邻二氮杂菲分光光度计测定铁

单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2015/12/15,#,单击此处编辑母版标题样式,主讲人：王留勇,邻二氮杂菲分光光度法测定铁,1.,通过分光光度法测定铁的条件实验,学会如何选择分光光度分析的条件。,2.,掌握邻二氮杂菲分光光度法测定铁的原理和方法。,3.,了解,7220,型分光光度计,的构造和使用方法。,一、实验目的,邻,二氮杂菲是测定微量铁的一种较好的试剂。在,pH 2-9,的范围,内,与,邻二氮杂菲反应生成极稳定的橘红色配合,物,其,反应式,如下：,该,配合物的最大吸收峰在,510,nm,处,，摩尔,吸收系数,二、实验原理,与,邻二氮杂,菲能生成,3:1,的,淡蓝色配合,物,因此，在显色之前应预先,用盐酸羟,氨,将,离子还原成 离子,其反应式如下,：,二价铁离子与邻二氮杂菲在,pH,为,2-9,的范围内都能显色，但酸度高，反应较慢，酸度太低，二价铁水解。所以一般在,pH,在,5-6,的微酸性溶液中显色较为适宜。,本,测定方法不仅灵敏度,高、稳定性,好，而且选择性,高。,实验原理,分光光度法测定物质含量时，通常要经过取样、显色,及测量,等步骤。为了使测定有较高的灵敏度和,准确度，必须,选择适宜的显色反应的条件和,测量吸光度,的条件。,通常所,研究的显色反应条件有溶液的,酸度、显色剂用量、显,色,时间、温度、溶剂,以及共存离子干扰,及其消除,方法等。,测量吸光度,的,条件主要,是测量,波长、吸光度,范围和参比溶液的选择。,实验原理,100,ug/mL,的铁,标准溶液 准确,称取,0.864,g,分析纯,置于,一烧杯,中，以,30,ml,2,mol/LHCL,溶液,溶解,后转入,1000,mL,容量瓶中,以,水稀释至,刻度,摇,匀,。,10,ug/mL,的,铁,标准溶液,由,100,ug/mL,的,铁标准溶液用水准确稀释,10,倍而成,。,100,g/mL,盐酸羟胺溶液（因,其不稳定，需临用时,配制）,1,g/mL,邻,二氮杂菲,溶液,1,mol/L,溶液,2,mol/L HCL,溶液,7220,型分光光度计,50,mL,容量瓶,8,只,，,100,mL,容量瓶,1,只,吸量管,1mL 1,支、,2,mL 1,支、,5,mL,4,支。,三、实验仪器和试剂,1.,条件实验,:,吸收,曲线,的测绘：准确,吸取,10,ug/mL,铁标准溶液,5.0,mL,于,50,mL,容量瓶,中，加入,100,g/mL,盐酸,羟,胺溶液,1.0,mL,摇匀,加入,1,mol/L,溶液,5.0,mL,和,1,g/L,邻,二氮杂菲,溶液,3.0,mL,，,以水稀释至刻度，摇匀,。放置,10,min,在,7220,型分光光度计,上，,用,2,cm,比,色皿，以水为参比溶液，波长从,570,nm,开始,到,430,nm,为止,，每隔,10,或,20,nm,测定,一次,吸光度,(,其中,从,530,490,nm,，,每隔,10,nm,测,一,次,),，,然后以波长为横坐标，吸光度为纵坐标绘制出吸收曲线，从吸收曲线,上确定,该测定的适宜,波长,(,最大吸收波长,),。,四、实验步骤,2.,铁,含量的,测定,:,(1),标准曲线的测绘：取,50,mL,容量瓶,6,支,编号,。分别吸取,10,ug/mL,的,铁,标准溶液,2.0,mL,、,4.0,mL,、,6.0,mL,、,8.0,mL,和,10.0,mL(,务必,准确量,取,),于,5,只容量瓶中，另一容量瓶中不加铁标准溶液,(,配置空白溶液，作参比,),。然后,各,加,1.0,mL,100,g/mL,盐酸,羟胺溶液，摇匀，,经,2,min,后,，再各,加,5.0,mL,1,mol/L,的 溶液及,3.0,mL,1,g/mL,邻二,氮杂菲,溶液，以,水稀释至,刻度，摇,匀。,放置,10,min,在,分光光度计,上,用,2,cm,比,色,皿,在,最大吸收,波长,(,510,nm),处,测定,各,溶液的吸光度。以铁含量为,横坐标，吸光度,为,纵坐标，绘制标准曲线。,实验步骤,(2),未知,液中铁含量的,测定,:,吸取,10,mL,未知,液代替,标准溶液,其他,步骤均,同上,测定,吸光度。由未知液的吸光度在标准曲线上,查出,10,mL,未知,液中的铁,含量,以,mg/L,表示,结果,。,实验步骤,1.,记录表格,:(1).,吸收曲线的测绘记录,:,(2).,标准曲线的测绘记录：,五、实验数据记录,波长,/nm,430,450,470,490,500,510,520,530,550,570,吸光度,序号,项目,1,2,3,4,5,6,7(,铁试样溶液,),取,10ug/mL,铁标准溶液的体积,(mL),铁含,(ug/mL),最大吸收波长,(nm),吸光度,A,2.(1),根据表格一绘制吸收曲线,(A-),(2),根据表格二绘制标准曲线,(,纵坐标为,A,横坐标为铁,的含量，单位为,ug/mL),3.,根据铁样品溶液的标准曲线,表示出标准曲线的方程，再将未知样液的吸光强度代入，求得样液中的铁的含量，单位为,mg/L,。,数据记录：,参比溶液又称空白溶液。测量时用作比较的、不含被测物质但其基体尽可能是与试样溶液相似的溶液。通常，用参比溶液扫描的曲线应是一条平坦的直线。有时，基体中虽不含被测物质，但含有别的物质，这时必须保证其不影响测试。经常碰到的是试剂空白中含有被测物质，此时必须经过纯化将其除去。否则将影响测定结果。在色谱分析中，有时基体中可能存在一个以上的和被测组分相距较远的色谱峰，计算机在数据处理中不会计入它们，不影响测定。,参比溶液？,用分光光度计测量，被测的都为液体，通常是稀释后的，要测的是溶质吸光度，而溶剂也是有影响的，所以要有参比，以参比溶液调节零点，去除溶剂对溶质吸光度的影响。在进行光度测量时，利用参比溶液来调节仪器的零点，可以消除由于吸收池壁及溶剂对入射光的反射和吸收带来的误差，并扣除干扰的影响。参比溶液可根据下列情况来选择。,A.,当试剂及显色剂均无色时，可用蒸馏水作参比溶液。,B.,显色剂为无色，而被测试液中存在其它有色离子，可用不加显色剂 的被测试液作为参比溶液。,C.,显色剂有颜色，可选用不加被测试液而加入显色剂的溶液作为参比溶液。,D.,显色剂和试液均有颜色，可将一份试液加入适当掩蔽剂，将被测组分掩蔽起来，使之不再与显色剂作用，而显色剂及其它试剂均按试液测定方法加入，以此作为参比溶液，这样就可以消除显色剂和一些共存组分的干扰。,E.,改变加入试剂的顺序，使被测组分不发生显色反应，可以把此溶液作为参比溶液消除干扰。,参比溶液的选择：,7220,型分光光度计的构造：,分光光度计的原理：,分光光度计的基本原理：溶液中的物质在光的照耀下，发生了对光的特定吸收的效应，而且物质对光的吸收是具有选择性的。各种不同的物质具有其各自的吸收光谱，因此当某种光透过溶液时，其能量就会被吸收而减弱，光能减弱的程度和物质的浓度有一定的比例关系，既符合朗伯,-,比尔定律：,A,吸光度,入射光强度,吸收系数,透射光强度,b,比色,皿池长度,c,溶液的浓度,T,透射比 由上式可以看出当吸收系数,a,与光程长度,b,不变时，吸光度与溶液浓度成正比。本仪器正是依据这一原理而设计的。,1.,开机安装好仪器后，检查样池位置，使其处在光路中（拉动拉手应感应到每挡的定位），关好样品室门，打开仪器电源开关，预热,10,分钟，即可进行测量。,2.,打开样品室门，将方式定于透过率档，按,0%T,进行机械调零。,3.,从蒸馏水中取出比色皿擦干，注意拿比色皿的时候拿毛玻璃面。向比色皿内注入少量试液，润洗三次，然后注入,3/4,至,4/5,的试液，用滤纸片擦干外壁所挂水珠。将比色皿按顺序放入样品池。注意光面对光源。,4.,在样品池中放置空白液与样品。,5.,按需要调节波长按钮。,6.,使空白溶液位于光路中，按方式选择键使吸光度指示灯亮，按,100%T,键调,100%,，至窗口显示,100%,。,7.,打开样品室门，将功能调于透射比档，观察显示是否为,0.0,，若否则按,0%T,键调零。调零后再放回吸光度档。,8.,重复上两步，直至仪器稳定。,9.,将样品置入光路，从显示屏上读取吸光度,。,7220,型分光光度计的使用方法：,1.,盐酸羟胺溶液配制已久对测定结果带来什么影响？,答：羟胺是用来将 还原成 的，如果配制已久，还原能力减弱，就会使部分铁离子得不到还原，造成分析结果偏小。,2.,用分光光度计测量显色剂量不同时的吸光度时应注意什么？,答,:,应用分光光度计测量显示剂量不同时的吸光度时，应保持用一个比色皿测量，这样可以减小比色皿自身对实验产生的影响,3.,为什么要用邻二氮杂菲显色后再测量？,六,.,思考,答：因为水中微量组分较少，对光的吸收很小，无法测出其吸光光度，加入显色剂后，与被测组分形成络合物，摩尔吸收系数较高，吸光明显，容易测定。,4.,显色时，加入还原剂，缓冲剂，显色剂的顺序是否可以颠倒？为什么？,答：不可以，若在加还原剂前先加显色剂邻二氮菲，邻二氮菲会与 络合，再加入还原剂，已络合的三价铁无法还原成二价铁，不能准确得出铁的含量。还原剂是为了把 还原为,，缓冲溶液是调节一定的,PH,值范围,谢谢,观看！,