DNA重组技术的基本工具讲解课件

Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,DNA重组技术的基本工具,武陟一中 谢则华,烟草,中国卫生部通报：2004年月，狂犬病列法定报告传染病死亡数之首。发病死亡率近100%,能产生狂犬病抗体蛋白的转基因,每100kg 猪或牛的胰腺中仅可提取45g。,1979年，美国将人的胰岛素基因重组到大肠杆菌内，实现了细菌生产胰岛素，大大降低了生产成本，提高了胰岛素的供应量。,治疗糖尿病特效药,据WTO调查：2005年全世界约有糖尿病患者1.8亿人，我国约6000万。,胰岛素,基因工程的产物,定向基因改造设想,设想一,能否让禾本科的植物也能够固定空气中的氮？,能否让细菌“吐出”蚕丝？,设想二,能否让微生物产生出人的胰岛素、干扰素等珍贵的药物？,设想三,基因工程的概念,DNA重组技术,生物体外,基因,DNA分子水平,人类需要的新生物类型和产品,剪切,拼接,导入,表达,转基因技术实现了一种生物的某些性状,在另一种生物中表达。,普通棉花抗虫棉,问题探讨：,苏云金芽孢杆菌含有一种可以合成毒蛋白的基因。,让细菌的毒蛋白基因在棉花细胞中表达，可培育出抵抗棉铃虫害的抗虫棉。,想一想需要做哪些关键工作？,苏云金芽孢杆菌,毒蛋白,关键步骤：,一：,抗虫基因从苏云金芽孢杆菌细胞内提取出来,二：,抗虫基因与载体DNA、棉花DNA“缝合”,三：,抗虫基因进入棉花细胞,上述关键步骤需要哪些工具？,一：“分子手术刀”限制性核酸内切酶,二：“分子缝合针”DNA连接酶,三：“分子运输车”基因进入受体细胞的,载体,一、限制性核酸内切酶“分子手术刀”,1 主要来源：原核生物,2 种类与命名：,现在已经从约300种微生物中分离出了约4000种限制性内切酶(限制酶)。,粘质沙雷氏杆菌,（Serratia marcesens）,Sma,大肠杆菌,（Escherichia coli R）,EcoR,3 作用特点：,识别特定核苷酸序列,切断磷酸二酯键,具有特异性。,一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并且能在特定的切点上切割DNA分子,T,磷酸二酯键,1,2,3,4,5,1,2,3,4,5,A,Go back,限制酶的识别序列：,Go back,限制酶所识别的序列，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线（如图），中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向、对称、重复排列的。,想一想限制酶所识别的序列有什么特点？,5.作用结果：,产生黏性末端或平末端,Sma,平末端平末端,EcoR,黏性末端,黏性末端,Go back,EcoR,黏性末端,黏性末端,Go back,重复演示,二、“分子缝合针”DNA连接酶,作用:,把切下来的DNA片段拼接成新的DNA，即将脱氧核糖和磷酸连接起来.,作用原理：,催化磷酸二酯键形成,可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，,Ecoli DNA连接酶或T4DNA连接酶,即恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键,T4 DNA连接酶还可把平末端之间的缝隙“缝合”起来，但效率较低,T4DNA连接酶,常用的载体：质粒,能复制并带着插入的目的基因一起复制,有切割位点,有标记基因的存在，可用含氨苄青霉素的培养基鉴别,课下作业,1.整理、复习本节课的学习的内容；构建知识框架。,2.,做课后作业：思考与探究,。,