生化实验--血糖的测定ppt课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2020/3/25,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,血糖的测定,1,2020/3/25,血糖的测定12020/3/25,正常人空腹血糖浓度是多少,？,为何能保持恒定,？,糖尿病,2,2020/3/25,正常人空腹血糖浓度是多少？22020/3/25,正常人,空腹血糖浓度,(,fasting plasma glucose,FPG),为,3.89-6.11 mmol/L,。,3,2020/3/25,正常人空腹血糖浓度(fasting plasma gluco,血糖如何维持稳定？关键酶调节关键酶如何调节：激素调节。,常见的升高血糖的激素：胰高血糖素、糖皮质激素和肾上腺素。,降低血糖的激素：胰岛素,4,2020/3/25,血糖如何维持稳定？关键酶调节关键酶如何调节：激素调节。420,对糖代谢的调节：,胰岛素促进组织、细胞对葡萄糖的摄取和利用，加速葡萄糖合成为糖原，贮存于肝和肌肉中，并抑制糖异生，促进葡萄糖转变为脂肪酸，贮存于脂肪组织，导致血糖水平下降。胰岛素缺乏时，血糖浓度升高，如超过肾糖阈，尿中将出现糖，引起糖尿病。,胰岛素是促进合成代谢、调节血糖稳定的主要激素,5,对糖代谢的调节：胰岛素促进组织、细胞对葡萄糖的摄取和利用，加,6,2020/3/25,62020/3/25,如果调节失衡，结果是什么？高血糖或者低血糖。,低血糖：生理性和病理性。低于,2.8 mmol/L,。,高血糖：生理性和病理性。高于,7.1 mmol/L,。高于,8.89 mmol/L,，出现糖尿。最常见病理性高血糖：糖尿病。,糖尿病：高血糖和糖尿。临床特点：三多一少。病因：胰岛素分泌缺陷和胰岛素受体缺陷。,糖尿病诊断标准？,7,如果调节失衡，结果是什么？高血糖或者低血糖。高血糖：生理性和,糖尿病（,diabetes,）是由遗传因素、免疫功能紊乱、微生物感染及其毒素、自由基毒素、精神因素等等各种致病因子作用于机体导致胰岛功能减退、胰岛素抵抗等而引发的糖、蛋白质、脂肪、水和电解质等一系列代谢紊乱综合征，临床上以,高血糖,为主要特点，典型病例可出现多尿、多饮、多食、消瘦等表现，即“,三多一少,”症状，糖尿病（血糖）一旦控制不好会引发并发症，导致肾、眼、足等部位的衰竭病变，且无法治愈。,8,糖尿病（diabetes）是由遗传因素、免疫,糖尿病的类型,型糖尿病,又,叫青年发病型糖尿病或胰岛素依耐型糖尿病。,原因,：,胰腺产生胰岛素的细胞已经彻底损坏,从而完全失去了产生胰岛素的功能,.,治疗,：,依赖胰岛素治疗。,型糖尿病,又,叫非胰岛素依耐型糖尿病。,原因：自身能够产生胰岛素，但细胞无法对其作出反应，使胰岛素无法发挥作用。,治疗：需要胰岛素单独或与口服药联合应用的治疗,9,糖尿病的类型型糖尿病型糖尿病9,10,10,一般正常人进食后血糖都会,暂时性升高,，进食后,30,分种或,60,分种可升到最高峰,，但血糖一般不超过,8.9 mmol/L,；,进食,2,小时后又会回到空腹水平,，这就是人体对糖的耐受现象。,什么是口服葡萄糖耐量试验（,Oral glucose tolerance test,，,OGTT,）？,有何临床意义？,11,2020/3/25,一般正常人进食后血糖都会暂时性升高，进食后30分种或60分种,口服葡萄糖耐量试验（,Oral glucose tolerance test,，,OGTT,）,是一种口服葡萄糖负荷试验，用以了解人体对进食葡萄糖后的血糖调节能力。,通过,OGTT,试验，可以,早期发现糖代谢异常，早期诊断,糖尿病,(Diabetes Mellitus,DM),，,是一种简单、快捷的诊断方法。,12,2020/3/25,口服葡萄糖耐量试验（Oral glucose toleran,实验前三天，受试者每日食物中糖含量不应低于,150g,，且维持正常活动，影响试验的药物应在三天前停用，受试前应空腹,10-15h,。,空腹,取血,后，,5,分钟内饮入,250ml,含,75g,无水葡萄糖的糖水，,妊娠妇女用量为,100g,，儿童按,1.75g/kg,体重给予,不超过,75g,。,服糖后,半小时，,1,小时，,2,小时，,3,小时,各抽血一次，作血糖定量检测。,于采血同时，每隔,1,小时留取尿液作尿糖试验，整个过程不可吸烟，喝咖啡，喝茶或进,食。,OGTT,方法：,WTO,标准化,13,2020/3/25,实验前三天，受试者每日食物中糖含量不应低于150g，且维,测试前禁食,10-16,小时，清晨空腹进行。空腹抽静脉血，测空腹静脉血浆葡萄糖，然后成人口服,75 g,无水葡萄糖，溶于,250 ml,水中，,510,分钟内饮完。饮后,2,小时抽静脉血，测静脉血浆葡萄糖。,14,2020/3/25,测试前禁食10-16小时，清晨空腹进行。空腹抽静脉血，测空腹,IFG,与,IGT,空腹血糖损伤,(,Impaired Fasting,Glucose,IFG),：空腹血糖,6.1mmol/L,但,7.0mmol/L,糖耐量受损,(,Impaired Glucose Tolerance,IGT),：餐后,2h,血糖,7.8mmol/L,但,11.1mmol/L,IFG,和,IGT,可以说是一种,正常人向糖尿病的过渡状态,，这部分人虽然现在还不是糖尿病，但是将来发生,2,型糖尿病的危险性非常高，可以说是,糖尿病的后备军,。据有关研究报道，每年,5-8%,的,IGT,者将发展成为,2,型糖尿病。,15,2020/3/25,IFG 与 IGT空腹血糖损伤(Impaired Fasti,无糖尿病史，空腹或者随机血糖异常,无糖尿病史，有一过性或持续性糖尿,无糖尿病史，有明显糖尿病家族史,有糖尿病症状，但空腹或者随机血糖不够标准,分娩巨大胎儿的妇女和有巨大胎儿史的个体,不明原因肾病和视网膜病,妊娠期、甲亢、感染期出现糖尿者,OGTT,的适应症,16,无糖尿病史，空腹或者随机血糖异常OGTT的适应症16,血糖测定方法,无机化学法：如,Folin-Wu,法,有机化学法：如邻甲苯胺法,酶法：己糖激酶法，,酶,法：葡萄糖氧化酶法,17,2020/3/25,血糖测定方法无机化学法：如Folin-Wu法172020/3,原理葡萄糖在和碱性铜试剂混合加热后，可使,Cu,2+,还原成,Cu,+,，后者与磷钼酸试剂作用生成蓝色的钼蓝。通过比色法测定蓝色化合物，计算出血糖的含量,稳定、准确、,但对葡萄糖无特异性，受血中非糖还原物质的影响。,空腹正常血糖参考值,4.46.7mmol/L,或,80-120mg/dL,无机化学,法：,Folin-Wu,法,18,原理葡萄糖在和碱性铜试剂混合加热后，可使 Cu2+还原成Cu,有机化学法：邻甲苯胺法,原理：,葡萄糖为一含醛基的已糖，在酸性条件下加热，可脱水生成,5-,羟甲基,-2-,呋喃甲醛,，后者与邻甲苯胺缩合成青色的,Schiff,碱。,Schiff,碱颜色的深浅与样品中葡萄糖的含量成正比。,评价：操作简便，由于邻甲苯胺只与醛糖作用而显色，故此种测定法不受血液中其他还原物质的干扰，测定时也无需去除血浆或血清中的蛋白质，因此该实验的特异性较高。,19,有机化学法：邻甲苯胺法原理：19,酶法：己糖激酶法（,Hexokinase,HK,）,原理：,NADPH,在,340nm,有吸收峰，其吸光度增加与标本中的葡萄糖浓度成正比。,评价,：,本法特异性高，灵敏度高，干扰因素少，适用于自动化分析，为葡萄糖测定的参考方法，但是,试剂较贵,。,20,酶法：己糖激酶法（Hexokinase,HK）原理：NA,酶法：葡萄糖氧化酶法（,glucose oxidase,GOD,）,葡萄糖氧化酶,(glucose oxidase,，,GOD),利用氧和水,将葡萄糖氧化为葡萄糖酸,，并释放,过氧化氢,。,过氧化氢,在过氧化物酶,(peroxidase,，,POD),作用下，分解为水和氧的同时将无色的,4-,氨基安替比林与酚氧化缩合生成,红色的醌类化合物,。,红色的深浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比，在,510nm,波长处测定吸光度，与标准管比较可计算出血糖的浓度。,21,酶法：葡萄糖氧化酶法（glucose oxidase,GO,葡萄糖氧化酶,-,过氧化物酶法原理,（,1,）葡萄糖,O,2,H,2,O,葡萄糖氧化酶（,GOD,）,（,2,）,H,2,O,2,4-,氨基安替吡啉苯酚,葡萄糖酸,H,2,O,2,H,2,O,红色醌式物质,过氧化物酶,（,POD,）,Trinder,反应,505nm,光吸收法测定,相对血糖浓度,22,葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法原理（1）葡萄糖O2H2O葡萄,实,验试剂,0.1mol/L,磷酸盐缓冲液,(pH7.0),酶试剂 取过氧化物酶,12000U,，葡萄糖氧化酶,1200U,，,4-,氨基安替比林,10mg,，叠氮化钠,100mg,，溶于磷酸缓冲液,80ml,中，定容至,100ml,，置,4,保存,酚溶液 称取重蒸馏酚,100mg,溶于蒸馏水,100ml,中，用棕色瓶贮存。,酶,酚混合试剂 将酶试剂和酚试剂等量混合，,4,下可存放,1,个月。,葡萄糖标准工作液：,5,mmol/L,23,2020/3/25,实验试剂0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.0)23202,实验操作,加入物,B,S,T,血清,(ml),0.01,葡萄糖标准液,(ml),0.01,蒸馏水,(ml),0.01,工作液,(ml),1.0,1.0,1.0,混匀，置,37,水浴保温,15,分钟，,每管加蒸馏水,0.5 ml,，在,510nm,波长处比色，以空白管（,B,管）调零，读取各管吸光度。根据各管吸光度,计算其血糖浓度,。,24,2020/3/25,实验操作加入物 BST血清(ml)0.01葡萄糖标准液(,葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液的葡萄糖含量，但不能直接测定尿液葡萄糖含量。这是因为尿液中的尿酸等干扰物质浓度过高，可干扰过氧化物酶反应，造成结果假性偏低。,对于血液样品需及时分离红细胞。因为红细胞的酵解将会导致测定结果偏低。建议测定样品以草酸钾,-,氟化钠为抗凝剂以抑制糖酵解。,注意事项,25,2020/3/25,葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液的葡萄糖含量，但不能直接测定尿,严重黄疸、溶血及乳糜样血清先制备无蛋白血滤液，然后在进行测定。,酶酚混合液一般现用现配。,葡萄糖氧化酶对,-D,葡萄糖高度特异