菊花的组织培养-PowerPoint演示文稿

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,专题3,植物组织培养技术,一、,基,基础,知,知识,课题1：,菊花的组织培养,1、,植,植物,的,的组,织,织培,养,养,（1,）,）细,胞,胞的,分,分化,概,念,念：,在个,体,体发,育,育中,，,，相,同,同细,胞,胞的,后,后代,在,在形,态,态、,结,结构,、,、生,理,理功,能,能上,发,发生,稳,稳定,性,性差,异,异的,过,过程,过程,：,：,如：,受,受精,卵,卵增,殖,殖、,生,生长,、,、分,化,化形,成,成组,织,织、,器,器官,、,、系,统,统,特点,：,：,（2,）,）稳定,性,性：,（3,）,）全能,性,性：,（1,）,）持久,性,性：,是一,种,种持,久,久性,的,的变,化,化，,它,它发,生,生在,生,生物,体,体的,整,整个,生,生命,过,过程,中,中,在,在胚,胎,胎期,达,达到,最,最大,限,限度,细胞,分,分化,是,是稳,定,定的,，,，一,般,般是,不,不可,逆,逆转,的,的,已分,化,化的,细,细胞,，,，仍,具,具有,发,发育,的,的潜,能,能,原因：,基因在特定,的,的时间和空,间,间条件下的,选,选择性表达,的,的结果,结果：,形成不同的,细,细胞和组织,（2）细胞,的,的全能性,定义：,生物体的细,胞,胞具有使后,代,代细胞形成,完,完整个体的,潜,潜能的特性,原理：,生物体的每,一,一个细胞都,包,包含有该物,种,种所特有的,全,全套遗传物,质,质，都有发,育,育成为完整,个,个体所必需,的,的全部基因,高度特化的,动,动物细胞，,从,从整个细胞,来,来说，全能,性,性受到限制,。,。但它的细,胞,胞核仍然保,持,持着全能性,，,，这是因为,细,细胞核内含,有,有该物种遗,传,传性所需要,的,的遗传物质,已分化的植,物,物细胞，仍,具,具有全能性,实例,受精卵生,殖,殖细胞体,细,细胞,全能性的比,较,较:,（3）植物,组,组织培养,细胞离体,必要条件：,一定的营养,物,物质、激素,和,和其他外界,条,条件,原理:,细胞的全能,性,性,外植体：从,活,活植物体上,切,切下进行培,养,养的那部分,细,细胞、组织,或,或器官,相关概念:,脱分化：,再分化：,愈伤组织:,细,细胞排列疏,松,松而无规则,是高度液,泡,泡化的、成,无,无定形状态,的,的薄壁细胞,人参的愈伤,组,组织,菠萝的愈伤,组,组织,2、影响植,物,物组织培养,的,的因素,（1）植物,材,材料的选择,烟草和胡萝,卜,卜的组织培,养,养较为容易,枸杞愈伤组,织,织的芽诱导,比,比较难,同一植物材,料,料的年龄、,保,保存时间的,长,长短会影响,实,实验结果,菊花的组织,培,培养一般选,择,择未开花植,株,株的茎上部,新,新萌生的侧,枝,枝,（2）不同,的,的离体组织,和,和细胞对营,养,养、环境等,条,条件的要求,相,相对特殊，,需,需配置不同,的,的培养基,MS培养基,主,主要成分包,括,括：,A、大量元,素,素:N、P、S,、,、K、Ca、Mg等,B、微量元,素,素:B、Mn、Cu、Zn、Fe,、,、Mo、I,、,、,Co等,C、有机物,、,、植物激素,讨论：,你,你能说,出,出各种,营,营养物,质,质的作,用,用吗？,同,同专题2中微,生,生物培,养,养基的,配,配方相,比,比，MS培养,基,基的配,方,方有哪,些,些明显,的,的不同,？,？,答：微量元,素,素和大,量,量元素,提,提供植,物,物细胞,生,生活所,必,必需的,无,无机盐,；,；蔗糖,提,提供碳,源,源，同,时,时能够,维,维持细,胞,胞的渗,透,透压；,甘,甘氨酸,、,、维生,素,素等物,质,质主要,是,是为了,满,满足离,体,体植物,细,细胞在,正,正常代,谢,谢途径,受,受到一,定,定影响,后,后所产,生,生的特,殊,殊营养,需,需求。,微,微生物,培,培养基,以,以有机,营,营养为,主,主。与,微,微生物,的,的培养,不,不同，MS培,养,养基则,需,需提供,大,大量无,机,机营养,，,，无机,盐,盐混合,物,物包括,植,植物生,长,长必须,的,的大量,元,元素和,微,微量元,素,素两大,类,类。,常用的,植,植物激,素,素：生,长,长素、,细,细胞分,裂,裂素和,赤,赤霉素,生长素,类,类：,2，4,二氯,苯,苯氧乙,酸,酸（2,，,，4D）、,吲,吲哚乙,酸,酸（IAA）,、,、萘乙,酸,酸（NAA）,、,、吲哚,丁,丁酸（IBA,）,）,细胞分,裂,裂素类,：,：,激动素,（,（KT,）,）、6,苄基,嘌,嘌呤（6BA）,、,、玉米,素,素（ZT）,赤霉素,类,类：,赤霉酸,（,（GA3）,（3）,植,植物激,素,素的影,响,响,生长素,和,和细胞,分,分裂素,作,作用,植物中,生,生长素,和,和细胞,分,分裂素,是,是启动,细,细胞分,裂,裂、脱,分,分化和,再,再分化,的,的关键,性,性激素,。,。在生,长,长素存,在,在的情,况,况下，,细,细胞分,裂,裂素的,作,作用呈,现,现加强,的,的趋势,使用顺序,实验结果,先使用生长素，后使用细胞分裂素,有利于细胞分裂，但不利分化,先使用细胞分裂素后使用生长素,细胞既分裂也分化,同时使用,分化频率高,生长素,细胞分裂素：,有利于,根,根的分,化,化,生长素,细胞分裂素：,生,生长素,细胞分,裂,裂素,生,生长素,再分化,植物细,胞,胞培养,不需要,光,光,需要光,1、培,育,育无病,毒,毒植株,2、,培,培养紫,草,草愈伤,组,组织,提,提取紫,草,草素（,治,治疗烫,伤,伤和割,伤,伤的药,物,物以及,染,染料和,化,化妆品,的,的原料,）,）,4、基因工程,中,中亦需用到植,物,物组织培养的,方,方法,4、植物组织培养,的,的应用：,3、诱导离体的植,物,物组织形成具,有,有生根发芽能,力,力的胚状结构,，,，包裹上人造,种,种皮，制成人,工,工种子，可以,解,解决有些作物品种,繁,繁殖能力差，,结,结子困难或发,芽,芽率低等问题,人工种子,二、实验操作,（一）制备MS固体培养基,MS培养基包,括,括20多种营,养,养成分，实验,室,室一般使用4,。,C保存配制好,的,的培养基母液,来,来制备,1、配置各种,母,母液,无机物中大,量,量元素浓缩10倍，微量元,素,素浓缩100,倍,倍，常温保存,激素类、维,生,生素类以及用,量,量较小的有机,物,物一般可按1mg/ml的,质,质量浓度单独,配,配制成母液,用母液配制,培,培养基时，需,要,要根据各种母,液,液的浓缩倍数,，,，计算用量,2、配置培养,基,基,分装到锥形瓶,中,中，每瓶分装50ml或100ml,配制培养,液,液,调PH,培养基的分,装,装,由于菊花的茎,段,段的组织培养,比,比较容易，因,此,此不必添加植,物,物激素,3、灭菌,分装好的培养,基,基连同其他器,械,械一起进行高,压,压蒸汽灭菌,1、选材：菊花茎段，取,生,生长旺盛的嫩,枝,枝,（二）外植体,消,消毒,2、消毒,流水冲洗,菊花茎段用流,水,水冲洗后可少,许,许洗衣粉，用,软,软刷轻轻刷洗,，,，刷洗后在流,水,水下冲洗20min左右,酒精处理,用无菌吸水纸,吸,吸干外植体表,面,面的水分，放,入,入体积分数为70的酒精,中,中摇动23,次,次，持续67s，立即将,外,外植体取出，,在,在无菌水中清,洗,洗,消毒液处理,取出后用无菌,吸,吸水纸吸干外,植,植体表面的水,分,分，放入质量,分,分数为0.1,的氯化汞溶,液,液中12min，取出后,在,在无菌水中至,少,少清洗3次，,漂,漂净消毒液,（三）接种,污染的主要来,源,源是空气中的,细,细菌和孢子，,接,接种室消毒是,至,至关重要的。,用,用70的酒,精,精喷雾使空气,消,消毒，酒精,或,或新洁尔灭搽,洗,洗工作台并用,紫,紫外线照射20分钟,1、接种室消,毒,毒,2、无菌操作,要,要求,操作要在酒精,灯,灯火焰旁完成,，,，每次使用器,械,械后，都需要,用,用火焰灼烧灭,菌,菌，接种后立,即,即盖好瓶盖。,3、材料的切,取,取和接种,4、接种注意,事,事项,每接种一块,外,外植体前，镊,子,子需放入体积,分,分数为75,的,的酒精溶液中,消,消毒一次，然,后,后在酒精灯火,焰,焰上烧一遍，,冷,冷却后再接种,外植体在培,养,养基中要分布,均,均匀，放置外,植,植体数量根据,锥,锥形瓶的大小,确,确定，一般胡,萝,萝卜34块,，,，菊的茎或叶68块，也,不,不要太少，以,充,充分利用培养,基,基中的营养成,分,分和光照条件,插入时应,注,注意方向，,不,不要倒插。,茎,茎段、茎尖,基,基部插入培,养,养基利于吸,收,收水分和养,分,分,思考：你打,算,算做几组重,复,复？你打算,设,设置对照实,验,验吗？,答：每种材,料,料或配方至,少,少要做一组,以,以上的重复,。,。设置对照,实,实验可以取,用,用一个经过,灭,灭菌的装有,培,培养基的锥,形,形瓶，与接,种,种操作后的,锥,锥形瓶一同,培,培养，用以,说,说明培养基,制,制作合格，,没,没有被杂菌,污,污染。,（四）培养,1、愈伤组,织,织的培养,从接种外植,体,体到出现愈,伤,伤组织需经,过,过2周时间,。,。2周之内,可,可以看到外,植,植体上逐渐,长,长出乳白色,或,或黄白色的,瘤,瘤状愈伤组,织,织。首次培养愈,伤,伤组织时，,恒,恒温箱的门,应,应该关闭不,必,必见光，因,为,为在无光条,件,件下愈伤组,织,织长的更快,。,。2周后，培,养,养基成分接,近,近耗尽，必,须,须更换培养,基,基，进行继,代,代培养,继代培养所,用,用的培养基,与,与培养愈伤,组,组织的相同,，,，在严格的,无,无菌条件下,，,，将愈伤组,织,织连同原来,的,的外植体一,起,起移到新培,养,养基上。愈,伤,伤组织的继,代,代培养一代,为,为20d。,如,如果延长时,间,间，培养基,中,中营养物质,减,减少，外植,体,体会分泌有,毒,毒物质，造,成,成自身中毒,。,。如果愈伤,组,组织长到直,径,径为11.5cm时,，,，就可以进,行,行试管苗培,养,养，否则还,需,需进行第二,代,代继代培养,2、愈伤组,织,织的继代培,养,养,在愈伤组织,继,继代培养期,间,间，将恒温,箱,箱的门打开,，,，让愈伤组,织,织见光，愈,伤,伤组织见光,后,后颜色可以,转,转为绿色,3、试管苗,的,的培养,当愈伤组织,长,长到一定大,小,小后，可以,更,更换培养基,，,，进行试管,苗,苗的见光培养,（五）移栽,移栽生根的,菊,菊花试管苗,之,之前，应先,打,打开培养瓶,的,的封口膜，,让,让试管苗在,培,培养间生长,几,几日,1、打开封,口,口膜,2、清洗转,移,移,用流水清洗,根,根部的培养,基,基，将幼苗移植,到,到消过毒的,蛭,蛭石或珍珠,岩,岩等环境下生活一段时,间,间,（六）栽培,3、移栽,珍珠岩：固,体,体基质型，,含,含水量高、,蓄,蓄水性强、,透,透性好，适,合,合栽培,幼苗长壮后,，,，移栽到土,壤,壤中,幼苗移栽后,，,，每天观察,并,并记录幼苗,的,的生长情况,，,，适时浇水,、,、施肥，直,至,至开花,三、课题延,伸,伸,1、一般来,说,说，容易进,行,行无性繁殖,的,的植物，也,容,容易进行组,织,织培养,2、实例：,芦,芦荟、豆瓣,绿,绿、秋海棠,、,、月季,