黑曲霉生产菌的扩大培养课件

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,第七节 黑曲霉生产菌的扩大培养,种子：,将保存在砂土管、冷冻干燥管中处休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，再经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级扩大培养,最终获得一定数量和质量的纯种过程。这些纯种培养物称为种子。,菌种的扩大培养：,从少量的微生物原种开始，经过束带繁殖培养，为每次发酵提供相当数量的健壮的菌种培养物。,一、菌种的扩大培养,第七节 黑曲霉生产菌的扩大培养 种子：一、菌种的扩大培养,1,种子的要求：,总量及浓度能满足要求,生理状况稳定,活力强，移种至发酵后，能够迅速生长,无杂菌污染,种子的要求：总量及浓度能满足要求生理状况稳定活力强，移种至发,2,实验室阶段：,不用种子罐，所用的设备为培养箱、摇床等实验室常见设备，在工厂这些培养过程一般都在菌种室完成，因此将其称为实验室阶段的种子培养。,培养基：保证培养基的质量，有利于菌体的生长,减少传代次数,孢子培养时注意湿度，子斜面使用一般不超过1个月,生产车间阶段,：,种子培养在种子罐里面进行，一般在工厂归发酵车间管理，因此形象地称这些培养过程为生产车间阶段。,培养基：控制成本，驯化；营养比发酵培养基丰富。,种子扩培的两个阶段,实验室阶段：不用种子罐，所用的设备为培养箱、摇床等实验室常见,3,1.斜面培养,培养条件：,有利于菌种的繁殖和孢子生长，不产酸，培养基以“多碳少氮”为原则。,蔗糖合成培养基,严格无菌操作,在斜面上划波浪线，尽量利用斜面培养基,1.斜面培养培养条件：,4,2.麸曲三角瓶培养,培养基制备：,新鲜麸皮过筛，按麸皮：水=1：1拌匀，分装1000ml三角瓶，每瓶40g，纱布封口，0.1MPa表压下灭菌4060min，摇散冷却。35培养1d，无气味异常或染菌即可使用。,培养操作：,无菌操作条件下，将2ml斜面菌种的孢子悬浮液，于32下培养20h后，白色菌落盖满表面，摇瓶一次，使培养基疏松、铺平，再培养4h，培养基结块，白色菌丝生长旺盛，但未产生孢子，升温到35左右，12h摇瓶一次，知道孢子长出后停止。,麸曲可直接作种子罐种子，也可作为二级种子。,2.麸曲三角瓶培养培养基制备：,5,3.孢子悬浮液的制备,将符合质量要求的三角瓶麸皮，在无菌操作下，每瓶加入500ml无菌水，摇匀，切勿将棉塞打湿，在火焰下并入接种罐中。,3.孢子悬浮液的制备,6,4.种子罐扩大培养,（1）种子罐种子培养基,4.种子罐扩大培养（1）种子罐种子培养基,7,（2）种子培养条件,接种量：随发酵罐容积改变。5000L种子罐接 入20瓶麸曲孢子（70g麸皮/1000ml）。,培养温度:35左右,供氧：搅拌转速150r/min，通风量,0.30.4m,3,/min。,种龄：1824h,（2）种子培养条件接种量：随发酵罐容积改变。5000L种子,8,（3）种子质量要求,镜检：菌丝粗壮，结成菊花状小球体，无异味，无杂菌，无异常菌丝。,pH2.02.5,酸度：0.5%2.0%,柠檬酸含量：0.5g/dL左右,（3）种子质量要求,9,二、影响种子质量的因素,1.影响斜面种子质量的因素,（1）培养基,二、影响种子质量的因素1.影响斜面种子质量的因素,10,（2）C、N源,C源影响,对糖蜜发酵菌种来说：蔗糖最适宜，麦芽着生孢子糖次之，葡萄糖和乳糖不大适宜。,蔗糖浓度4080g/L。,N源影响：,对糖蜜发酵，优劣次序：硝酸铵硫酸铵尿素，,对淀粉质原料，硫酸铵或尿素对产酸影响不大。,（2）C、N源,11,（3）培养条件与时间,酸性液体培养6d为佳，固体培养68d适宜。,（3）培养条件与时间,12,2.影响三角瓶麸曲质量的因素,（1）麸皮的质量,霉烂、虫咬，灭菌困难,营养成分减少，不利于黑曲霉生长,淀粉蛋白质过多，生长旺盛，但孢子着生减少,水分过多，不利于生长,（2）水分,过少易形成干曲，过多影响疏松度，且热量散发不出，一般麸皮：水1：1.11.3.,（3）培养条件,相对湿度60%70%，温度35,左右，经常摇瓶及换气。,2.影响三角瓶麸曲质量的因素（1）麸皮的质量,13,3.影响种子罐质量的因素,（1）培养基成分,产酸水平随种子培养基成分的加富而提高。,（2）通风量,对10m,3,罐,06h：0.01850.0187 m,3,/（m,3,min）,1711h：0.03 m,3,/（m,3,min）,1216h：0.075 m,3,/（m,3,min）,19h后：0.094 m,3,/（m,3,min）,2024h：0.1450.15 m,3,/（m,3,min）,24h：0.18 m,3,/（m,3,min）,3.影响种子罐质量的因素（1）培养基成分,14,