器官培养专题知识讲座

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,器官培养专题知识讲座,器官培养专题知识讲座,第1页,第一节 根培养,离体根培养，因为含有生长快速、代谢活跃及在已知条件下可依据需要增减培养基中成份等优点，多用于探索植物根系生理及其代谢活动。,器官培养专题知识讲座,第2页,一、培养过程,现以番茄根为例，介绍其培养过程（图,6-1,）。番茄种子经表面消毒，在无菌条件下萌发，待根伸长后，从根尖一端切取,10mm,长根尖接种于培养基中。,器官培养专题知识讲座,第3页,图,7-1,番茄离体根培养过程,1,、种子用,70%,酒精消毒,1,分钟；,2,、用饱和漂白粉液消毒,10,分钟；,3,、用无菌水洗三次；,4,、将,6,10,粒种子放入培养皿中湿滤纸上；,5.,培养皿放入暗中培养直至胚根长至,30,40mm,；,6.,切取,10mm,长根尖用无菌接种环接种于培养液中；,7.,在,25,下培养直到长出侧根,器官培养专题知识讲座,第4页,暗培养,4,天后长出侧根，,7,天后又可切离侧根根尖作为新培养材料再进行扩充培养。经过这种由单个直根衍生而来，并经继代培养而保持遗传性一致根培养物，可称为离体根无性系。,器官培养专题知识讲座,第5页,二、培养基,当前培养番茄离体根时，使用改良怀特培养基（表,6-1,）。培养基中氮源以硝酸盐效果好，蔗糖是双子叶植物离体根培养最好碳源。与怀特培养基相比，降低了大量元素浓度，但甘氨酸和烟酸用量增加，硫胺素（维生素,B6,）对离体根培养作用显著，所用浓度仍为,0.1mg/L,。在这个培养基中增加了碘成份，因为碘有利于番茄根生长，浓度为,0.38mg/L,。硼对离体根生长也含有主要影响，缺硼会降低根尖细胞分裂速度，妨碍细胞伸长等。,器官培养专题知识讲座,第6页,对离体根培养研究得最多是胡萝卜，用,White,培养基添加,0.01mg/L,2,4,D,和,0.15mg/L,KT,使胡萝卜肉质根形成愈伤组织。将未分化愈伤组织球形细胞转入到含低水平生长素培养基中，细胞先形成根，再产生不定芽，长成小植株。用胡杨根段进行离体培养，在根段上面先形成愈伤组织，后再分化产生出小植株。,器官培养专题知识讲座,第7页,生长调整物质对离体根生长影响，因植物种或品种不一样而存在差异。如离体根对生长素反应有三种情况：,1.,生长素促进根生长（如玉米、小麦等）；,2.,有些植物离体根生长要依赖于生长素作 用（如黑麦、小麦一些变种）；,3.,生长素抑制植物离体根生长（如樱桃、番茄等）,。,器官培养专题知识讲座,第8页,第二节 茎培养,依据取材部位茎培养可分为茎尖培养和茎段培养。关于茎尖培养详见第八章，这里只讨论茎段培养。一、茎段培养过程 茎段培养是指带有腋（侧）芽或叶柄、长数厘米茎节段进行离体培养。,器官培养专题知识讲座,第9页,因为嫩茎段（即当年萌发或新抽出还未完全木质化枝条），其细胞可塑性大，轻易离体培养，常作为外植体。普通在无菌条件下，将经过消毒茎段切成数厘米长带节节段，接种在固体培养基上。茎段可直接形成不定芽或先诱导形成愈伤组织，再脱分化形成再生苗。把再生苗进行切割，转接到生根培养基上培养，便可得到完整小植株。现以月季为例说明。,器官培养专题知识讲座,第10页,（一）培养基,诱导萌芽培养基,MS+BA0.5-1.0mg/L,；,增殖培养基,MS+BA1.0-2.0mg/L+NAA0.01-0.1mg/L,或,MS+BA1.0-2.0mg/L+IAA0.1-0.3mg/L,；,生根培养基,1/2MS+NAA0.1-0.2mg/L+IAA1.0mg/L,或,1/2MS+IBA0.75mg/L+NAA0.2mg/L+,蔗糖,2%,。,器官培养专题知识讲座,第11页,（二）培养过程,1.,取材,生长健壮当年生枝条，取其饱满未萌芽作为外植体。普通取中部侧芽诱导效果最好。,器官培养专题知识讲座,第12页,2.,灭菌,切去叶片及叶柄，切成,1,2cm,带节茎段（假如是嫩梢需切去少许芽顶部）。将原来向下茎端切成斜面，向上茎端切成平面（这是为了以后接种时方便，也为了防止接种时将上下颠倒）。将清理好材料在自来水下冲洗洁净，然后在无菌条件下用,70%,酒精表面消毒,30s,，用无菌水洗,3,4,次，用,0.1%,升汞溶液灭菌,8,12min(,或用,2%,漂白粉溶液灭菌,8,12min),取出后在无菌水中清洗,4,5,次（用漂白粉溶液灭菌清洗,3,4,次）。,器官培养专题知识讲座,第13页,3.,接种、生长及分化,在无菌条件下操作，将茎段两端用,解剖刀切去少许,(,以除去被杀菌剂伤害,组织,),，接种在诱导培养基上，,7d,后芽开,始萌发，茎尖展叶生长，,20d,后长至,1,2cm,；,器官培养专题知识讲座,第14页,4.,继代培养,萌生芽会不停长大，并可从茎段上分化出若干个丛生芽，这时可经过侧芽增殖和丛生芽再生方式进行继代增殖，切割出丛生芽或将幼芽分切成每段含,1,2,个节茎段，转入增殖培养基中，每隔,4,周继代一次。,对于增殖率过高品种，小苗会变得非常细弱，普通需要转入,MS+BA0.3MG/l+NAA0.1mg/L(,或,IBA0.3mg/L),低分裂素培养基中进行壮苗培养，再转入生根培养基中。,器官培养专题知识讲座,第15页,5.,生根培养,将继代增殖丛生苗切成长度为,2,3cm,单株，转入生根培养基中，,12d,后便可生根。当根长,0.5cm,，有,2,4,条白色根系时即可出瓶移栽。在生根培养基中加入,0.3g/L,活性炭可提升生根质量。,器官培养专题知识讲座,第16页,茎段,不定芽,再生苗,生根盆栽,愈伤组织,芽分化,器官培养专题知识讲座,第17页,球茎类花卉是一类变态茎（球茎、鳞茎）植物，其繁殖可用分球或鳞片进行离体培养，到达大量增殖。球茎类通常在地下培育，污染率比较高。对百合鳞茎消毒时，要把外面几层鳞片剥去，认真用水清洗后，再将鳞茎底部脏个别用尖锐小刀剥去，,在超净工作台上用,70%,酒精浸半分钟，然后在,0.1%,升汞溶液中浸泡,10-12min,，用无菌水冲洗,3,4,次，用消毒滤纸吸干表面水分，切取鳞片接种于培养基上，经过芽诱导、增殖、成球与生根，培养成了完整植株。,器官培养专题知识讲座,第18页,二、培养基,诱导、扩繁和生根培养基大量用,MS,培养基，再加入不一样浓度不一样种类生长素和细胞分裂素。,这是百合鳞茎诱导植株,器官培养专题知识讲座,第19页,第三节 叶培养,很多植物如香叶、天竺葵、秋海棠等叶片含有很强再生能力，因为取材方便，数量多且均一性较强，为适宜外植体。,器官培养专题知识讲座,第20页,一、培养过程,叶片从枝上摘取后，用水冲洗数小时，经过表面消毒后接种于固体培养基上。叶片在培养基生长情况大多依赖于叶子离体时成熟程度，普通说来，幼叶比近成熟叶生长潜力大。很多植物叶组织在离体培养条件下先形成愈伤组织，然后经过愈伤组织再分化出胚状体、茎、叶和根（图,7-2,）。,器官培养专题知识讲座,第21页,图,7-2,由叶组织培养经愈伤组织及胚状体再生植株,器官培养专题知识讲座,第22页,如从香石竹顶芽或腋芽下面取叶片，平放在,MS+1mg/LBA,培养基上，,5,天后外植体开始膨大，基部略有绿色愈伤组织形成，,10,天后开始从基个别化出浅绿色小芽点，并逐步长成小芽丛，经过生根培养后得到完整小植株。离体叶培养也能够发生不定芽结构。,器官培养专题知识讲座,第23页,二、培养基,离体叶经诱导愈伤组织培养基（生长素与细胞分裂素比值较大）培养，形成愈伤组织，愈伤组织转接在分化培养基（生长素与细胞分裂素比值较小）上，分化出不定芽。如：长寿花实生苗叶片，经表面消毒后，切成,.5cm0.5cm,方块，接种于,MS+1mg/L2,4,D+0.1mg/L BA,培养基上，经过,30,天左右培养，叶片边缘开始出现淡绿色颗粒状突起，继续培养后颗粒突起逐步扩充，以后形成质地致密淡绿色愈伤组织块。,器官培养专题知识讲座,第24页,经继代培养后，取得大量愈伤组织。将愈伤组织切成,0.5cm0.5cm,大小，接种到培养基,MS+1mg/L BA+0.1mg/LNAA,上，,15,天后愈伤组织显著转绿和增大；,50,天左右开始产生绿色芽点并陆续分化出芽，每块愈伤组织可分化出,5,6,株无根苗，在,1/2MS,培养基上，全部长出不定根。,器官培养专题知识讲座,第25页,杨树、中华猕猴桃等植物常从叶柄或叶脉切口处形成愈伤组织。用绿巨人幼叶叶柄，在含,5mg/L BA,MS,培养基中培养，,2,个月后叶柄处形成致密绿色愈伤组织，每块愈伤组织上可分化,8,10,个不定芽，当不定芽长至,0.5cm,时，将不定芽同一个别愈伤组织移入到含,2mg/L BA,和,0.2mg/L NAA,培养基中，不定芽快速伸长并长成健壮小苗。大蒜贮藏叶及水仙鳞片叶直接或经愈伤组织再生出球状体或小鳞而发育成再生植株。,器官培养专题知识讲座,第26页,叶离体培养可直接形成不定芽结构。用绿巨人幼叶接种到,MS,培养基中，在,0.2,0.5mg/L BA,和,0.7,2mg/L 2,4,D,诱导下，,5,周后切口处出现绿色突起，再接种到不定芽诱导和增殖培养基,(MS+2,3mg/L BA+0.3,0.4mg/L NAA),后，,3,4,周形成不定芽，切割小芽继续培养，每,4,周可增殖,4,6,倍。用大豆叶柄基部插入分化培养基（,1/2MS+1mg/L BAP,）上诱导，,2,周后从叶柄基部长出小芽和丛芽，诱导率达,60%,70%,。,器官培养专题知识讲座,第27页,第四节 原球茎培养,在兰科植物组培中,常从茎尖、侧芽或种子培养中产生原球茎（前者可看成器官培养，后者可看成胚培养），原球茎能够增殖萌发出小植株。,器官培养专题知识讲座,第28页,一、以茎尖培养来诱导原球茎,（一）取材及灭菌 从生长植株上切取,5-15cm,新芽，去掉苞叶，用流水冲洗洁净，放入,70%,酒精中浸泡数秒钟，用无菌水冲洗后，在加有几滴吐温,-20,饱和漂白粉上清液中浸,10min,左右，然后用无菌水冲洗,2-3,次，置消毒滤纸中吸干水分备用。,器官培养专题知识讲座,第29页,（二）茎生长点剥取,在超净工作台上，将经过灭菌备接材料置于双筒解剖镜下，用解剖工具将外表幼叶剥掉，露出带少数叶原基生长点后，用小刀切取芽。,器官培养专题知识讲座,第30页,（三）原球茎诱导培养,兰花茎尖可采取不一样培养基进行培养，如,B,5,White,MS,1/2MS,等，不用,2,，,4-D,。常见,0.1-0.5mg/L,NAA,和,0.2-1.0mg/L 6-BA,，还可附加,10%,左右椰乳汁，香蕉汁或马铃薯汁等。用固体培养，可适当加些活性炭（,0.1%-0.3%,）,器官培养专题知识讲座,第31页,(,四,),原球茎增殖,适当培养基能够提升原球茎增殖率。,(,五,),苗分化与壮苗培养,在原球茎增殖同时,有可能分化成幼芽，即可置入生根培养基上培养。,器官培养专题知识讲座,第32页,这是大花蕙兰假鳞茎诱导而成原球茎,器官培养专题知识讲座,第33页,徐美玲老师在指导同学们接种,器官培养专题知识讲座,第34页,