离：,溶剂回收：,溶剂萃取操作方式混合：,11,溶剂,萃取操作流程,分批萃取连续萃取,单级和多级萃取,多级,错流萃取,和,多级逆流萃取,溶剂萃取操作流程分批萃取连续萃取,12,影响溶剂萃取的因素,萃取剂（有机溶剂）,水相物理条件,pH,、温度、盐析、带溶液,乳化现象,影响溶剂萃取的因素萃取剂（有机溶剂）,13,溶剂萃取设备及选择,稳定性和停留时间；,溶剂物系的澄清特性；,所需要的理论级数 ；,设备投资和维修费；,设备装置所占的场地面积和建筑高度；,处理量和通量；,各种萃取设备的特性；,系统的物理性质。,溶剂萃取设备及选择稳定性和停留时间；,14,常用的液,-,液萃取装置,常用的液-液萃取装置,15,溶剂萃取的应用,石油化工,生物化工,精细化工,湿法冶金,溶剂萃取的应用石油化工生物化工精细化工湿法冶金,16,应用领域,应用实例,石油化工,分离轻油裂解和铂重整产生的芳烃和非芳烃混合物；,用酯类溶剂萃取乙酸,用丙烷萃取润滑油中的石蜡；,以,HF-BF3,作萃取剂,从,C,8,馏分中分离二甲苯及其同分异构体。,生物化工,以醋酸丁酯为溶剂从发酵液中萃取青霉素,精细化工,香料工业中用正丙醇从亚硫酸纸浆废水中提取香兰素,食品工业中用,TBP,从发酵液中萃取柠檬酸,湿法冶金,用溶剂,LIX63-65,等螯合萃取剂从铜的浸取液中提取铜,溶剂萃取的应用实例,应用领域应用实例石油化工分离轻油裂解和铂重整产生的芳烃和非芳,17,液,-,固萃取（浸取）,液-固萃取（浸取）,18,影响液,-,固萃取的因素,固体物料颗粒度,液,-,固萃取,溶剂,浸取操作条件的影响,影响液-固萃取的因素固体物料颗粒度,19,液,-,固萃取操作及设备,处理方法,固,定,床,移动床,分散接触式,间歇式,半连续式,连续式,多级接触型,微分接触型,接触方式,液-固萃取操作及设备处理方法固 定 床移动床分散接触式间歇式,20,双螺旋输送浸取器,双螺旋输送浸取器,21,液,-,固萃取的应用,产 物,豆,油,香,料,蔗,糖,维生素,B,中草药汁,固 体,大豆,丁香、胡椒等,甘蔗、甜菜,碎米,中草药材,溶 质,豆油,香料成分,蔗糖,维生素,B,药用成分,液-固萃取的应用产 物豆 油 香 料 蔗,22,超临界流体萃取,超临界流体萃取,23,超临界流体的概念与性质,概念,超临界流体,(SCF),是指在临界温度（,Tc,）和临界压力,(Pv),以上的流体。高于临界温度和临界压力而接近临界点的状态称为超临界状态。,种类,二氧化碳,一氧化亚氮,甲醇,乙烷,氨和水,超临界流体的概念与性质概念,24,超临界流体萃取的方式,超临界流体萃取的方式,25,超临界萃取的影响因素,压力,温度,流体密度,容积比,颗粒度,夹带剂,超临界萃取的影响因素压力,26,超临界流体萃取的特点,萃取剂的溶解能力易于通过调节温度和压力控制；,可在低温和无氧下操作，不破坏提取物中的活性组分，较适于热敏性 物 质的萃取；,可较快地达到平衡，萃取速率快，生产周期短；,溶剂可回收且简单方便，无溶剂残留；,萃取剂可重新使用，不产生三废，不污染环境。,超临界流体萃取的特点萃取剂的溶解能力易于通过调节温度和压力控,27,超临界流体萃取的应用,食品,医药,化妆品,生 物,化学,超临界流体萃取的应用食品医药化妆品生 物 化学,28,超临界,CO,2,萃取柑橘香精油的设备流程示意图,1.CO,2,储罐,2.,高压泵,3.,萃取釜,4,，,5,，,6.,阀门,7,，,8,，,9.,分离釜,10.,回流阀,超临界CO2萃取柑橘香精油的设备流程示意图,29,双 水 相 萃 取,双 水 相 萃 取,30,双水相萃取,定义,利用 物 质在互不相溶的两相间分配系数的差异来进行萃取的方法。,影响因素,成相聚合 物 和浓度,盐的种类和浓度,pH,和温度,双水相萃取定义 利用 物 质在互不相溶的两相间分配系数,31,分离物质,实例,体系,蛋白质,从奶酪中分离,乳球蛋白,PEG/,磷酸盐,从转基因羊乳中纯化药物蛋白,PEG/,硫酸铵,酶,从细胞培养液中提取脂肪酶,PEG/,磷酸盐,从发酵液中分离提取,-,淀粉酶和蛋白酶,PEG/,硫酸铵,从发酵液中分离提取葡萄糖苷酶,PEG/,硫酸铵,过氧化氢酶的分离,PEG/,葡聚糖,核酸,DNA,、,RNA,的分离,PEG/,葡聚糖,抗生素,从发酵液中萃取丙酰螺旋霉素,PEG/,磷酸盐,从发酵液中提取青霉素,PEG/,硫酸铵,多糖,微生物牛乳糖的纯化,PEG/,磷酸盐,线性和环状低聚糖的分离,PEG/,磷酸盐,色素,从猪心中提取细胞色素,C,PEG/,硫酸铵,抗体,从禽卵黄中提取,IgG,抗体,PEG/,磷酸盐,双水相萃取技术在生物分离中的应用实例,分离物质实例体系蛋白质从奶酪中分离乳球蛋白PEG/磷酸盐从,32,其他萃取技术,其他萃取技术,33,其他萃取技术种类,反微团萃取,液膜萃取,其他萃取技术种类反微团萃取,34,反微团萃取,反微团萃取（,reversed micellar extraction,）的研究始于,20,世纪,70,年代，但直到,80,年代才引起人们的重视。目前，该技术发展尚不成熟，是一种发展中的生物分离技术。,本质仍然是液,-,液有机溶剂萃取。,用途 氨基酸、肽和蛋白质的分离纯化,反微团萃取反微团萃取（reversed micellar e,35,液膜萃取,液膜萃取法又称液膜分离法，是一种以液膜为分离介质、以浓度差为推动力的分离操作。它是利用膜的选择透过性，使料液中的某些组分透过液膜进入接受液，然后将三者分开，从而实现料液组分的分离。,液膜萃取实际上是三个液相所组成的两个界面上的传质分离过程，是萃取与反萃取的结合。,液膜萃取 液膜萃取法又称液膜分离法，是一种以液膜为分离,36,液膜萃取,液膜种类,乳状液膜,支撑液膜,流动载体,膜增强剂,液膜萃取液膜种类,37,常见的支撑液膜组件,常见的支撑液膜组件,38,复习思考,试述萃取分离技术的种类及其原理。,影响有机溶剂萃取的因素有哪些？,举例说明超临界流体萃取技术在工业中的应用？,举例说明双水相萃取技术生物工业中有何应用？,液固浸取技术的操作有何特点？,复习思考 试述萃取分离技术的种类及其原理。,39,萃取操作示意图,萃取操作示意图,40,萃取、洗涤和反萃取操作过程示意图,萃取、洗涤和反萃取操作过程示意图,41,单级萃取示意图,单级萃取示意图,42,多级错流萃取示意图,多级错流萃取示意图,43,多级逆流萃取示意图,多级逆流萃取示意图,44,黑龙江生物科技职业学院,生物制药技术,生物分离技术,主讲人：张爱华,黑龙江生物科技职业学院 生物制药技术生物分离技术主讲人：,45,实验二,溶剂萃取法提取与 精制红霉素,实验原理,2,材料用具,3,操作方法,4,目的要求,2,1,5,5,注意事项,实验二 溶剂萃取法提,46,目的要求,掌握溶剂萃取法提取微生物药物的原理和方法,掌握溶剂萃取法提取微生物药物的步骤和操作要求,目的要求,47,原理,红霉素属大环内酯类抗生素，可在碱性条件下,溶于乙酸乙酯有机溶剂中，在酸性条件下溶于,水溶液中，在乙酸乙酯相中可成钾盐沉淀析出。,原理 红霉素属大环内酯类抗生素，可在碱性条件下,48,材料用具,2g,红霉素软膏,乙酸、乙酸乙酯（,BA,）、饱和食盐水、异丙醇、乙醇,-,醋,酸钾溶液（配制方法：取醋酸钾,10g,溶于,100ml,于水乙醇中，,配成饱和溶液，现用现配）,量杯、烧杯、布氏漏斗及配套抽滤瓶、培养皿、,分液漏斗、铁架及铁圈、玻璃棒、镊子、剪刀、,不锈钢扁匙、,PH,试纸、滤纸及纺绸布、真空烘箱。,材料用具 2g红霉素软膏乙酸、乙酸乙酯（BA）、饱和食盐水、,49,6ml,乙酸丁酯,红霉素软膏,2g,调,PH7.2,8.0,抽滤 澄清溶液,乙酸丁酯 乙酸丁酯,酸化,PH,为,3.5,6.0,萃取 收集下相液饱和食盐水,两次 两次,乙醇,-,醋酸钾,异丙醇,萃取 上层液 过滤 粗品 清洗干燥 精制品,静置,30min,操作方法,50,注意事项,1,、,通过调节溶液的,pH,值使红霉素转入有机溶剂相,或水相，应注意控制溶液的,pH,值。,2,、注意萃取时避免乳化现象。,注意事项2、注意萃取时避免乳化现象。,51,思考,题,1,、常用的萃取溶剂有哪些？,2,、为何选用饱和食盐水？,思考 题1、常用的萃取溶剂有哪些？,52,实验三 牛血清白蛋白在双水相萃取系统中的分配,实验原理,2,材料用具,3,操作方法,4,目的要求,2,1,5,5,注意事项,实验三 牛血清白蛋,53,目的要求,了解双水相系统成相的原理和方法。,掌握双水相系统分离蛋白质的操作,目的要求,54,原理,双水相系统中使用的双水相是由两种互不相溶的高分子,溶液或者互不相溶的盐溶液和高分子溶液组成。双水相,系统的制备，一般是将两种溶质分别配制成一定浓度的,水溶液，然后将两种溶液按照不同的比例混合，静止一,段时间，当两种溶质的浓度超过某一浓度范围时，就会,产生两相。,原理 双水相系统中使用的双水相是由两种互不相溶的高分子,55,原理,双缩脲反应是指蛋白质在碱性溶液中与二价铜离,子结合，生成紫红色络合物的反应。双缩脲是由,两分子尿素缩合而成的化合物，在碱性溶液中与,硫酸铜反应生成紫红色络合物。含有两个或两个,以上肽键的化合物都具有双缩脲反应。蛋白质含,有多个肽键，因此有双缩脲反应，其颜色的深浅,与蛋白质的含量成正比。可利用此反应对蛋白质,进行定性鉴别。,原理 双缩脲反应是指蛋白质在碱性溶液中与二价铜离,56,材料用具,牛血清白蛋白,PEG6000,、硫酸铵、硫酸铜、酒石酸钠钾、氢氧化钠、,蒸馏水、双缩脲试剂,双缩脲试剂其的制备如下：,溶解,0.15g,硫酸铜和,0.6g,酒石酸钠钾于,50ml,蒸,馏水中，在搅拌下加入,30ml 10%,氢氧化钠溶液，,用水稀释到,100ml,，备用。,材料用具 PEG6000、硫酸铵、硫酸铜、酒石酸钠钾、氢氧化,57,1,、配制牛血清白蛋白溶液：浓度,1 g/L,。,2,、配制高浓度的聚合物和盐的母液：,PEG6000,浓度为,400 g/L,、硫酸铵,400 g/L,各,20ml,。,3,、按预先设计好的总组成，由母液配制相应的高聚物子液（,60g/L,、,100g/L,、,140 g/L,）和盐的子液（,140 g/L,、,140 g/L,、,140 g/L,）各,4ml,。,4,、将配制好的高聚物和盐的子液转移至,10ml,离心管中，再加入牛血清白蛋白溶液,2ml,，共三组。离心管封口后，反复倒置,5,10min,，每,min 6,10,次，使溶液充分混合,5,、在,1500r/min,下离心,3,5 min,后，观察成相情况。并记录。,6,、小心地将目标物用吸管吸出，加入双缩脲试剂进行定性鉴别。,操作方法,1、配制牛血清白蛋白溶液：浓度1 g/L。操作方法,58,思考,题,1,、双水相萃取蛋白质的优点是什么？,2,、影响双水相成相的因素有哪些？,思考 题1、双水相萃取蛋白质的优点是什么？,59,