实时荧光PCR技术课件

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,精选ppt,*,教材分析,教法学法,教学过程,教学反思,教学效果,实时荧光PCR技术,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,精选ppt,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,精选ppt,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,精选ppt,*,实时荧光PCR技术,1,精选ppt,实时荧光PCR技术1精选ppt,临床基因扩增实验室技术人员再培训暨实验室技术人员上岗培训班,（2013年3月13日至16日）,汇报,2,精选ppt,临床基因扩增实验室技术人员再培训暨实验室技术人员上岗培训班,3,精选ppt,3精选ppt,课程安排,4,精选ppt,课程安排4精选ppt,分批实验,5,精选ppt,分批实验5精选ppt,PCR实验室的设计及质量管理,2,标本的采集、运送和保存,3,PCR的基本原理和方法,1,临床PCR检验仪器设备,4,PCR技术的检验项目,5,主要内容,6,精选ppt,PCR实验室的设计及质量管理2标本的采集、运送和保存3PCR,原理方法,设计管理,标本处理,仪器设备,检验项目,实时荧光PCR技术的基本原理,实时荧光PCR技术,实时荧光定量,PCR,技术：,利用,荧光信号,的变化实时检测,PCR,扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，通过,Ct,值,和,标准曲线,实现对,起始模板,的定量分析。,Real-time PCR,仪,ABI7500,7,精选ppt,原理方法设计管理标本处理仪器设备检验项目实时荧光PCR技术的,原理方法,设计管理,标本处理,仪器设备,检验项目,实时荧光PCR技术的常用方法,TaqMan,分子信标,蝎形探针,数 字,双杂交探针,双链DNA交联荧光染料,常用方法,实时荧光PCR技术,8,精选ppt,原理方法设计管理标本处理仪器设备检验项目实时荧光PCR技术的,原理方法,设计管理,标本处理,仪器设备,检验项目,实时荧光PCR技术的常用方法,实时荧光PCR技术,TaqMan,实时荧光定量,PCR,9,精选ppt,原理方法设计管理标本处理仪器设备检验项目实时荧光PCR技术的,原理方法,设计管理,标本处理,仪器设备,检验项目,实时荧光PCR技术的常用方法,实时荧光PCR技术,双链,DNA,（,dsDNA,）交联荧光染料实时荧光,PCR,10,精选ppt,原理方法设计管理标本处理仪器设备检验项目实时荧光PCR技术的,原理方法,设计管理,标本处理,仪器设备,检验项目,实时荧光PCR技术的常用方法,实时荧光PCR技术,分子信标实时荧光定量,PCR,11,精选ppt,原理方法设计管理标本处理仪器设备检验项目实时荧光PCR技术的,原理方法,设计管理,标本处理,仪器设备,检验项目,实时荧光PCR技术的常用方法,实时荧光PCR技术,双杂交探针实时荧光,PCR,12,精选ppt,原理方法设计管理标本处理仪器设备检验项目实时荧光PCR技术的,原理方法,设计管理,标本处理,仪器设备,检验项目,实时荧光PCR技术的常用方法,实时荧光PCR技术,蝎,形探针实时荧光,PCR,13,精选ppt,原理方法设计管理标本处理仪器设备检验项目实时荧光PCR技术的,原理方法,设计管理,标本处理,仪器设备,检验项目,实时荧光PCR技术的常用方法,实时荧光PCR技术,数字（,Digital,）实时荧光,PCR,14,精选ppt,原理方法设计管理标本处理仪器设备检验项目实时荧光PCR技术的,原理方法,设计管理,标本处理,仪器设备,检验项目,实验室认可预验收,3,Click to add title in here,2,Click to add title in here,2,实验室质量管理体系的建立,2,临床PCR实验室的标本接收及分区规划设计,1,实时荧光PCR技术,临床PCR实验室的设计及质量管理,15,精选ppt,原理方法设计管理标本处理仪器设备检验项目实验室认可预验收,原理方法,设计管理,标本处理,仪器设备,检验项目,应在,四个测定区域,之外的地方或区域内接收,接收的标本应收集在原始容器中,在核酸提取时带入至标本制备区,标本采集,血清分离,编号,保存或检测,一、标本接收要求,标本接收及分区规划设计,实时荧光PCR技术,16,精选ppt,原理方法设计管理标本处理仪器设备检验项目应在四个测定区域之外,原理方法,设计管理,标本处理,仪器设备,检验项目,什么样的PCR检验实验室是最标准的？,标本接收及分区规划设计,实时荧光PCR技术,17,精选ppt,原理方法设计管理标本处理仪器设备检验项目什么样的PCR检验实,原理方法,设计管理,标本处理,仪器设备,检验项目,在标本接收区分离血清（浆）标本,需要哪些设备呢？,标本接收及分区规划设计,实时荧光PCR技术,18,精选ppt,原理方法设计管理标本处理仪器设备检验项目在标本接收区分离血清,原理方法,设计管理,标本处理,仪器设备,检验项目,标本接收及分区规划设计,二、实验室分区设计原则及工作流程,一般,原则,因地制宜,各区独立,方便工作,注意风向,（理想的,PCR,实验室设计）,产物分析区,空气流向,空气流向,空气流向,空气流向,缓冲间,缓冲间,缓冲间,专用走廊,工作流向,扩增区,标本制备区,试剂准备区,实时荧光PCR技术,19,精选ppt,原理方法设计管理标本处理仪器设备检验项目标本接收及分区规划设,原理方法,设计管理,标本处理,仪器设备,检验项目,实验室质量管理体系的建立,实时荧光PCR技术,硬件,软件,人员,文件,资质、培训,质量手册,程序文件,SOP文件,记录,方法学,试剂的选择及评价,实验室设施及环境,实验室仪器,检测体系,20,精选ppt,原理方法设计管理标本处理仪器设备检验项目实验室质量管理体系的,原理方法,设计管理,标本处理,仪器设备,检验项目,实时荧光PCR技术,实验室认可预验收,提出申请,登记备案,接受审核,1,3,2,21,精选ppt,原理方法设计管理标本处理仪器设备检验项目实时荧光PCR技术,原理方法,设计管理,标本处理,仪器设备,检验项目,实时荧光PCR技术,22,精选ppt,原理方法设计管理标本处理仪器设备检验项目实时荧光PCR技术,原理方法,设计管理,标本处理,仪器设备,检验项目,实时荧光PCR技术,全国中等卫生职业教育卫生部“十一五”规划教材,养临床微生物检验的基础知识和实际操作能力,中等卫生校医学检验专业的专业课之一,临床检验的质量保证关键性环节,解决涉及实验室检验的医患纠纷的方法之一,临床标本的正确采集、运送、保存的重要性,23,精选ppt,原理方法设计管理标本处理仪器设备检验项目实时荧光PCR技术,原理方法,设计管理,标本处理,仪器设备,检验项目,实时荧光PCR技术,2,标本运送,1,标本采集,3,临床标本的处理和保存,24,精选ppt,原理方法设计管理标本处理仪器设备检验项目实时荧光PCR技术,原理方法,设计管理,标本处理,仪器设备,检验项目,实时荧光PCR技术,标本采集,1,标本采集时间对扩增检测结果的影响,2,标本采集部位的准备,3,标本的类型和采集量,5,采样及运输容器,4,采样质量的评价,6,标本采集中的防污染,25,精选ppt,原理方法设计管理标本处理仪器设备检验项目实时荧光PCR技术,原理方法,设计管理,标本处理,仪器设备,检验项目,实时荧光PCR技术,标本运送,样本一经采集，则应尽可能快的送至检测实验室。,样本中如加入了适当的稳定剂,如用于,RNA,测定加入,GITC,的血清,(,浆,),样本和用于,DNA,测定,EDTA,抗凝血等,则可在室温下运送或邮寄。,实验室应根据待测靶核酸的特性，对各种临床样本的运送条件作出相应的规定。,标本运送,26,精选ppt,原理方法设计管理标本处理仪器设备检验项目实时荧光PCR技术,原理方法,设计管理,标本处理,仪器设备,检验项目,实时荧光PCR技术,临床标本的处理和保存,常见,标本,血清,全血,PBMC,痰液,棉拭子,血清,脓液,乳汁,组织,27,精选ppt,原理方法设计管理标本处理仪器设备检验项目实时荧光PCR技术,原理方法,设计管理,标本处理,仪器设备,检验项目,加样器,核酸提取仪,扩增仪,测序仪,杂交仪,恒温干浴仪,冰箱,生物安全柜,离心机,28,精选ppt,原理方法设计管理标本处理仪器设备检验项目加样器核酸提取仪扩增,原理方法,设计管理,标本处理,仪器设备,检验项目,仪器设备的维护与校准,日维护,周维护,定期维护,专人负责,维护校准,实时荧光PCR技术,29,精选ppt,原理方法设计管理标本处理仪器设备检验项目仪器设备的维护与校准,原理方法,设计管理,标本处理,仪器设备,检验项目,基因扩增仪器设备的管理,实时荧光PCR技术,仪器设备,质控方法,频度,失控标准,扩增仪,仪器校验实验,当仪器移动时,实验失败,热电偶检测温度,扩增功能检测,每月一次,每4个月一次,如靶温度或温度差异超出允许范围,待测孔未出现扩增，检测温度,加样器,校准,每年2次,不符合要求,水浴箱,温度检测,每次实验,不符合要求,30,精选ppt,原理方法设计管理标本处理仪器设备检验项目基因扩增仪器设备的管,原理方法,设计管理,标本处理,仪器设备,检验项目,HAV,HBV,HCV,HIV,人乳头瘤病毒,巨细胞病毒,SARS-CoV,EB,病毒,流感病毒,沙眼衣原体,结核杆菌,淋病奈瑟菌,幽门螺杆菌,肺炎支原体,刚地弓形虫,解脲支原体,实时荧光PCR技术,31,精选ppt,原理方法设计管理标本处理仪器设备检验项目HAVHBVHCVH,实时荧光PCR技术,培训总结,32,精选ppt,实时荧光PCR技术 培训总结32精选ppt,实时荧光PCR技术,33,精选ppt,实时荧光PCR技术 33精选ppt,