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单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。,一、,掌握,病原菌的常规分离与鉴定方法原则和常用的检测细菌抗原的方法。,人工自动免疫和人工被动免疫的概念。,常用生物制品的概念和特点。,细菌标本的采集与送检的主要原则。,二、熟悉,抗菌药物的主要作用机制。,三、了解,临床感染性疾病用药的基本原则及检测细菌对药物敏感性的,常用方法。,目的要求,第一节 细菌感染的诊断,病原菌感染的诊断,细菌学诊断,检测病原菌及其Ag,产物或核酸,血清学诊断,检测血清中的特异性,抗体,原则：采取急性期和恢复期双份血清，后者的抗体效价比前者升高4倍者有意义。,一、病原菌检测,1.标本的采集,疾病种类不同采集不同的标本,注意无菌操作,严防标本污染,抗菌药物应用之前,尽快送检,特殊要求标本要特殊处理,标本作好标记,认真填写化验单,(6)正确的包装,、,运输和保存,采集合适的标本,严格无菌操作,正确采集标本,正确标记及包装,正确运输及保存,2.致病菌的检验程序,直接涂片镜检,生化试验,血清学鉴定,药物敏感试验,PCR诊断技术,分离培养,动物试验,标 本,直接检查,涂片,Gram,染色,初报,Ag检测,分离培养,直接药敏试验,初,报,观察挑选可疑菌落,药敏试验,报告,纯培养,生化反应,培养特性,血清学鉴定,报告,动物实验,分子生物学检查,报告,致病菌的检验程序,(1)细菌形态结构检查,显微镜放大法,普通光学显微镜 电子显微镜,暗视野显微镜 相差显微镜,荧光显微镜 同焦点显微镜,3.检验方法,染色法,单染色法,、,革兰染色法 抗酸染色法,、,特殊 结 构,染色法,、异染颗粒染色法,、,细胞壁染色法,直接涂片染色镜检,单 染 法,只显示细菌的形态与排列,复,染 法,可观察细菌的形态、排列及其染色性,革兰,染色（Gram stain),抗酸,染色（,Acid-fast stain),特殊染色法,荚膜染色、芽胞染色、,鞭毛染色、异染颗粒,染色法,脑膜炎奈瑟菌（革兰染色）,结核分枝杆菌（抗酸染色）,分离培养与鉴定,液体培养基：,增菌培养,半固体培养基：,查动力或保存菌种,固体培养基：,平板用于分离培养,斜面用于纯培养或保存菌种,生化试验（,biological tests）,糖类代谢,糖发酵试验,VP试验（Vi）,甲基红试验（M）,枸橼酸盐利用试验（C）,蛋白质代谢,靛基质（吲哚）试验（I）,硫化氢试验,尿素分解试验,血清学鉴定,（serological tests）,已知抗体（抗血清）,待检抗原,（未知菌）,直接法玻片凝集试验（,定性试验,）,动物试验,主要用于分离、鉴定致病菌，测定菌株产毒性等,药物敏感试验,纸片琼脂法,测量抑菌环直径,（1）沉淀反应（precipitation）,可溶性抗原（细菌可溶性抗原、免疫球蛋白、细胞裂解物、组织浸液等）与相应抗体结合，形成不溶性免疫复合物，出现不透明的沉淀物。多在半固体琼脂凝胶上进行，形成白色的沉淀。可分为单向免疫扩散试验、双向免疫扩散试验、免疫电泳、免疫比浊法等。,病原菌的抗原检测,（2）协同凝集：用SPA测脑膜炎奈瑟菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌可溶性抗原作早期诊断。,（3）免疫荧光法：志贺菌荧光Ab,培养基+粪便标本 荧光球。,（4）酶免疫测定：ELISA测淋球菌、肠道菌抗原检测。,（5）PCR测细菌核酸,标本：,双份血清标本，恢复期血清中抗体效价比急性期血清中抗体效价升高4倍者方有意义,种类：,凝集试验：,肥达试验、外斐试验、显微镜凝集试验等,沉淀试验：,梅毒VDRL、RPR试验等,中和试验：,抗“O”试验等,补体结合试验：,Q热柯克斯体抗体检测等,血清学诊断（双份血清）,原理：,用已知的细菌或其特异性抗原检测患者体液中有无相应特异性抗体和其效价的动态变化，可作为某些传染病的辅助诊断。,补体结合试验：,诊断Q热；,中和试验：,诊断链球菌后风湿热的抗O试验,链球菌溶血素O+SRBC,溶血（毒性）,病人血清+链球菌溶血素O+SRBC,不溶血（中和）,ELISA:,间接法查病人血清中病原体抗体（HBV）；,双抗体夹心法测病原体抗原（HBV）。,一、人工主动免疫(artificial active immunization),1.疫苗:,（1）死,疫苗(killed vaccine),如白百破、伤寒、流脑、乙脑、流感、钩端螺旋体等。可激发体液免疫应答(HI)，安全、方便；但抗原性改变，效果差，需多次注射；反应重）。,（2）,活疫苗（living vaccine）,如,BCG、鼠疫、炭疽、脊髓灰质炎和麻疹疫苗等。可激发HI、CMI；,多由减毒病原菌制成；偶可发生回复突变，毒力回升，接种后发病。联合疫苗在试用中。,（3）基因工程疫苗：,目的基因 原核或真核细胞,基因产物 （如乙肝疫苗）,导入,第二节细菌感染的特异性预防,（4）重组载体疫苗：,蛋白质抗原基因 减毒的病毒或细菌,基因整合 基因产物 疫苗,（5）合成疫苗：,根据病原体抗原的氨基酸序列，合成的多肽可作为疫苗。如流感病毒和乙肝病毒的多肽疫苗。,缺点是免疫原性弱、只激发B细胞引起HI，因为抗病毒依赖CMI）。,转入,培养,表达,（6）亚单位疫苗：,除去病原体的核酸，提取其表面抗原制备的疫苗。如脑膜炎奈瑟菌和流感嗜血杆菌表面的特异性多糖+吸附剂制成疫苗（不含类脂、无毒）、流感疫苗、乙肝疫苗等，这种疫苗防止减毒活疫苗回复突变和肿瘤病毒潜在的致癌作用。,（7）DNA疫苗：,即基因疫苗或核酸疫苗（第三代疫苗），这种核酸既是载体又能在真核细胞中表达抗原，诱导产生细胞毒杀伤功能的T细胞，有效预防病毒、胞内寄生菌及寄生虫引起的传染。,（8）转基因植物疫苗：,将编码某一病原体保护性抗原的基因转入植物并在植物中表达，人们食用植物时，就完成了预防接种。如食用西红柿，获得乙肝疫苗的接种。,（9）治疗性疫苗：,葡萄球菌的自身疫苗治疗葡萄球菌的感染、乙肝疫苗治疗乙肝带毒者。可能的机制是前者是脱敏作用，后者是打破免疫耐受。,（10）类毒素：,细菌外毒素+0.3%,0.4%甲醛处理后 毒性消失,保留抗原性的生物制剂，如白百破疫苗.,1.抗毒素(antitoxin),2.抗菌血清（antisera）,3.丙球,4.其他免疫制剂（IFN-、IFN-、IL、CSF、LAK细胞）。,(二)人工被动免疫,（一）抗菌药物的种类,:,1.按生物来源分类：(细菌产多粘菌素和杆菌肽、真菌产青霉素和头孢菌素等、放线菌产链霉素和红霉素等）,2.按化学结构和性质分类：（抗菌药物的主要作用机制）,3.抗菌药物的主要作用机制,三、细菌感染的治疗,细菌胞质膜上有青霉素结合蛋白（penicillin binding proteins，PBP），PBP既是青霉素受体，又具有酶活性（转肽酶）。青霉素-内酰胺环的酰胺键打开，竞争性地与转肽酶结合，阻止了转肽酶在合成肽聚糖中的作用，而不能合成菌细胞壁，导致细菌死亡。,（1）影响细胞壁的合成,多粘菌素使类脂质膜的分子排列改变，胞膜被分层裂开，胞质外漏，细菌死亡；,两性霉素B可与真菌胞膜上固醇类结合，破坏膜结构而杀菌但对细菌无效（细菌无固醇成分）。,（2）影响细胞膜功能,（3）影响蛋白质合成,（4）影响核酸代谢的药物,
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