毛细管电泳课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,毛细管电泳技术在糖类物质分析中的应用,三.毛细管电泳在糖类分析中的应用,四.毛细管电泳在糖类分析中的前景,二.毛细管电泳在药物研发中的应用,一.毛细管电泳概述,报告内容,毛细管电泳原理,电泳,（,=,q,E,6,r,）,电渗,（V=,E ）,表观电泳淌度,（=lLtV）,利用目标分子荷质比的差异进行别离,毛细管电泳仪,类型 检测限/mol 特点,紫外-可见 10,-13,10,-15,加二极管阵列，光谱信息,荧光 10,-15,10,-17,灵敏度高，样品需衍生,激光诱导荧光 10,-18,10,-20,灵敏度极高，样品需衍生,电导 10,-18,10,-19,离子灵敏，需专用的装置；,检测器,高效毛细管电泳特点及别离模式,高效,快速,微量,自动化,低成本,一.毛细管区带电泳:在裸管中，基于组分在自由溶液中迁移速分离,二.胶束毛细管电泳：以胶束为准固定相的一种电动色谱,三.毛细管电色谱 ：毛细管内壁修饰、键合或交联色谱固定相,四.毛细管凝胶电泳：毛细管内填充凝胶，利用分子大小差异分离,五.毛细管等电聚焦：基于组成等电点差别进行分离,高效毛细管电泳在药物研发中的应用,一、离子分析,阳离子,阴离子,高效毛细管电泳在药物研发中的应用,二、手性化合物分析,常用手性选择剂：环糊精及其衍生物；手性冠醚；手性外表活性剂氨基酸衍生物、胆酸钠、牛磺脱氧胆酸及其钠盐、低聚糖等天然手性外表活性剂,手性药物的对映体在生物体内因为立体选择性，将作为不同的分子加以识别。导致具有各自的药理活性和毒性。,例如：R-反响停是安眠药，S-式致胎儿畸形；,王竞,程煜凤,吴小丽。基于毛细管电泳法人血清的代谢组学研究J。中国抗生素杂志,2021,38(9):648-695.,高效毛细管电泳在药物研发中的应用,氨基酸,三、核酸和氨基酸分析,核酸,Tomoyoshi S,Motohiro I.Capillary electrophoresis method for the analysisof inorganic anions,organic acids,amino acids,nucleotides,carbohydrates and other anionic Compounds.,Electrophoresis,2001,22,:34183425,高效毛细管电泳在药物研发中的应用,四、临床应用和食品平安检查,毛细管电泳法测定微量清蛋白/肌酐(Alb/Cr)比值，用于诊断糖尿病肾病,2,赵绍林,吴惠毅,吉艳等,高效毛细管电泳法同时测定尿液清蛋白和肌酐,J.,临床检验杂志,2007,25(5):338-340.,1 钦雄,童 敬,郭 平等,高效毛细管电泳法测定牛奶和奶粉中残留的三聚氰胺J.色谱，2021,26(6)：755-758.,高效毛细管电泳在药物研发中的应用,五、药物代谢中的应用和蛋白相互作用分析,毛细管电泳测定血浆中班布特罗和特布他林。3.班布特罗、4.特布他林。,1,史爱欣,李可欣,曹国颖等，高效毛细管电泳法测定班布特罗及其代谢物特布他林的血药浓度。药物分析杂志,2001，21(4)：290-293.,2 He XY,Ding YS,Li DZ.Recent advances in the study of biomolecular interactions by capillary electrophoresisj.,Electrophoresis,2004:,25:,697711.,基因组学,蛋白组学,糖组学,香菇多糖,黄芪多糖,调节免疫功能,调节细胞生长,参与细胞间物质交换,癌症诊断和治疗,高效毛细管电泳在,糖类物质,分析中的应用,高效毛细管电泳在,糖类物质,分析中的应用,TLC,HPLC,GC,CE,其灵敏度较低、别离能力较差，该方法只适合于糖类物质定性分析,快速、微量、自动化、高灵敏度和低分析本钱，但稳定性相对较差，方法建立困难。,其灵敏度高、别离能力强，稳定性好，但本钱高，方法建立困难，通用性差。,需多步衍生反响，操作繁杂，稳定性差，,且容易产生异构体，造成数据偏差，,单糖组成测定结构分析和质量控制,10种单糖标准品毛细管电泳图谱,茯苓总多糖单糖组成,淫羊藿总多糖单糖组成,日内精密度为3%内，检测限为0.05mM,单糖组成测定结构分析和质量控制,8种单糖标准品未衍生的电泳图谱,牛膝总多糖单糖组成与单糖标准品的比对图,牛膝总多糖单糖组成与单糖标准品的比对图,日内精密度为5%内，检测限为0.1mM,目标多糖定量分析和手性拆分,多糖酶解产物定量分析：1 甘露糖 2甘露二糖,多糖酶解产物定量分析 1 葡萄糖 2 果胶二糖 3 果胶三糖 4 半乳糖糖醛酸。,Despina AT,Raluca SS,Constantina P.Kapnissi-Christodoulou1Chiral selectors in CE:Recent developments and applications J.Electrophoresis 2021,34:178204.,细菌脂多糖和蛋白聚糖测定,毛细管电泳测定,Escherichia coli K4,脂多糖（LPS）,1.Odile FR,Donatella C,Mario DR.High-performance CE of Escherichia coli K4 cell surface polysaccharides J.Electrophoresis 2021,30:38773883.,2.Nicola Volpi,Francesca M,Jiraporn S.Electrophoresis for the analysis of heparinpurity and qualityJ.Electrophoresis,2021,33:15311537.,氧端和氮端糖基化能够影响蛋白稳定性，配体结合能力，免疫原性和血清半衰期。,等点聚焦和毛细管等点聚焦对比图,单克隆抗体糖基化检测抗体类药物质量控制,胶束毛细管电泳定量测定糖基化和非糖基化修饰蛋白,酶 解,N端聚糖,O端聚糖,肼 解,-消元法,等电点,分子量,糖基化,初步质控,衍生后糖基化分析,Satoru K,Kazuaki K,Evaluation of glycosylation for quality assurance of antibody pharmaceuticals by capillary electrophoresis J.Electrophoresis,2021,29:35953604.,二.食品平安检测,三.临床检验和诊断,四.单克隆抗体和重组蛋白类疫苗的质控糖基化检测,一.糖类药物的检测和质控,毛细管电泳在糖类物质分析中的应用前景,谢 谢,