生防菌剂研究进展课件

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,生防菌剂研究进展,生防菌剂研究进展,1,山东省科学院生物研究所应用微生物研究室，依托山东省应用微生物重点实验室和生物制造技术研发平台，长期从事生防菌剂的研究开发工作，先后研制了木霉菌母药、木霉菌制剂,5,个（登记证号,PD20096832,、,LS20061652,、,PD20096833,、,PD20101573,、,PD20131786,、），芽胞杆菌生物杀菌剂,1,个（登记证号为,PD20094534,），微生物肥料,6,个，取得了较好的经济、社会和环境效益,;,获得省级以上奖励,10,余项，其中省部级一等奖,3,项。,前期研究成果,山东省科学院生物研究所应用微生物研究室，依托,2,近年来，在霜霉病、灰霉病、根结线虫的,生物防治工作中，又,有新的,收获,。,新,筛选到的芽孢杆菌,BCJB01,和,BMJBN02,对葡萄,霜霉病的,防,效分别为,84.05%,和,73.30%,，且,菌株已被开发成悬浮剂和粉剂两种剂型,，活,菌数量分别为,3010,8,和,10010,8,CFU,；新,筛选的木,霉,WS1-10,、,GD1-3,、,TW20256,和,TW20111,对灰霉病的,抑制率为,75,%,；新筛选的木霉,T11-W,对根结线,虫卵的寄生率为,73.46%,，,新筛选的芽孢杆菌,BCJB01,对根结线虫的防,效,为,76.64%,。,近两年研究成果,近年来，在霜霉病、灰霉病、根结线虫的生物防治,3,BCJB01,和,BMJBN02,对霜霉病孢子囊及游动孢子降解作用的显微观察,霜霉病,BCJB01和BMJBN02对霜霉病孢子囊及游动孢子降解作用,4,霜霉病,BCJB01,和,BMJBN02,对,霜霉病孢子囊及游动孢子降解作用的显微观察,霜霉病BCJB01和BMJBN02对霜霉病孢子囊及游动孢子降,5,显微观察结果,：,在,相同的处理条件下，水对照中孢子囊萌发明显；,波尔多液处理孢子囊均变形，导致孢子囊不能正常萌发；,生防,细菌,BMJBN02,可,使孢子囊变形，但对已萌发出来的游动孢子无作用；,而,BCJB01,并不,抑制孢子囊的萌发，菌体围绕在孢子囊周围，在萌发口处等待游动孢子，待游动孢子游出后将其分解。,霜霉病,显微观察结果：霜霉病,6,生防,细菌胞,壁降解酶活性测定,几丁质酶活性,测定,霜霉病,生防细菌胞壁降解酶活性测定霜霉病,7,纤维素酶活性,测定,霜霉病,纤维素酶活性测定霜霉病,8,-1,3-,葡聚糖酶活性测定,霜霉病,-1,3-葡聚糖酶活性测定霜霉病,9,BCJB01,和,BMJBN02,的,鉴定,BCJB01,和,BMJBN02,的,形态特征及生理生化测定标准参照沈萍等和东秀珠等的方法进行；以,菌株,BCJB01,和,BMJBN02,基因组,DNA,为模板，提取方法参照蒋萍，用细菌通用引物扩增,16S rDNA,序列，并将,PCR,反应产物送山东农科院测序中心测序。将测得的序列在,NCBI,中进行,Blast,比对，,发现,BCJB01,和,BMJBN02,分别,为蜡状芽孢杆菌（,Bacillus cereus,）和,巨大芽孢杆菌（,Bacillus megaterium,）。,霜霉病,BCJB01和BMJBN02的鉴定霜霉病,10,BCJB01,和,BMJBN02,对葡萄霜霉病的,室内防效,实验,供试菌剂：,BCJB01,和,BMJBN02 LB,液体,发酵,稀释,10,倍液,葡萄品种：泽山,1,号,叶,盘法检测菌株,BMJBN02,和,BCJB01,室内试验结果,霜霉病,BCJB01和BMJBN02对葡萄霜霉病的室内防效实验霜霉病,11,BCJB01,和,BMJBN02,悬浮剂对葡萄霜霉病的田间实验,试验,按农业部药检所田间试验准则设计。实验统计结果见下,表,BCJB01,和,BMJBN02,悬浮剂,田间,防,效,霜霉病,BCJB01和BMJBN02悬浮剂对葡萄霜霉病的田间实验霜霉,12,霜霉病,霜霉病,13,葡萄溃疡病,处理,1 BAB-1,稀释,60,倍；处理,2 W10,稀释,5,倍；处理,3 11K1,稀释,5,倍；,CK,水,处理,4 BMJBN02,稀释,50,倍；,处理,5 BCJB01,稀释,50,倍,；处理,6 30,%,嘧菌,酯稀释,1500,倍,试验数据由中国农业大学张立群教授提供,葡萄品种：红地球,葡萄品种：毛葡萄,葡萄溃疡病处理1 BAB-1 稀释60倍；处理2 W10稀释,14,防治灰霉病的木霉资源筛选,已获得,木霉菌株,500,余株。,发现,4,株,木霉菌对番茄灰霉病有良好的,防治效果,灰霉病,26,省,1203,个样品,防治灰霉病的木霉资源筛选已获得木霉菌株500余株。灰霉病26,15,灰霉病,LTR-2,WS1-10 GD1-3,灰霉病 LTR-2 WS,16,灰霉病,拮抗霉,病情,指数,p,=0.05,p,=0.01,防效,%,拮抗菌,病情,指数,p,=0.05,p,=0.01,防效,%,T91-2,48.13,a,A,20.3,T16-2,26.11,de,DE,56.7,T6-3,45.26,a,A,25.0,gD3,24.97,de,DE,58.6,T9-4,43.55,ab,AB,27.9,gD1-3,2,1,.87,d,e,f,DE,63,.8,T10-1,36.78,b,c,B,C,39.1,LTR-2,19.67,d,ef,EF,67.4,T8-2,36.11,bc,BC,40.2,WS1-10,18.62,d,ef,EF,69.2,T11,32.55,cd,CD,46.1,CK,60.37,-,-,拮抗木霉防治黄瓜灰霉病的室内试验结果,灰霉病拮抗霉病情p=0.05p=0.01防效拮抗菌病情p=0,17,利用,ATMT,方法构建了绿色木霉,LTR-2,的突变体库,筛选方法：突变体对番茄灰霉菌的重寄生能力进行,筛选,结果：,T2-60,、,T2-58,生防木霉菌,LTR-2,的遗传,改良,A,B,显微镜下观察,突变子对灰霉病菌丝,的,结合位点和,接触缠绕,情况,A,缠绕程度强,B,缠绕程度弱,利用ATMT方法构建了绿色木霉LTR-2的突变体库生防木霉菌,18,将几丁质酶基因,chi42,和葡聚糖酶基因,glu14,串联在同一个表达载体上，并利用,ATMT,手段将双价抗病基因导入绿色木,霉,LTR-2,基因组,DNA,上，获得具有双价抗病基因的重组菌株,L-15,。,生防木霉菌,LTR-2,的遗传改良,遗传改良木霉防治番茄灰霉病的室内试验结果,将几丁质酶基因chi42和葡聚糖酶基因glu14串联在同一个,19,木霉菌,LTR-2,的液,-,固发酵新工艺,:,液体发酵,(,种子,),：,1%,葡萄糖，,4%,玉米粉，,2%,豆饼粉，,0.05%,硫酸镁，,0.1%,磷酸二氢钾，,0.02%,消泡剂，,pH6.0,，培养条件：,30,，转速,150r/min,，通气量,1,：,0.5,1,；,固体发酵：麦粒或玉米粒，添加,10%,稻壳，接种量,3%,；发酵培养条件：水分控制在,55%5%,，培养条件：温度控制在,26-35,，料厚,5-10CM,，湿度,45%-55%,，培养时间,48-72h,；,产量：,5010,8,cfu,/,克固料,木霉发酵工艺及制剂的研究,木霉菌LTR-2的液-固发酵新工艺:木霉发酵工艺及制剂的研究,20,木霉发酵工艺及制剂的研究,木霉菌液体发酵产厚垣孢子发酵工艺：,1、碳、氮源及无机盐的确定,木霉发酵工艺及制剂的研究木霉菌液体发酵产厚垣孢子发酵工艺：1,21,木霉发酵工艺及制剂的研究,2、培养基质量分数正交实验,木霉发酵工艺及制剂的研究2、培养基质量分数正交实验,22,木霉发酵工艺及制剂的研究,最优组合：可溶性淀粉质量分数2%、豆粕质量分数5%、FeSO4 5H2O 0.02%，诱导剂量1，诱导剂加入时间24小时，pH6.0。厚垣孢子总数为1.510,8,cfu/ml。,木霉发酵工艺及制剂的研究最优组合：可溶性淀粉质量分数2%、豆,23,木霉悬浮种衣剂助剂的筛选,通过尝试法对8种润湿分散剂、3种成膜剂进行了筛选，结果如下：,观测结果表明，对照CK严重絮凝，而十二烷基苯磺酸钠悬浮率可达92.5%，此外木霉LTR-2在2%十二烷基苯磺酸钠浓度下活性基本没有影响，同时价格便宜，因此，选择作为种衣剂的润湿剂。,木霉悬浮种衣剂助剂的筛选通过尝试法对8种润湿分散剂、3种成膜,24,木霉悬浮种衣剂助剂的筛选,综合其粘度、包衣脱落率和包衣均匀度来考查其成膜性能,，,选用,2%的聚乙烯醇水溶液作为悬浮种衣剂的成膜剂最为合适。,木霉悬浮种衣剂助剂的筛选综合其粘度、包衣脱落率和包衣均匀度来,25,初选配方,木霉悬浮种衣剂助剂的筛选,制备木霉悬浮种衣剂的理化性质稳定，悬浮效果好，,pH,适宜，成膜时间短，包衣效果好，脱落率低，并且长时间储存不分层结块，制剂的质量稳定，60天木霉活孢子存活率在65-70,%。,初选配方木霉悬浮种衣剂助剂的筛选制备木霉悬浮种衣剂的理化性质,26,线虫,木霉,T11-W,寄生根结线虫卵,T11-W,对南方根结线虫卵具有寄生作用，校正寄生率为,73.,46%,，相对孵化抑制率为,94.,19%,。田间试验表明，,T11-W,对番茄根结线虫防效为,48.21%,。,木霉,T11-W,授权专利,利用秀丽隐杆线虫培养木霉厚垣孢子的方法及应用,线虫木霉T11-W寄生根结线虫卵T11-W 对南方根结线虫,27,越南伯克氏,菌,B418,B418,对番茄根结线虫病的防治效果达,63.42%,。田间连续,施 用,B418,菌株可湿性粉剂后，土壤根结线虫数量显著减少。,线虫,越南伯克氏菌B418线虫,28,芽孢杆菌,BCJB01,、,BMJBN02,和,BtR05,线虫,芽孢杆菌BCJB01、BMJBN02和BtR05线虫,29,