副溶血性弧菌检验

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,GB 4789.7-2013,副溶血性弧菌检验,一、概述,二、生物学特性,三、检测方法,副溶血性弧菌,Vibrio parahaemolyticus,于,1950,年从日本一次暴发性食物中毒中发现。,该菌存在于近海海水、海底沉积物和鱼类、贝壳等海产品中。在,37,、,pH7.7,、,3,4%NaCl,环境中生长最好。,一、概 述,概 述,本菌嗜盐畏酸怕冷，在无盐环境不能生长，,3%,6%,盐水繁殖迅速，低于,0.5%,或高于,10%,盐水中停止生长。对酸敏感，在,2%,醋酸或,50%,食醋中,1 min,即死亡。不耐热，,56,5 min,可杀死，,90,1 min,灭活。对高盐浓度抵抗力甚强。,5,以下容易死亡,。,分类,：属弧菌科,(Vibrio),，弧菌属。,分布,：主要存在于近海岸的海水、海底沉积物和鱼类、虾类、贝类、牡蛎等海产品中。,人多因食用被本菌污染而又未煮熟的海产品和其他食品而引起中毒。,流行病学,季节分布：,8-9,月为高峰期,中毒食品：主要为海产品、其次为水产制品、淹制品、咸菜及污染食品,地区分布：沿海地区居多,临床症状：主要有腹痛、腹泻、恶心、呕吐、发热,潜伏期：,10,小时左右,致病作用,主要引起,胃肠炎,，最常见的是食物中毒和感染性腹泻。由于病菌在食品中大量繁殖，侵入肠道后继续繁殖并释放出大量肠毒素，引起剧烈的胃肠炎。,二、生物学特性,-,菌体形态及染色特征,革兰氏,阴性杆菌,，无芽孢,0.30.7,26,m,两端浓染,呈多形态（棒状、弧状、球状、卵圆形等）排列不规则,液体培养基生长单鞭毛，固体培养基常有周生鞭毛（侧毛）,二、,生物学特性,-,培养特性,需氧兼性厌氧,在含,NaCl 3-4%,的培养基中生长良好,无盐和,NaCl 10%,的培养基中均,不生长,最适培养温度为：,30-37,最适,pH,范围：,pH7.4-pH8.2,在固体培养基上，菌落通常隆起，圆形半透明，表面光滑、湿润、一般不产生色素。,在血平板和嗜盐性平板上，菌落生长良好。,肉汤、琼脂、生化管都应含有,3-4%,的,NaCl,含量。,神奈川现象,(Kanagawa phenomenon,，,KP),-,在特定条件下，某些菌株在含高盐,(7,),的人,O,型血球或兔血球及以,D,甘露醇作为碳源的,我妻琼脂平板,上产生,溶血的现象,神奈川现象与本菌的,致病性密切相关,血清分型,O,抗原（耐热的菌体抗原）,O1-O13,共,13,种,K,抗原型（荚膜抗原）,K1-K71,共,65,种,H,抗原（鞭毛抗原），无特异性,三、检测程序,食品安全国家标准 副溶血性弧菌检验,GB 4789.7-2013,GB 4789.7-2013,1,、样品制备,食品样品,鱼类：表面组织、肠、鳃,贝类：全部内容物（贝肉和体液）,甲壳类：动物的中心部分，包括肠、鳃,水产制品,如为带壳贝类或甲壳类，应先在,自来水,中洗刷外壳并甩干表面水分，然后以无菌操作打开外壳，按上述要求取相应部分。,2,、增菌,-,3%,氯化钠碱性蛋白胨水,定性,-,取样品,25 g,（,mL,），加入,3%,氯化钠碱性蛋白胨水,225 mL,。,定量,-,选择,3,个适宜的连续稀释度，每个稀释度接种,3,支含有,9 mL 3,氯化钠碱性蛋白胨水的试管，每管接种,1 mL,。置,36,1,恒温箱内，培养,8 h,18 h,。,3,、分离,TCBS,平板、弧菌显色平板,对所有显示生长的增菌液，用接种环在距离液面以下,1 cm,内沾取一环增菌液，于,TCBS,平板,或,弧菌显色培养基,平板上划线分离。一支试管划线一块平板。于,36 1,培养,18 h,24 h,。,TCBS,平板上典型特征,典型的副溶血性弧菌 在,TCBS,上，呈圆形、半透明、表面光滑的,绿色菌落,。,TCBS,平板上典型特征,科玛嘉弧菌显色平板,-,紫色菌落,4,、纯培养,挑取,3,个或以上的可疑菌落，划线,3,氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂平板，,361,培养,18 h,24h,。,5,、初步鉴定,氧化酶试验,涂片镜检,3%,氯化钠三糖铁,嗜盐性试验,底层变黄不变黑，无气泡，斜面颜色不变，有动力,6、确定鉴定,甘露醇发酵试验,-,含,3%,氯化钠,的培养基,赖氨酸脱羧酶试验,V-P,试验,ONPG,试验,采用,3%,氯化钠三糖铁琼脂隔夜培养物进行,副溶血性弧菌：,甘露醇,+,赖氨酸脱羧酶,+,V-P -ONPG -,ONPG,试验,挑取,1,满环新鲜培养物接种于,0.25 mL 3%,氯化钠溶液，在通风橱中，滴加,1,滴甲苯，摇匀后置,37,水浴,5 min,。加,0.25 mL ONPG,溶液，,36,培养观察,24 h,。,阳性结果呈黄色。阴性结果则,24 h,不变色。,ONPG-,邻硝基酚,-D-,半乳糖苷,可选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统。,API 20E,7、选做试验,血清学分型,-,11,种,O,抗原血清,神奈川试验,-,我妻氏血琼脂平板,8、结果与报告,根据检出的可疑菌落生化性状，报告,25 g,（,mL,）样品中检出副溶血性弧菌。,如果进行定量检测，根据证实为副溶血性弧菌阳性的试管管数，查最可能数（,MPN,）检索表，报告每,g,（,mL,）副溶血性弧菌的,MPN,值。,Thank You!,