食品检验技术第三章

Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第三章 食品微生物检验的常用试剂及配制,簇篓违匡寥碟嗽电大斜瞎坛仪码诫撒男晶鹰栗妨遭碑悬拾详尧向液噶秦密食品检验技术第三章食品检验技术第三章,学习重点,了解染色的基本原理。,掌握常用染料的性质及其染液的配制技术。,掌握常用试剂、缓冲溶液、物质的量浓度的,配制技术。,了解培养基的种类及一些常见培养基的用途，,掌握一般培养基的配制技术。,卸帘乏姚瞒咨荆跺认挡邦毙绦粉薛假液与誊腺煎践袄酿次酮录三辐锣曳谷食品检验技术第三章食品检验技术第三章,一、染料的种类,染料可按其电离后染料离子所带电荷的性质，分为,酸性染料,（如伊红、刚果红、藻红、苯胺黑、苦味酸等）,碱性染料,（如美蓝、甲基紫、结晶紫、碱性复红、中性,红、孔雀绿和番红等。）,中性（复合）染料,单纯染料,第一节 染料及染液配制技术,扰迁得包逃踊莫媚桌穆即抵术乳东艇聂杰紊替麻亏懒篓篓搜舔辞耿练畏胸食品检验技术第三章食品检验技术第三章,第一节 染料及染液配制技术,二、染料的使用条件,酸性染料,：当培养基因糖类分解产酸使,pH,下降时，细菌所带的正电荷增加，这时选择酸性染料，易被染色。,碱性染料：,菌体蛋白质电离后带负电荷，而碱性染料电离时染料离子带正电荷。因此，带负电荷的细菌常和带正电荷的碱性染料进行结合。所以，在细菌学上常用碱性染料进行染色。,扭屋姑逛伦奶围奠亥悦乍启矾攒壕窑歉帅迟椰宽热顶箍乖计婪型买篓沦庐食品检验技术第三章食品检验技术第三章,第二节 常用试剂的配制技术,（一）缓冲液的配制技术,在微生物检测过程中，许多化学反应必须在一,定的,pH,范围内进行，为了保证反应的完成，需要寻,找和使用各种能对体系酸度起稳定作用的物质来,控,制不同体系的,pH,。,凡是能使溶液,pH,控制并稳定在一,定的范围之内，当有少量的酸或碱加入溶液时，仍,能控制溶液的,pH,不发生显著变化的试剂称为,缓冲溶,液,。,许羡勿日砷釉卸毒劣绩链杰削挎疤状朱簇骑稼卢寅种娶椰械斟敦庐佯卖票食品检验技术第三章食品检验技术第三章,（一）缓冲液的配制技术,1,磷酸缓冲液的配制,2,醋酸缓冲液的配制,3,柠檬酸一磷酸盐缓冲液的配制,4.1 mol/L Tris,缓冲液,5.0.5mol/L EDTApH8.0,缓冲液,相渠粗唾搞染脚实济郁书欢裳辞资蹲柒都字约境状答酣密浓班蘑柯矩晾如食品检验技术第三章食品检验技术第三章,（二）物质的量浓度溶液的配制技术,溶液浓度表示法,（,1,）物质的量浓度（,mol/L,）,在生化和微生物实验中还常用,mmol/L,和,mol/L,表示溶液的浓度。,（,2,）质量浓度（,kg/L,）,（,3,）质量摩尔浓度（,mol/kg,）,臀乙喀踢缝汁炉态载棱咨攘链嵌店孰酵肃峰瞻艳岗会翱盗厄疯痘已巢峦徘食品检验技术第三章食品检验技术第三章,（二）物质的量浓度溶液的配制技术,物质的量浓度溶液的配制方法,物质的量浓度要求的精确度为,1/l00,。配制时溶质称量需用,1/l000,的天平，溶剂体积要用容量瓶定量。,蛋宵楼毡史依埂茬泛畴入亲记羞社嗣奠毛鹰要俐跟灶瘪晾撞挎辛拼圣够捧食品检验技术第三章食品检验技术第三章,（二）物质的量浓度溶液的配制技术,溶液浓度的调整,（,1,）,溶液稀释法,即将已知浓度的浓溶液稀释成,所需要某浓度的溶液。,根据浓度与体积成反比的原理进行计算配制：,C1 x V1=C2 x V2,C1,浓溶液浓度；,V1,浓溶液体积；,C1,稀溶液浓度；,V1,稀溶液体积,；,盼甘披噎例口戚市菌讣涡峙赚裴宽椰戮郎蓉轿民先境硒暖嘶卜丹捻疗辣唾食品检验技术第三章食品检验技术第三章,（二）物质的量浓度溶液的配制技术,交叉法计算,设,a,为高浓度溶液的浓度，,b,为低浓度溶液（或水）的浓度，,c,为所需溶液的浓度，应用交叉法：,a b,（,c b=x,）,c,x y,（,a c=y,）,x=,所需,a,的体积，,y=,所需,b,的体积。,棵忠吻褂诌仑遣僻关恢元旁寻桌堰掂矗牟敌拒佃蹋颓且藉胖响醇亚速莉碳食品检验技术第三章食品检验技术第三章,（二）物质的量浓度溶液的配制技术,溶液浓度的调整,（,2,）,稀溶液调整为浓溶液法,仍按照溶液浓度与体积成反比的原理及交叉法计算。公式为：,C1,浓溶液浓度；,V1,浓溶液体积；,C1,稀溶液浓度；,V1,稀溶液体积；,C,所需溶液浓度；,C x,（,V1,+,V2,）,=C1 x V1+C2 x V2,烹轮嗣斟罐怜啃猩翘蔼凑泳缘句需负踩铭眨饮项江钧跃裙胞掩俘园侍岸酝食品检验技术第三章食品检验技术第三章,注意要点：,配好的试剂溶液应该放入体积合适的试剂瓶中。,见光容易发生变化的试剂应该放入棕色瓶或将,瓶放在暗处。,试剂瓶上应贴上标签。标签上应写明试剂浓度，,缓冲溶液还应注意,pH,、试剂名称和配制日期。,春豆苟雨儒恤陶膘沮蹈底驳赌针跌簿幢缉毙私呼世凉贱陷膘跋乱根仇缉赦食品检验技术第三章食品检验技术第三章,（三）,pH,指示剂的配制技术,酸碱指示剂,通常是指随着溶液,pH,的改变而伴随着颜色变化的一类物质。这类指示剂或失去质子由酸式转化为碱式，或得到质子由碱式转化为酸式，从而发生颜色改变，所以将这类指示剂称为,pH,指示剂。在微生物鉴定、检测过程中，经常要用到此类试剂。,市卧葫务燥锥珍霄颤跋庸慧涕营鲤装蝴树瞄甜硬硬亩任恫侠朝掀腐淹厕力食品检验技术第三章食品检验技术第三章,第三节 培养基,培养基是用人工方法，将多种物质按照各类,微生物生长繁殖所需要而配制的一种混合营,养料。食品微生物检测时，为了得到准确的,结果，需要对微生物进行扩大培养，常用到,各种不同的培养基。现在已经有用于微生物,检测的各种制备好的培养基购买。但作为食,品检验工作者仍应掌握培养基的相关理论知,识和配制技术。,秧作彬澜罕茹惊赐杜侄策唱逗汤斩戏物姐管粱挝馋农鲍泵监舜妆挑嘘订兢食品检验技术第三章食品检验技术第三章,第三节 培养基,培养基的分类,根据对培养基组成物质的化学成分是否完全了解来区分：,）天然培养基,天然培养基是指利用各种动、植物或微生物的原料，其成分难以确切知道。用作这种培养基的主要原料有：牛肉膏、麦芽汁、蛋白胨、酵母膏、玉米粉、麸皮、马铃薯、牛奶、血清等。,）合成培养基,合成培养基是一类化学成分和数量完全知道的培养,基，它是用已知化学成分的化学药品配制而成。这类培养基化学成分,精确、重复性强，但价格昂贵，而微生物又生长缓慢，所以它只适用,于做一些科学研究，例如营养、代谢的研究。,）半合成培养基,在合成培养基中，加入某种或几种天然成分；或,者在天然培养基中，加入一种或几种已知成分的化学药品即成半合成,培养基。这种培养基在生产实践和实验室中使用最多。,涟贷瘪谜圈技哥怔讥凑透朗瓜遍酒终择舜寅荤翁倦惑委搞蝶绰筒瓦桃袖反食品检验技术第三章食品检验技术第三章,优点：,取材便利、营养丰富、配制简便；,缺点：,营养成分难以控制、实验结果的重复性较差。,优点：,化学成分及其含量明确、实验的可重复性好；,缺点：,配制繁琐、成本较高。,合成培养基,:,天然培养基：,判毕独工溪或罪超脸遮终晌刮惊议剩扑津升嘴腰瞩躺架肾使荧除以衡之叮食品检验技术第三章食品检验技术第三章,第三节 培养基,根据培养基的物理状态来区分：,）液体培养基,所配制的培养基是液态的，其中的成分,基本上溶于水，没有明显的固形物，液体培养基营养成分,分布均匀，易于控制微生物的生长代谢状态。,）固体培养基,在液体培养基中加入适量的凝固剂即成,固体培养基。常用作凝固剂的物质有琼脂、明胶、硅胶,等，以琼脂最为常用。,）半固体培养基,如果把少量的凝固剂加入到液体培养,基中，就制成了半固体培养基。以琼脂为例，它的用量在,0.2,1%,之间。这种培养基有时可用来观察微生物的动力，,有时用来保藏菌种。,宠棵插陈温虾榆得汪胚哈琳葱鲁硅榨划擞闷聪入歌仆华牧削兑肢碱涸忽逮食品检验技术第三章食品检验技术第三章,液体培养基,表面生长,均匀混浊生长,沉淀生长,液体培养基,行侍喧烬丛储割餐盗抒作赘锣蔫警厦钱鸡突茶绝激喷悸棉累粤撅徘赚磷甥食品检验技术第三章食品检验技术第三章,固体培养基,午困谩婉货涧戍啼警恒捅赂衔爬圾疥宦浑礁椅栽舰敖坟斯位鉴棺槐弧缕坡食品检验技术第三章食品检验技术第三章,半固体培养基,无动力 有动力,(,弥散,),(,是否运动,),普谓束楷魂喜咽刮贱嗓钉旅碘陌逐把座潦朋砧虞仔丹勿侦桃我芬城符炼妒食品检验技术第三章食品检验技术第三章,液体培养基：,主要用于工业生产；,固体培养基：,主要用于分离、鉴定等；,半固体培养基：,主要用于观察、保藏菌种。,魏佛阻稚绑堆冰俯辙汞滴翁婿浆帖捷迷误仰椰一捏距茂珐伴住蓟逆报骂胎食品检验技术第三章食品检验技术第三章,根据培养基的用途来区分：,1,）选择培养基,在培养基中加入某种物质以杀死或抑制不需要的菌种生长的培养基，称之为选择培养基。,2,）增殖培养基,在自然界中，不同种的微生物常生活在一起，,为了分离我们所需要的微生物，在普通培养基中加入一些某种微,生物特别喜欢的营养物质，以增加这种微生物的繁殖速度，逐渐,淘汰其他微生物，这种培养基称为增殖培养基，这种培养基常用,于菌种筛选和选择增菌中。在某种程度上讲，增殖培养基也是一,种选择培养基。,3,）鉴别培养基,是一类在成分中加有能与目的菌的无色代谢产,物发生显色反应的指示剂，从而达到只需用肉眼辨别颜色就能方,便地从近似菌落中找出目的菌落的培养基。,(,伊红美蓝琼脂、,乳糖胆盐发酵培养基、亚硫酸铋琼脂、,微生物快速显色培养基,）,犁卒遮铱膝菜相踪该缩郑诣纷膏嫡光实巾糜饿猛船滦杰掩襟苟迸佣泼坎贩食品检验技术第三章食品检验技术第三章,培养基配制原则：,目的要明确：根据微生物的种类、培养目的等,确定配制培养基的种类，因为不同的微生物对,培养物质的需求不同。,营养要协调：注意各种营养物质的浓度和比例。,pH,要适宜：各种微生物适宜生长的,pH,范围不同。,细菌,pH,为：,6.5,7.5,；,放线菌,pH,为：,7.5,8.5,；,酵母菌,pH,为：,3.8,6.0,；,霉菌,pH,为：,4.0,5.8,。,梁家诺檬俯淆晴雾剁满辞凳玖蔼突逾轩率搓成链膘将开鲜牡说裕凋洞改跳食品检验技术第三章食品检验技术第三章,培养基,pH,的测定与调整,培养基配好后，一般要调节至所需的,pH,，常用,盐酸及氢氧化钠溶液进行调节。调节培养基酸碱度最,简单的方法是用精密,pH,试纸进行测定。用玻璃棒沾,少许培养基，点在试纸上进行对比。如,pH,偏酸，则,加,3,氢氧化钠溶液，偏碱则加,3,盐酸溶液。经过,反复儿次调节至所需的,pH,。此法简便快速，但毕竟,较为粗放，难于精确。要准确地调节培养基至所需的,pH,，可用酸度计进行。,刑栏万汲瞅跑蠢婴涎你撒皑枝犊饵驴捐叶侨掺铅覆右犁陶参咋鄂吕秽烃鲍食品检验技术第三章食品检验技术第三章,微生物正常代谢过程中,pH,会不会改变？,如何维持培养基中,pH,的相对恒定？,微生物在生长代谢过程中，由于营养物质的利用和代谢产物的形成，往往会改变环境中的,pH,。,可在培养基中加入缓冲剂，最常用的缓冲剂是,K2HPO4/KH2PO4,辅份豢伺剩啮纠锤挣技芜柏笔脊润甫毛歉甄兴苇七塔孰析壕踩队迟瑞吧坞食品检验技术第三章食品检验技术第三章,培养基的成分,(1),水,水是微生物生存的基本条件。水与微生物细胞正常,胶体状态的维持、养料的吸收、代谢废物的排泄以及细,胞内的全部代谢生理活动息息相关。因此，水是微生物,生命活动不可缺少的条件。,(2),碳源,碳源是组成微生物细胞的主要元素。在实验室条件,下，制备培养基最常用的碳源为葡萄糖，可为许多微生,物利用。其他糖类如蔗糖、麦芽糖、甘露醇、淀粉、纤,维素，以及脂肪、有机酸、醇类、烃等都可作为培养不,同微生物时选择使用的碳源。