资源描述
单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,第十二章 水质微生物检测,第十二章 水质微生物检测,1,第一节 水中微生物,一、水生境的特征,影响水中微生物分布类群的主要因素:,温度,静水压,光照,溶解氧,氢离子强度,化学物质,营养物质,第一节 水中微生物一、水生境的特征,2,光照:日光中紫外线射入水中强度明显减弱,具有光合作用的微生物和藻类主要分布在水的表层;,溶解氧:水中的需氧微生物利用溶解氧,水体表层主要是需氧和兼性需氧微生物,深层和水底以厌氧微生物为主;,PH:水中微生物适宜范围是pH6.58.5,这与一般自然水的pH值范围相适应。海水的pH7.58.5,海水中多数微生物生长的最适pH7.27.6;,化学物质:有机物,无机物:氨、硝酸盐、磷酸盐、硫酸盐、碳酸盐,金属离子:汞、铜;,营养物质:异养微生物,营养贫乏时,微生物倾向吸附颗粒。,光照:日光中紫外线射入水中强度明显减弱,具有光合作用的微生物,3,二、水微生物的种类,水微生物的种类很多,有细菌、真菌、病毒、藻类和原生动物;,水中大多数微生物属于异养微生物,它能利用水中有机物质生长,另一类为自养微生物,它只需无机物质就能合成新的细胞。,三、水中细菌的特点,个体小;,多有鞭毛和纤毛能运动;,常聚集在一起,或粘附于颗粒物质表面能耐受低浓度的营养物质;,多为革兰阴性菌。,二、水微生物的种类,4,四、水微生物的卫生学意义,1、引起介水传染病,水是传染性疾病的重要传播途径。病原体进入水体后可能导致介水传染病的传播和流行;,2、污染食品引起感染,水生微生物还会使水产品和水生生物受到污染,人在食用后也可引起感染;,3、污染食品引起食品腐败变质,即使污染的不是致病微生物,也有可能引起食品腐败变质,间接影响人类健康。,四、水微生物的卫生学意义1、引起介水传染病,5,第二节饮用水种类及卫生微生物指标,一、饮用水分类,1、生活饮用水:供人生活的饮水和生活用水,2、包装饮用水:,饮用天然矿泉水,饮用天然泉水,其他天然饮用水,饮用纯净水,饮用矿物质水,其他包装饮用水,第二节饮用水种类及卫生微生物指标一、饮用水分类,6,二、饮用水介绍,(一)、生活饮用水,新发布的产品标准 GB5749-2006,标准检验方法为 GB/T5750-2006,水质检验项目由原35项增加至106项,,,旧标准微生物指标只有细菌总数和总大肠菌群2项,不能确切的评价水质的卫生状况。,修订后的微生物学指标增加为6项:,菌落总数、总大肠菌群、耐热大肠菌群、大肠埃希氏菌、贾第鞭毛虫和隐孢子虫。,二、饮用水介绍(一)、生活饮用水,7,(二)包装饮用水,1、饮用天然矿泉水,新发布的产品标准GB8537-2008饮用天然矿泉水标准检验方法为,GB/T 8538-2008,饮用天然矿泉水检验方法取消了菌落总数,增加了三个新的致病菌粪链球菌、,铜绿假单胞菌,和产气荚膜梭菌,加上,大肠菌群共4项微生物指标;,2、饮用天然泉水,除矿物质指标不能达到饮用天然矿泉水的要求外,其余从开采、水源保护、加工工艺等都应与矿泉水保持一致。国家标准起草中,一般可参考,GB19298-2003,微生物学指标为4项:菌落总数、大肠菌群、霉菌和酵母、致病菌(沙门、志贺、金葡);,(二)包装饮用水,8,3、其他天然饮用水,对于来源于井水、水库水、溪流、湖泊、高山冰川等,未受污染,未经公共供水系统的水,可以称为“天然”。,国家标准起草中,,一般可参考,GB19298-2003,微生物学指标为4项:菌落总数、大肠菌群、霉菌和酵母、致病菌(沙门、志贺、金葡);,4、饮用纯净水,经过反渗透、电渗析等水处理工艺的产品。,产品标准为GB17323 瓶装饮用纯净水和GB17323 瓶装饮用纯净水卫生标准,微生物学指标为4项:菌落总数、大肠菌群、霉菌和酵母、致病菌(沙门、志贺、金葡)要求高于GB19298-2003;,5、饮用矿物质水,强化矿物质成分的一种水,也有叫矿化水,国家标准起草中;,6、其他包装饮用水,调味水,不经调色,增加各种香精风味。,3、其他天然饮用水,9,三、与水质相关的各类标准和检验方法,GB5749-2006,,生活饮用水卫生标准,GB/T5750-2006,,生活饮用水标准检验方法,GB8537,2008,,饮用天然矿泉水,GB/T8538,2008,,饮用天然矿泉水检验方法,GB17323,1998,,瓶装饮用纯净水,GB17324,2003,,瓶装饮用纯净水卫生标准,GB19298,2003,,瓶(桶)装饮用水卫生标准,三、与水质相关的各类标准和检验方法 GB5749-2006,,10,四、各类水质的微生物指标要求,四、各类水质的微生物指标要求,11,各类水质的微生物指标要求(续),各类水质的微生物指标要求(续),12,第三节生活饮用水微生物检测,一、水样中微生物项目检测方法 GB/T 5750.12,1 菌落总数 1,平皿计数法,2 总大肠菌群 1,多管发酵法,2,滤膜法,3 酶底物法,3 耐热大肠菌群 1,多管发酵法,2,滤膜法,4大肠埃希氏菌 1,多管发酵法,2,滤膜法,3,酶底物法,5贾第鞭毛虫和隐孢子虫 免疫磁分离荧光抗体法,第三节生活饮用水微生物检测一、水样中微生物项目检测方法 GB,13,二、水样的采集和保存方法GB/T 5750.2,1、,水样的采集方法,范围:适用于生活饮用水和及其水源水样的采集和保存,采样容器:玻璃材质,不透明非活性玻璃容器。,容器及塞子、盖子应经灭菌温度并且在此温度下不释放或产生出任何能抑制生物活性、灭活或促进生物生长的化学物质。,取样体积:0.5L,采样容器的洗涤和灭菌:,1)容器洗涤:将容器用自来水和洗涤剂洗涤,并且用自来水彻底冲洗后用质量分数为10的盐酸溶液浸泡过夜,然后依次用自来水,蒸馏水洗净;,二、水样的采集和保存方法GB/T 5750.21、水样的采集,14,2)容器灭菌:热力灭菌。干热灭菌要求160,,2h;高压蒸汽灭菌121,,15min。高压蒸汽灭菌后的容器如不立即使用,应于60将瓶内冷凝水烘干,灭菌后的容器应在2周内使用。,3)同一水源,同一时间采集几类检测指标的水样时,应先采集供微生物学指标检测的水样,采样时应直接采集,不得用水样涮洗已灭菌的采样瓶,并避免手指和其他物品对瓶口的污染。,4)在取自来水样时,先用酒精灯将水龙头烧灼消毒,然后把水龙头完全打开,放水几分钟后,再取水样。,5)采取含有余氯的水样时,应在水样瓶未消毒前按每,125ml,水样加入0.1mg硫代硫酸钠除去残余余氯。,2)容器灭菌:热力灭菌。干热灭菌要求160,2h;高,15,2、,水样保存,各种水质的水样,从采集到分析这段时间里,由于物理的、化学的、生物的作用会发生不同程度的变化,这些变化使得进行分析时的样品已不再是采样时的样品,为了使这种变化降低到最小的程度,必须在采样时对样品加以保护。,微生物:04避光保存,每,125ml,水样加入0.1mg硫代硫酸钠除去残余余氯,保存时间4h。,3、水样的过滤和离心,需要进行微生物检测的样品,不能进行过滤和离心。,2、水样保存,16,三、细菌菌落总数检测,1.方法平皿计数法,2.范围:,此方法适用于测定生活饮用水及其水源水中的细菌总数,3,.定义:,菌落总数(standard plate-count bacteria)水样在营养琼脂上有氧条件下37培养,48h,后,所得1mL水样所含细菌的总数。,4,.主要培养基:营养琼脂,5.主要仪器:培养箱36,+,1 等,三、细菌菌落总数检测1.方法平皿计数法,17,6.检验步骤,生活饮用水,1mL水样+15mL45,左右琼脂,,摇匀,,做,平行样和空白对照,。冷却后,,翻转平板,,36,+,1 培养,48h,后计数。,水源水,先制成1:10,1:100等稀释液,再按生活饮用水的检验步骤进行检验。,6.检验步骤生活饮用水,18,生活饮用水,生活饮用水菌落总数检测操作流程,生活饮用水生活饮用水菌落总数检测操作流程,19,7.菌落计数及报告方法,作平皿菌落计数时,可用眼睛直接观察,必要时用放大镜检查,以防遗漏。在记下各平皿的菌落数后,应求出同稀释度的平均菌落数,供下一步计算时应用。在求同稀释度的平均数时,若其中一个平皿有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌落不到平皿的一半,而其余一半中菌落数分布又很均匀,则可将此平皿计数后乘2以代表全皿菌落数。然后再求该稀释度的平均菌落数。,7.菌落计数及报告方法 作平皿菌落计数时,可用,20,8.不同稀释度的选择及报告方法,首选30300之间进行计算,若只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时,则将该菌落数乘以稀释倍数报告之(见表1实例1);,若有两个稀释度,其生长的菌落数均在30300之间,则视二者之比值来决定,若其比值小于2应报告两者的平均数(见表1实例2),若大于或等于2则报告其中稀释度较小的菌落数(见表1实例3、4);,若所有稀释度的平均菌落数均大于300,则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表1实例5);,若所有稀释度的平均菌落数均小于30,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表1实例6);,8.不同稀释度的选择及报告方法首选30300之间进行计算,21,若所有稀释度的平均菌落数均不在30300之间,则应以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之,(见表1实例7);,若所以稀释度的平板上均无菌落生长,则以,未检出,报告之;,如果所以平板上都菌落密布,不要用“多不可计”报告,而应在稀释度最大的平板上,任意数其中2个平板1cm,2,中的菌落数,除2求出每平方厘米内平均菌落数,乘以皿底面积63.6cm,2,,再乘其稀释倍数作报告;,菌落计数的报告:菌落数在100以内时按实有数报告,大于100时,采用两位有效数字,在两位有效数字后面的数值,以四舍五入方法计算,为了缩短数字后面的零数也可用10的指数来表示。,若所有稀释度的平均菌落数均不在30300之间,则应以最接,22,表1 稀释度选择及菌落总数报告方式,实例,不同稀释度的平均菌落数,两个稀释度菌落数之比,菌落总数,/,(,CFU/mL,),报告方式,/(CFU/mL),10,-1,10,-2,10,-3,1,1365,164,20,16400,16000或,1.6,10,4,2,2760,295,46,1.6,37750,38000或,3.8,10,4,3,2890,271,60,2.2,27100,27000或,2.7,10,4,4,150,30,8,2,1500,1500或,1.5,10,3,5,多不可计,1650,513,513000,510000或,5.1,10,5,6,27,11,5,270,270或,2.7,10,2,7,多不可计,305,12,30500,31000或,3.1,10,4,8,0,0,0,ll0,ll0,表1 稀释度选择及菌落总数报告方式实例不同稀释度的平均菌落数,23,四、总大肠菌群检测,1.方法多管发酵法,(另有滤膜法和酶底物法),2.定义,总大肠菌群(total coliforms)指一群在37培养24h能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。,3.主要培养基:,乳糖蛋白胨培养液、伊红美兰培养基和革兰氏染液。,4.主要仪器:,培养箱、平皿和试管等。,四、总大肠菌群检测1.方法多管发酵法(另有滤膜法和酶底物,24,5.检验步骤,乳糖发酵试验,取10mL水样接种到10mL双料乳糖蛋白胨培养液中,取1mL水样接种到10mL单料乳糖蛋白胨培养液中,另取1mL水样注入9mL灭菌生理盐水中,混匀后吸取1mL(即0.1mL水样)注入到10mL单料乳糖蛋白胨培养液中,每一稀释度接种5管。,对已处理过的出厂自来水,需经常检验或每天检验一次的,可直接接种5份10mL水样双料培养基,每份接种10mL水样。,检验水源水时,如污染较严重,应加大稀释度,可接种1,0.1,0.01mL甚至
展开阅读全文