生物制品分析概论资料课件

单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,第二十章 生物制品分析,制作人：沈阳药科大学 药学院,80K,药物分析 陈丹丹,131080102,第二十章 生物制品分析制作人：沈阳药科大学 药学院 80K药,生物制品的分类,1,生物制品的质量要求,2,鉴别试验,3,生物制品检查内容,4,目录,CONTENTS,第二十章 生物制品分析,生物制品的分类1生物制品的质量要求2鉴别试验3生物制品检查内,生物制品的分类,1,第一节,CONTENTS,第二十章 生物制品分析,生物制品的分类1第一节CONTENTS第二十章 生物制品分析,一、分类,生物制品（,Biological Products,）,是应用普通的或以基因工程、细胞工程、蛋白质工程、发酵工程等生物技术获得的微生物、细胞及各种动物和人源的组织和液体等生物材料制备，用于人类疾病预防、治疗和诊断的药品。,根据用途分为三类,1,）预防类：细菌类疫苗、病毒类疫苗、联合疫苗,2,）治疗类：抗毒素及免疫血清、血液制品、细胞因子及,DNA,重组技术制品和单克隆抗体,3,）诊断类：体内诊断类、体外诊断类,根据所用材料、制法或用途分为以下几类：,第二十章 生物制品分析,一、分类生物制品（Biological Products）第,指用病毒或立克次体接种于动物、鸡胚，或经组织培养后加以处理制造而成。,疫苗类药物,第二十章 生物制品分析,一、分类,抗毒素,：用细菌类毒素或毒素免疫马或其它大动物所取得的免疫血清；,抗菌或病毒血清,：用细菌或病毒本身免疫马或其他大动物所得免疫血清。,抗毒素及抗血清类药物,由健康人血浆或经特异免疫的人血浆，经分离、提纯或由重组,DNA,技术制成的血浆蛋白组分，以及血液细胞的有形成分。,血液制品,细胞因子类、生长因子类、激素类、酶类、疫苗类、诊断制品。,重组,DNA,制品,指用病毒或立克次体接种于动物、鸡胚，或经组织培养后加以处理制,由有关细菌、螺旋体或其衍生物制成的减毒活疫苗、灭活疫苗、重组,DNA,疫苗和亚单位疫苗等。,细菌类疫苗,由病毒、衣原体、立克次体,或其衍生物制成的减毒活疫苗、灭活疫苗、重组,DNA,疫苗和亚单位疫苗等。,病毒类疫苗,指两种或两种以上疫苗原液按特定比例配合制成的具有多种免疫原性的疫苗。,联合疫苗,由两个及以上同种但不同型（或群）抗原合并组成的含有双价或多价抗原成分的一种疫苗分别称。,双价及多价疫苗,第二十章 生物制品分析,疫苗类药物,指用病毒或立克次体接种于动物、鸡胚，或经组织培养后加以处理制造而成。,由有关细菌、螺旋体或其衍生物制成的减毒活疫苗、灭活疫苗、重组,生物制品的质量要求,2,第二节,CONTENTS,第二十章 生物制品分析,生物制品的质量要求2第二节CONTENTS第二十章 生物制品,安全性,01,有效性,02,可接受性,03,第二十章 生物制品分析,生物制品的质量要求,生物制品的质量标准有别于其他商品，强调其特殊性。,使用安全，副作用小,。,使用后能产生相应效力,。,制品的生产工艺、储存条件、成品的药效、稳定性、外观、包装、使用方法和价格可接受,。,安全性01有效性02可接受性03第二十章 生物制品分析生物制,鉴别试验,3,第三节,CONTENTS,第二十章 生物制品分析,鉴别试验3第三节CONTENTS第二十章 生物制品分析,免疫电泳法,02,免疫双扩散法,01,免疫斑点法,04,免疫印迹法,03,酶联免疫法,05,第二十章 生物制品分析,鉴别试验,免疫电泳法02免疫双扩散法01免疫斑点法04免疫印迹法03酶,免疫双扩散法,系在琼脂糖凝胶板上按一定距离打数个孔，在相邻两孔内分别加入抗原与抗体，若抗原、抗体互相对应，浓度、比例适当，则一定时间后、在抗原与抗体孔之间形成免疫复合物的沉淀线，以此对供试品的特异性进行检查。,ChP2010,收载的伤寒,Vi,多糖疫苗、狂犬病人免疫球蛋白和,人血白蛋白,等，均采用该法进行鉴别。,第二十章 生物制品分析,鉴别试验,免疫双扩散法系在琼脂糖凝胶板上按一定距离打数个孔，在相邻两孔,第二十章 生物制品分析,鉴别试验,免疫双扩散法,ChP,人血白蛋白的鉴别,1,）将完全溶胀的,1.5%,琼脂糖溶液倒于水平板上（每平方厘米加,0.19ml,琼脂糖），凝固后打孔，直径,3mm,，孔距,3mm,（方阵型）。,2,）中央孔加入抗血清，周边孔加入供试品溶液，并留一孔加入相应阳性对照血清。每孔加样,20,l,，然后置水平湿盒中，,37,水平扩散,24,小时。,3,）用生理氯化钠溶液充分浸泡琼脂糖胶板，以除去未结合蛋白。,4,）将浸泡好的,琼脂糖凝胶板放入,0.5%,氨基黑溶液中染色，用脱色液脱色至背景无色，,沉淀线呈清晰蓝色,为止。,应,仅与抗人血清或血浆产生沉淀线,，与抗马、抗猪、抗牛、抗羊,血清或血浆不产生沉淀线。,第二十章 生物制品分析鉴别试验免疫双扩散法ChP人血白蛋白的,免疫电泳法,系将供试品通过电泳分离成区带的各抗原，然后与相应的抗体进行双相免疫扩散，当两者比例合适时形成可见的沉淀弧。将沉淀弧与已知标准抗原、抗体生成的沉淀弧的位置和性状进行比较，即可分析供试品中的成分及其性质。,ChP2010,收载的人血白蛋白和,冻干人免疫球蛋白,等均采用该法进行鉴别。,第二十章 生物制品分析,鉴别试验,免疫电泳法系将供试品通过电泳分离成区带的各抗原，然后与相应的,第二十章 生物制品分析,鉴别试验,免疫电泳法,ChP,冻干人免疫球蛋白的鉴别,1,）将,1.5%,琼脂糖溶液倾倒于大小适宜的水平玻板上，厚度约,3mm,，静置，待凝胶凝固成无气泡的均匀薄层后，于,琼脂糖凝胶板负极,1/3,处的上下各打一孔，孔,径,3mm,，孔距,10-15mm,。,2,）测定孔加供试品溶液,10,l,和溴酚蓝指示液,1d,，对照孔加正常人血清或血浆,10,l,和溴酚蓝指示液,1d,。,3,）用三层滤纸搭桥和巴比妥缓冲液（电泳缓冲液）接触，,100V,恒压电泳月,2h,（指示剂迁移到前沿）。电泳结束后，在两孔之间距离两端月,3-5mm,处挖宽,3mm,槽，向槽中加入血清抗体或人血浆抗体，槽满但不溢出。放湿盒中,37,扩散,24,小时。,3,）用生理氯化钠溶液充分浸泡琼脂糖胶板，以除去未结合蛋白。,4,）将浸泡好的,琼脂糖凝胶板放入,0.5%,氨基黑溶液中染色，用脱色液脱色至背景无色。,与,正常人血清或血浆比较，主要,沉淀线应为,IgG,。,第二十章 生物制品分析鉴别试验免疫电泳法ChP冻干人免疫球蛋,免疫印迹法,系以供试品与特异性抗体结合后，抗体再与酶标抗体特异性结合，通过酶学反应的显色，对供试品的抗原特异性进行检查。,ChP2010,收载的重组人促红素注射液（,CHO,细胞）和注射用重组人干扰素,1b,等均采用该法进行鉴别。,第二十章 生物制品分析,鉴别试验,免疫印迹法系以供试品与特异性抗体结合后，抗体再与酶标抗体特异,免疫斑点法,所用原理同免疫印迹法，但具体操作有所不同。,以供试品与特异性抗体结合后抗体再与酶标抗体特异性结合，通过酶学反应的显色，对供试品的抗原特异性进行检查。,ChP2010,收载的,注射用重组人干扰素,2a,等，均采用该法进行鉴别。,第二十章 生物制品分析,鉴别试验,免疫斑点法所用原理同免疫印迹法，但具体操作有所不同。第二十章,酶联免疫法,ChP2010,规定,抗毒素和抗血清制品,鉴别试验采用酶联免疫法。,如动感乙型脑炎灭活疫苗（,Vero,细胞）、人用狂犬疫苗,（,Vero,细胞）和重组乙型肝炎疫苗（酿酒酵母）等,均采用该法进行鉴别。,第二十章 生物制品分析,鉴别试验,酶联免疫法ChP2010规定抗毒素和抗血清制品鉴别试验采用酶,生物制品检查内容,4,第四节,CONTENTS,第二十章 生物制品分析,生物制品检查内容4第四节CONTENTS第二十章 生物制品分,效力检定,浓度测定（含菌数或纯化抗原量）,活菌率或病毒滴定度测定,动物保护率试验,免疫抗体滴定度和稳定性试验,安全性,毒性试验,防腐剂试验,热原质试验,有关安全性的特殊试验,01,02,生物制品检查内容,第二十章 生物制品分析,效力检定安全性0102生物制品检查内容第二十章 生物制品分析,生物制品检查内容,第二十章 生物制品分析,物理性状的检查,蛋白质含量测定,防腐剂和灭活剂含量测定,纯度检查,相对分子质量或分子大小测定,其他：,水分含量测定、酸碱度和氯化钠测定,安全检查,生物制品的效力测定,杂质检查,生物制品检查内容第二十章 生物制品分析物理性状的检查,1.,外观,外观异常往往涉及制品的安全和效力问题；通过固定的,人工光源,进行目测。,2.,真空度及溶解速率,真空封口的冻干制品应测定真空度，瓶内应出现,蓝紫色辉光,，溶解速度应在规定时限以下。,3.,装量,通过,容量法,测试其实际装量不得少于标示量。,”,“,一、物理性状的检查,第二十章 生物制品分析,1.外观”“一、物理性状的检查第二十章 生物制品分析,1.,目的,检查有效成分，计算纯度和比活性。,2.,常用测定方法,凯氏定氮法,（钨酸沉淀法和三氯乙酸沉淀法）、,酚试剂法,（,Loery,法）和,双缩脲法,（紫外,-,可见分光光度法）等。,”,“,二、蛋白质含量测定,第二十章 生物制品分析,1.目的”“二、蛋白质含量测定第二十章 生物制品分析,生物制品在生产中为了,脱毒、灭火和防止活菌污染,，常加入适量本分、甲醛、氯仿和汞制剂等作为,防腐剂和灭活剂,。,对这些非有效成分，,ChP2010,中规定其含量应控制在一定限度内。,”,“,三、防腐剂和灭活剂含量测定,第二十章 生物制品分析,生物制品在生产中为了脱毒、灭火和防止活菌污染，常加入适量本分,生物制品在经过精制后，要检查纯度是否达到规定要求，常用电泳法和高效液相色谱法。,ChP,重组人促红素注射液（,CHO,细胞）纯度测定,1,）亲水硅胶体积排阻色谱柱：排阻极限,300kD,，孔径,24nm,，粒度,10,m,，直径,7.5mm,长,30cm,；,2,）流动相：,3.2mmol/L,磷酸氢二钠,-1.5mmol/L,磷酸二氢钾,-400.4,mmol/L,氯化钠，,pH7.3,；,3,）上样量：,20-100,g,；,4,）在波长,280nm,处检测，以人促红素色谱峰计算旳理论板数不低于,1500,。按面积归一化法计算,人促红素纯度，,不低于,98.0%,。,”,“,四、纯度检查,第二十章 生物制品分析,生物制品在经过精制后，要检查纯度是否达到规定要求，常用电泳法,对,提纯的蛋白质制品,如白蛋白、丙种球蛋白或抗毒素，在必要时需测定其单体、聚合体或裂解片段的,相对分子质量