农药残留检测技术课件

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,农药残留检测技术,山 东 省 农 药 检 定 所,农业部农药质量监督检验测试中心（济南）,农药残留检测技术山 东 省 农 药 检 定 所,农药残留检测技术,NY/T 761-2008,及质量控制,仪器维护,气相色谱维护,液相色谱维护,农药残留检测技术NY/T 761-2008及质量控制,NY/T 761-2008,方法的特点,优点,：与,GB 5009.20,和德国,S19,方法相比，该方法明显简便，步骤少，操作简单，显著缩短了前处理的时间，明显提高农药残留检测效率。,缺点：,“双刃剑”其优点也正体现了不足之处，由于前处理过程简单，样品没有经过充分的净化，尤其是有机磷检测,分取吹干后直接定容上机检测,容易污染衬管，给仪器维护提出了更高的要求。,NY/T 761-2008方法的特点优点：与GB 5009.,样品前处理,农药残留检测中样品前处理技术是检测过程中耗时最长,最容易出现误差的步骤，对细节要求很高。注重对样品前处理技术的研究能提高农药残留检测的效率和准确率。,NY/T 761-2008,前处理步骤,样品前处理农药残留检测中样品前处理技术是检测过程中耗时最长,称量,样品称量时应注意有代表性，尽量使用较大的称量勺，减少样品间的差异。,称量时样品应注意不要过度解冻。,样品称量时应充分搅匀。,称量时应尽量使用开口比较大的容器，如烧杯，避免样品粘到容器壁上。,称量样品称量时应注意有代表性，尽量使用较大的称量勺，减少样品,提取,根据分析的对象来说，一般有水样、气样、土壤、作物等之分，它们的提取也不完全相同。,提取方法主要有匀浆提取法、振荡提取法、超声提取法等等,。,残留分析试样中农药含量甚微，提取效率的高低直接影响结果的准确性。故应根据试样类型、农药种类、试样中脂肪、水分含量和最终测定方法等来选择提取方法和提取溶剂，以便尽可能完全地提取出试样中所含的农药，而尽量少地提取出干扰物质。,提取根据分析的对象来说，一般有水样、气样、土壤、作物等之分，,提取,我们对同一样品同时采用匀浆、振荡和超声方法三种不同提取方法进行了添加回收试验，结果表明不同的提取方法回收率结果没有显著差异。提取完成后要注意对匀浆机的清洗顺序（先丙酮后再用水）。,我们目前主要针对的是蔬菜和水果，,NY/T 761-2008,采用的是组织捣碎法：又称匀浆提取法，优点是简便、快速、效果好。,提取我们对同一样品同时采用匀浆、振荡和超声方法三种不同提取方,提取,深绿色样品：如菠菜、菜心、青花菜和青椒等，可在均质前加石墨化炭黑先除去大部分色素，再提取。,汁液样品：如橙汁、桃汁、菠菜汁等，这类样品含水多、显酸性，在称样后要先调节酸度至近中性，再提取。,含水少的干样：如稻米、大豆、花生、茶叶等，可在均质前先加超纯水湿润膨胀样品，然后提取。,提取深绿色样品：如菠菜、菜心、青花菜和青椒等，可在均质前加石,提取剂,1,惰性,所选用的溶剂不能与待测物有化学反应。同时也不能对测定时采用的仪器有影响。如采用电子捕获检测器进行测定时，其前处理包括提取、净化等环节尽量避免使用含氯试剂。,2,溶剂的纯度,农药残留分析中所使用的溶剂是有特殊要求的，一般纯度达到在气相色谱的电子捕获检测器上不含有杂峰（杂质一般在,10,9,克以下）。,提取剂1惰性,提取剂,目前国内试剂的纯度达不到要求，使用进口试剂价格较贵，可对国产试剂进行净化处理。,正己烷：,将市售试剂在氢氧化钠存在下回流,20min,，再进行重蒸，一般还要求去掉,10,前馏分和,10,最后馏分。正己烷也可以用,60,90,石油醚代替，同上处理后，收集,60,75,馏分。,丙酮：,加高锰酸钾回流到紫色不褪，再用碳酸钾干燥，过滤，重蒸收集,56,馏分。,提取剂目前国内试剂的纯度达不到要求，使用进口试剂价格较贵，可,提取剂,乙腈：,4L,乙腈中加入,1mL,磷酸、,30g,五氧化二磷，进行蒸馏，收集,81,82,馏分。,乙酸乙酯：,1L,乙酸乙酯，加入,100mL,乙酸酐和,10,滴硫酸，加热回流,4h,。蒸出后，再用碳酸钾干燥，过滤，再蒸馏，收集,77,馏分。,提取剂乙腈：4L乙腈中加入1mL磷酸、30g五氧化二磷，进行,提取剂,经过以上处理的溶剂，有时还不符合要求，再可以用高活性的中性氧化铝柱层析进行提纯。,最后用气相色谱仪的电子捕获检测器对溶剂作一次检验。取溶剂,300mL,500mL,，浓缩到,3mL,5mL,，取,2,L,微升进入色谱柱，以不出现杂峰为合格。,提取剂经过以上处理的溶剂，有时还不符合要求，再可以用高活性的,提取过程中注意事项,样本在提取过程中，应保证样品提取时间、提取过程与质控样品尽量相同，使质控更清楚的反映前处理操作的准确性。,某些样品由于含水量大（如番茄），冷冻样会在表面上有一层冰层，通常情况下应对这样的样品重新用食品料理机打碎，然后进行提取。,提取过程中注意事项样本在提取过程中，应保证样品提取时间、提取,提取过程中注意事项,残留分析试样中农药含量甚微，提取效率的高低直接影响结果的准确性。选择合适的固液比直接影响提取效率。由于多残留检测方法考虑的是多组分的同时提取，所规定的固液比对某种组分就不一定合适，如果只检测某些组分，应通过试验确定合适的固液比。,提取过程中，应对农药检测相关的化学性质（挥发性、极性、,PKa,）加以关注。,提取过程中注意事项残留分析试样中农药含量甚微，提取效率的高低,盐析,盐析过程中振荡频率和振幅应一致，保证样品的平行性。,盐析过程中，要充分摇匀后再静置。如果摇匀过程中发生乳化现象，则长时间静置或者加少量蒸馏水，直到分层清晰。,静止时间应足够，一般不应小于,0.5,小时。在静止过程中，应不时轻摇容器，使器壁上的水珠下落。,盐析盐析过程中振荡频率和振幅应一致，保证样品的平行性。,浓缩,旋转蒸发器,其特点是可以边减压边旋转，故温度变化不大时，热量传递较快，使蒸馏能快而平稳地进行，而不发生暴沸；在使用中还可根据浓缩液体积，更换各种容量（,10,毫升,l,升）的烧瓶。旋转蒸发器的特点是浓缩速度快，且回收率高。,气流吹蒸浓缩装置,利用空气或氮气流吹带出溶剂的浓缩方法，适用于体积小、易挥发的提取液，但对于蒸汽压较高的农药就比较容易损失。,浓缩旋转蒸发器,浓缩注意事项,使用旋转蒸发器时，应注意水浴温度不宜过高，一般不超过,40,，待浓缩的溶剂多数情况是二氯甲烷。有时也用丙酮或甲醇，但水浴温度要适当提高。在浓缩过程中，要注意不能蒸干。,使用旋转蒸发器时，应尽量选择冷却循环系统，冷却温度控制在,5,以下，以保证回收率。,浓缩注意事项使用旋转蒸发器时，应注意水浴温度不宜过高，一般不,浓缩注意事项,使用氮吹浓缩时，加热温度不宜过高，一般控制在,80,以下。氮气流量不能过大，不能将样品吹干，在近干状态下取离水浴锅，自然晾干，若一定要干涸时，则操作必须细心，可以用橡皮球慢慢吹入干燥空气。,若易氧化的样品，还必须使用氮气，否则会导致某些农药回收率偏低。,氮吹时，氮吹管不能离液面太近，更换样品后一定要对针头进行清洗，防止污染。,浓缩注意事项使用氮吹浓缩时，加热温度不宜过高，一般控制在80,浓缩注意事项,浓缩过程是样品比较容易损失的环节，因而为了考察样品的浓缩过程，也可以单独进行标准农药的浓缩回收率试验，一般应在,90,以上为宜。,对于要浓缩净化后的溶液必须更加警惕，因为提取物中油脂等杂质已经很少，必要时可以加入几微升不干扰分析的抑蒸剂（,keeper,），如乙二醇、硬酯酸等，以保证农药在蒸干时避免遭到损失。（例如甲拌磷如果吹的太干，其回收率就会偏低，一定要氮吹近干，或加入几微升不干扰分析的抑蒸剂，而一般用旋转蒸发仪进行浓缩就不会出现这个问题。）,浓缩注意事项浓缩过程是样品比较容易损失的环节，因而为了考察样,净化,使用有机溶剂提取样本中的农药时，样本中的油脂、蜡质、蛋白质、叶绿素及其他色素、胺类、酚类、有机酸类、糖类等会同农药一起被提取出来，提取液中既有农药又有许多干扰物质，这些物质亦称,共提物,，会严重干扰残留量的测定。故必须将农药与上述杂质进行分离，然后才能对痕量农药进行分析测定。这一操作步骤就是所谓,净化,。,净化使用有机溶剂提取样本中的农药时，样本中的油脂、蜡质、蛋白,净化,净化的要求与方法在很大程度上取决于农药和样本的性质、最终检测方法、对分析时间和对分析结果准确度的要求。,如采用专一性强的火焰光度检测器测定有机磷或有机硫农药时，不需复杂的净化步骤。,使用抗干扰能力差的电子捕获检测器测定有机氯或菊酯类农药和使用氮磷检测器时，对净化要求必须严格，否则杂质会影响测定结果，还可能污染检测器。,农残分析中常用的净化方法有：液,-,液分配法、柱层析法、固相萃取法、吹扫蒸馏法、磺化法、凝结剂沉淀法和薄层色谱法等。,净化净化的要求与方法在很大程度上取决于农药和样本的性质、最终,GPC,样品净化系统,从样品中除去,大分子物质,提高分析结果,的精确度,延长进样口和分,析柱的使用寿命,GPC 样品净化系统从样品中除去,固相萃取四个步骤,1,、柱子预处理（固定相活化）,活化的目的是创造一个与样品溶剂相容的环境并去除柱内所有杂质。通常需要两种溶剂来完成上述任务，第一个溶剂（初溶剂）用于净化固定相，另一个溶剂（终溶剂）用于建立一个合适的固定相环境使样品分析物得到适当的保留。,固相萃取四个步骤1、柱子预处理（固定相活化）,固相萃取四个步骤,注意：,终溶剂不应强于样品溶剂，若使用太强的溶剂，将降低回收率。另外，在活化的过程中和结束时，固定相都不能抽干，因为这将导致填料床出现裂缝，从而得到低的回收率和重现性，样品也没得到应有的净化。如果在活化步骤中出现干裂，所有活化步骤都得重复。,固相萃取四个步骤注意：终溶剂不应强于样品溶剂，若使用太强的溶,固相萃取四个步骤,2,、上样,上样步骤指样品加入到固相萃取柱并迫使样品溶剂通过固定相的过程，这时分析物和一批样品干扰物保留在固定相上。,为了保留分析物，溶解样品的溶剂必须较弱。如果溶剂太强，分析物将不被保留，结果回收率将会很低，这一现象叫穿漏。尽可能使用最弱的样品溶剂，可以使溶质得到最强的保留或者说最窄的谱带。,固相萃取四个步骤2、上样,固相萃取四个步骤,3,、淋洗,分析物得到保留后，通常需要淋洗固定相以洗掉不需要的样品组分，淋洗溶剂的洗脱强度是略强于或等于上样溶剂。淋洗溶剂必须尽量地弱以洗调尽量多的干扰组分，但不能强到可以洗脱任何一个分析物的程度。,注意：,淋洗时不宜使用太强溶剂，否则会将强保留杂质洗下来。使用太弱溶剂，会使淋洗体积加大。可改为强、弱溶剂混用；但混用或前后使用的溶剂必须互溶。,固相萃取四个步骤3、淋洗,固相萃取四个步骤,4,、洗脱,淋洗过后，将分析物从固定相上洗脱。溶剂必须进行认真选择，溶剂太强，一些更强保留的不必要组分将被洗出来；溶剂太弱就需要更多的洗脱液来洗出分析物，这样固相萃取柱的浓缩功效就会削弱。,固相萃取四个步骤4、洗脱,不同的填料的固相萃取柱,不同的填料的固相萃取柱,固相萃取柱净化应用,一般菜样：如白菜、甘蓝、黄瓜、萝卜等，可根据需要选用,C18,柱、,Florisil,柱、,NH2,柱等净化。,深色样品：如菠菜、菜心、青椒和胡萝卜，含色素多，可用石墨碳黑柱去除色素。,茶叶：含咖啡因多，用,Si,小柱净化可较好地去除。,大豆、花生：含油脂多，净化时用,SAX,、,PSA,小柱去脂。,高糖高盐样品：如葡萄干、梅脯、腌黄瓜等可采用硅藻土柱助滤。,固相萃取柱净化应用一般菜样：如白菜、甘蓝、黄瓜、萝卜等，可根,QuEChERS,方法,步骤可以简单归纳为,:,(1),样品粉碎,;,(2),单一溶剂乙腈提取分离,;,(3),加入,MgSO4,等盐类除水,;,(4),加入,乙二胺,-N-,丙基硅烷,(PSA),等吸附剂除杂,;,(5),上清液进行,GC-MS,、,LC-MS,检测。,优点：快速、简便、便宜、适用于大多数