菊花的组织培养(给力的ppt课件)

单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,Page,#,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,萧县郝集中学,菊花的组织培养(给力的ppt课件),1,菊花的组织培养(给力的ppt课件),2,课题一,菊花的组织培养,安岳中学：蒋小丽,课题一 菊花的组织培养 安岳中学：蒋小丽,3,有丝分裂,受精卵,细胞分化,在个体发育中，由一个或一种细胞增殖产生的后代，在形态、结构和生理功能上发生稳定性差异的过程。,1,、细胞分化的概念,一、,知识回顾,有丝分裂受精卵细胞分化 在个体发育中，由一个或,4,黑色素细胞在体外培养,30,多代后仍能合成黑色素；离体培养的上皮细胞，始终保持为上皮细胞，而不会变成其他类型的细胞。,2,、稳定性,3,、不可逆性,细胞分化发生在整个生命进程中。,1,、持久性,2,、细胞分化的特点,造血干细胞 原红细胞 早幼红细胞 中幼红细胞 晚幼红细胞 成熟红细胞 死亡,4,、普遍性,黑色素细胞在体外培养30多代后仍能合成黑色素；离体培,5,细胞分化是否意味着细胞中遗传物质的改变？,遗传物质,没有改变,，不同组织的细胞共同来源于受精卵，经有丝分裂产生。,细胞分化是否意味着细胞中遗传物质的改变？,6,3,、细胞分化的实质,A,B,D,C,E,E,D,C,A,B,E,D,C,A,B,E,D,C,A,B,E,D,C,A,B,基因,在个体发育过程中，不同细胞中遗传信息的执行情况不同即基因的选择性表达的过程,3、细胞分化的实质ABDCEEDCABEDCABEDCABE,7,红细胞,合成血红蛋白,(,不合成肌动蛋白,),肌细胞,肌动蛋白基因开启,合成肌动蛋白,(,不合成血红蛋白,),肌动蛋白基因关闭,血红蛋白基因关闭,血红蛋白基因开启,试一试:现在你能解释这些现象了吗?,4,、细胞分化的结果,细胞产生了不同种类的蛋白质即出现了不同的结构和功能,的,细胞和组织。,红细胞合成血红蛋白 (不合成肌动蛋白)肌细胞肌动蛋白基,8,愈伤组织,胚状体,1958,，美国，斯图尔德,植物组织培养,离体,二、基础知识,愈伤组织胚状体1958，美国，斯图尔德离体二、基础知识,9,（一）植物组织培养概念,关键词：,外植体、脱分化、再分化、愈伤组织,在,无菌,和,人工控制,条件下，将离体的植物,器官、组织、细胞,，培养在人工配置的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其脱分化产生愈伤组织再分化形成丛芽，最终形成,完整的植株,。,又称：,植物离体培养,（一）植物组织培养概念关键词：在无菌和人工控制条件下,10,脱分化（或去分化）,：,由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程。,再分化,：脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽等器官的过程。,外植体,：,用于离体培养的植物器官或组织片段,。,愈伤组织,：细胞排列疏松、无规则、高度液泡化的无定形的薄壁细胞。,脱分化（或去分化）：由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的,11,切取,形成层,无菌接种,诱导愈伤组织,的形成,试管苗的形成,培养室,移栽,脱分化,再分化,（二）植物组织培养的基本过程,切取无菌接种诱导愈伤组织试管苗的形成培养室移栽脱分化再分化（,12,植物组织培养过程,离体组织或细胞,植物体,脱分化,细胞分裂素生长素,愈伤组织,芽,根,细胞分裂素,生长素,细胞分裂素,生长素,细胞分裂素,生长素,细胞分裂素,有利于根的分化,有利于芽的分化，抑制根的分化,促进愈伤组织生长,激素的使用顺序、使用量及比例影响植物细胞的发育方向：,使用顺序实验结果先使用生长素，后使用细胞分裂素有利于细胞分裂,25,思考：以下培养基出现的现象反应了什么问题？,生长素,/,细胞分裂素,高 利于根的形成,适中 利于愈伤组织的形成,思考：以下培养基出现的现象反应了什么问题？生长素/细胞分,26,供参考的配方,1,、诱导菊花愈伤组织：,在,MS,培养基中加入,BA,和,NAA,，质量浓度均为,0.5mg,、诱导菊花从芽,：,在,MS,培养基中加入,BA,和,NAA,，质量浓度分别为,2-3mg,和,0.020.03mg,3,、诱导菊花生根：,在,MS,培养基各成分用量减半，并添加入,NAA,或,IAA,，质量浓度均为,0.1mg,供参考的配方1、诱导菊花愈伤组织：,27,4,温度、光照、pH的影响,光照：,菊花每日用日光灯照射,12h,。,温度：,大多数植物组织培养控制在23,27,低于15时植物组织会表现生长停止,高于35时对植物生长不利。,菊花的组织培养控制在18,22,。,pH,：,不同植物对培养基最适,pH,的要求不,同，大多数控制在,5,6.5,。,菊花的组织培养控制在,5.8,左右。,4温度、光照、pH的影响光照：菊花每日用日光灯照射12h。,28,制备,MS,固体培养基,外植体消毒,接种,培 养,栽 培,四、实验操作,移 栽,冲洗,酒精,无菌水冲洗,氯化汞,无菌水冲洗至少三次之上,配制各种母液,配制培养基,灭菌,制备MS固体培养基外植体消毒 接种 培 养栽,29,（一）制备,MS,固体培养基,MS,培养基包括,20,多种营养成分，实验室一般使用,4,保存配制好的,培养基,母液,来制备,1,、配制各种母液,无机物中大量元素浓缩,10,倍，微量元素浓缩,100,倍，常温保存,激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按,1mg/ml,的质量浓度,单独,配制成母液,用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量,（一）制备MS固体培养基MS培养基包括20多种营养成分，实验,30,2,、配制培养基,分装到锥形瓶中，每瓶分装,50ml,或,100ml,配制培养液,调,PH,培养基的分装,由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此不必添加植物激素,3,、灭菌,分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌,2、配制培养基分装到锥形瓶中，每瓶分装50ml或100ml,31,1,、选材：,菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝,（二）外植体消毒,2,、消毒,流水冲洗,菊花茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉，用软刷轻轻刷洗，刷洗后在,流水,下冲洗,20min,左右,酒精处理,用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入,体积分数为,70,的酒精,中摇动,2,3,次，持续,6,7s,，立即将外植体取出，在,无菌水,中清洗,消毒液处理,取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入,质量分数为,0.1,的氯化汞溶液,中,1,2min,，取出后在,无菌水,中至少清洗,3,次，漂净,消毒液,1、选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝（二）外植体消毒2、消毒,32,（三）接种,污染的主要来源是空气中的,细菌和孢子,，接种室消毒是至关重要的。用,70的酒精,喷雾使空气消毒，酒精或新洁尔灭搽洗工作台并用紫外线照射20分钟,。,1,、接种室消毒,2,、无菌操作要求,操作要在,酒精灯火焰旁,完成，每次使用器械后，都需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。,3,、材料的切取和接种,将消过毒的菊花茎段在,无菌培养皿,中切成,0.5,1cm,的小段，用,镊子,夹取菊花茎段接种。,（三）接种污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种室消毒是至,33,菊花的组织培养(给力的ppt课件),34,4,、接种注意事项,每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为,70,的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上烧一遍，冷却后再接种,外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体数量根据锥形瓶的大小确定，一般,胡萝卜,3,4,块，菊的茎或叶,6,8,块,，也不要太少，以充分利用培养基中的营养成分和光照条件,插入时应注意方向，,形态学上端朝上，形态学下端朝下，,不要倒插。茎段、茎尖基部插入培养基利于吸收水分和养分,4、接种注意事项每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为7,35,正常苗,污染苗,正常苗污染苗,36,1,、外植体带菌,2,、培养基及接种器具灭菌不彻底,3,、接种操作时带入,4,、环境不清洁,污染途径,1、外植体带菌2、培养基及接种器具灭菌不彻底3、接种操作时带,37,思考：你打算做几组重复？你打算设置对照实验吗？,答：每种材料或配方至少要做,一组以上,的重复。设置对照实验可以取用一个,经过灭菌,的装有培养基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养，用以,说明培养基制作合格，没有被杂菌污染,。,思考：你打算做几组重复？你打算设置对照实验吗？答：每种材料或,38,（四）培养,接种后的锥形瓶最好放在,无菌箱,中培养，培养期间应定期消毒,培养温度控制在,18-22,每日用日光灯,光照,12h,（四）培养接种后的锥形瓶最好放在无菌箱中培养，培养期间应定期,39,（五）移栽,移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日,。,一般放置在,2025,的,遮荫环境,中，适应,57d,。,试管苗不萎蔫，有新生长的趋势，便可移栽。,1,、打开封口膜,2,、清洗转移,用流水清洗根部的培养基，,将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境下,生活一段时间,3,、移栽,幼苗长壮后，移栽到土壤中,（五）移栽 移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养瓶的,40,固体基质型，含水量高、,蓄水性强、透性好，适合栽培,珍珠岩,珍珠岩是一种火山喷发的酸性熔岩，经急剧冷却而成的玻璃质岩石，有弧形或圆形裂隙，如珍珠的结构，所以被命名为珍珠岩。,蛭石,是一种天然、无毒的矿物质，在高温作用下会膨胀的矿物。它是一种比较少见的矿物，属于硅酸盐。,固体基质型，含水量高、珍珠岩,珍珠岩是一种火山喷发的酸性熔,41,（六）栽培,幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情况，,适时浇水、施肥，直至开花,（六）栽培 幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情况,42,1,、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）,2,、外植体的消毒（酒精、氯化汞）,3,、接种的无菌操作（酒精、酒精灯,灼烧）,4,、无菌箱中的培养；,5,、移栽到消过毒的环境中生存一段时间。,在整个操作过程中，是如何来实现,无菌,环境的？,1、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）在整个操作过程中，是如何来实,43,结果分析与评价,（一）对接种操作中污染情况的分析,（二）是否完成了对植物组织的脱分化和再分化,（三）是否进行了统计、对照与记录,（四）生根苗的移栽是否合格,结果分析与评价（一）对接种操作中污染情况的分析,44,五、课题延伸,1,、一般来说，容易进行,无性繁殖,的植物，也容易进行组织培养,2,、实例：芦荟、豆瓣绿、秋海棠、月季,营养繁殖,扦插,嫁接,压条,五、课题延伸1、一般来说，容易进行无性繁殖的植物，也容易进行,45,扦插,嫁接,压条,扦插嫁接压条,46,练习,1.,答：植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗性差，对培养条件的要求较高。用于植物组织培养的培养基同样适合于某些微生物的生长，如一些细菌、真菌等的生长。而培养物一旦受到微生物的污染，就会导致实验前功尽弃，因此要进行严格的无菌操作。,2.,答：外植体的生理状态是成功进行组织培养的重要条件之一。生长旺盛的嫩枝生理状况好，容易诱导脱分化和再分化。,练习,47,菊花的组织培养,再分化,材料性质、营养物质、,调节物质、环境条件,外植体的消毒,接种,基本原理,:,细胞的全能性,基本过程,:,脱分化,愈伤组织,影响因素：,操作流程：,配制,MS,固体培养基,培养,移栽,栽培,菊花的组织培养再分化材料性质、营养物质、外植体的消毒接种基本,48,生活中的辛苦阻挠不了我对生活的热爱。,11月-24,11月-24,Monday,November 11,2024,人生得意须尽欢，莫使金樽空对月。,11:48:10,11:48:10,11:48,11/11/2024 11:48:10 AM,做一枚螺丝钉，那里需要那里上。,11月-24,11:48:10,11:48,Nov-24,11-Nov-24,日复一日的努力只为成就美好的明天。,11:48:10,11:48:10,11:48,Monday,November 11,2024,安全放在第一位，防微杜渐。,11月-