微生物基础知识及无菌操作

微生物基础知识及无菌操作,目录,一、微生物概论,二、微生物的类群和形态结构,三、微生物的污染源及其污染途径,四、药品变质与微生物,五、消毒与灭菌,六、药品的卫生学评价,七、无菌操作,一、微生物概论,微生物（microorganism,microbe）是一类个体微小、结构简单，肉眼不可见或看不清楚的微小生物的统称。,微生物的特点：,个体微小，结构简单,:细胞大小以微米和纳米计量。,种类繁多、分布广泛,：一克沃土中含菌量高达几亿甚至几十亿,生长繁殖快，代谢能力强,：大肠杆菌（Escherichia coli）在适宜的条件下，每20分钟即繁殖一代，24小时即可繁殖72代。,遗传稳定性差，容易发生变异,：自发突变频率为10-6左右,微生物的分类,微生物的分类,非细胞生物,细胞生物,病毒、类病毒和朊病毒等。,原核类的细菌、放线菌、支原体、立克次氏体、衣原体和蓝细菌（过去称蓝藻或蓝绿藻）,真核类的真菌（酵母菌和霉菌）、原生动物和显微藻类,二、微生物的类群和形态结构,细菌（例：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌等）；,霉菌（毛霉属、根霉属、曲霉属、青霉属等）；,酵母菌（酵母属、假丝酵母属等）；,细菌,是一类细胞细而短（细胞直径约0.5m,0.5-5m）、结构简单、细胞壁坚韧以二等分裂方式繁殖和水生性较强的原核微生 物，分布广泛。,霉菌,是丝状真菌的俗称，意即发霉的真菌，它们往往能形成分枝繁茂的菌丝体，但又不象蘑菇那样产生大型的子实体。在潮湿温暖的地方，很多物品上长出一些肉眼可见的绒毛状、絮状或蛛网状的菌落，那就是霉菌。,构成霉菌营养体的基本单位是菌丝。,根据菌丝中是否存在隔膜，可把霉菌菌丝分成两种类型,霉菌的菌丝 上：无隔膜菌丝；下：有隔膜菌丝,霉菌菌丝的变态,吸器,假根,菌网和菌环,a.菌环；b.简单菌网；c.复杂菌网,酵母菌,是单细胞真核微生物。酵母菌细胞的形态通常有球形、卵圆形、腊肠形、椭圆形、柠檬形或藕节形等。比细菌的单细胞个体要大得多，一般为15微米530微米。酵母菌无鞭毛，不能游动。,酵母菌的细胞形态,三、微生物的污染源及其污染途径,微生物污染：因微生物产生、附着而给特定的环境带来的不良影响。如果细菌得到了必要的养料、一定量的水份和合适的温度，它们就能迅速繁殖，它们繁殖的速度快得惊人。通常一个细菌在仅仅2小时后可产生出281兆(百万)个的细菌。,传播污染的四大媒介,空气、水、表面、人,空气,每立方米的空气中至少含有60万颗尘粒，同时还存在着大量的微生物，在这样的空气条件下进行生产，肯定会污染药品。,措施：,1、对空气采取过滤-建立密闭厂房和空气净化系统,2、对空气消毒,水,微生物在纯水中是不能生长的。但是，所有的各类水，不管怎样仔细地蒸溜或过滤，总会含有一定量的可溶性有机物和盐类。正是这些可溶性的物质可被微生物利用作为它们生长的养料源泉。,水用于生产中，还用于设施、设备清洗中。,措施：用经过处理的水进行药品生产,表面,包括：天花板、墙壁、地面、设备、容器、工具或桌子；表面的尘埃微粒和微生物由空气传播的回降而受到污染。,请记住：一个表面看起来很干净，而实际上已经被千百万个微生物所污染，除非已经做了正确的消毒灭菌。,措施：消毒灭菌（常用方法喷洒化学消毒剂、紫外线照射）,人,人体是一个永不休止的污染媒介。,人的头发和皮肤：每分钟从人类皮肤中要散发出约10,000个微生物,嘴巴和鼻子水滴：呼吸、咳嗽和喷嚏将产生出大量水滴，这种水滴既含有尘粒污染也含有微生物污染。咳嗽一次的发菌量为70700个(min人)，喷嚏一次的发菌量为400060000个(min人).,衣着：洁净室内当工作人员穿无菌服时，静止时的发菌量为10300个/(min人)，躯体一般活动时的发菌量为1501000个(min人)，快步行走时的发菌量为9002500个(min人),化妆品和珠宝手饰：发胶、气雾除臭剂、眼脸膏、香粉等，为微生物污染提供了极好的源泉。耳环、戒指、项链、手链等首饰，因为它们难于清洗，所以可能成为感染源或污染源。,生产过程中的人为差错：当员工没有按照SOP进行工作时，车间的污染程度增加。,五勤,培养药品生产人员良好的个人卫生习惯，做到“五勤”,勤洗澡,勤理发,勤刮胡须,勤修剪指甲,勤换衣服,四、药品变质与微生物,营养丰富,微生物代谢产物,金属离子促进微生物生长,微生物污染的结果：,药品变质,；,服用了染致病菌的药物,患病,（,例如：可能污染大肠杆菌、沙门菌等致病菌的制剂会导致肠道传染病的发生和流行,）；,产生,内毒素、热原质,（,肌体发热，腹泻，出血性休克或其他组织损伤,）,五、消毒与灭菌,1、灭菌（Sterilization)杀灭物体中所有微生物（包括病原微生物和非病原微生物）的繁殖体和芽胞的方法。,2、消毒(Pisinfection)杀死病原微生物的方法。具有消毒作用的物质叫做消毒剂。一般消毒剂在常用浓度下，只对细菌的繁殖体有效，对于细菌芽胞是无杀灭作用的。,3、无菌(Aspsis)没有活的微生物存在的意思。,防止微生物进入机体或物体的方法叫无菌技术或无菌操作。,常用的除菌方法,物理灭菌法火焚、火焰灭菌法、干热灭菌法、高压蒸汽灭菌法、紫外线,化学灭菌法用化学药物进行灭菌的方法。,机械除菌法过滤除菌等。,物理灭菌法,火焚：被污染的纸张等,无经济价值,的物品可烧掉。,火焰灭菌法：接种环、金属器械等,耐燃烧,物品。,干热灭菌法：温度160-170，时间2小时。,高压蒸汽灭菌法：温度121，15min;121，30min或116，40min;（,普通培养基、生理盐水、耐热药品、玻璃制品、金属器材等,）。,紫外线：细菌检验室常用低压水银石英研制的紫外线照射灯作为室内空气消毒,物理灭菌法,高温杀菌原理：菌体中蛋白质包括酶类在内，过热后引起凝固变性，失去活性，使代谢发生障碍而引起菌体死亡。,特点；高压蒸汽灭菌法：通过加压提高蒸汽温度，其具有穿透力强、温度高、灭菌效果好的特点，是简便、经济、可靠、无毒的安全灭菌方法。,紫外线灭菌原理：,1、260nm波长辐射对细菌有杀灭作用。,2、产生微量臭氧也有一定杀菌作用。,特点,穿透力较弱，仅适用于物体表面、空气消毒。,使用时注意人员个人防护,化学灭菌法,常用消毒剂：乙醇、碘伏、甲醛、苯扎溴铵(新洁尔灭）、乳酸、氯和次氯酸盐,消毒剂杀菌原理：,1、酒精能使菌体蛋白质脱水变性，常用酒精杀菌浓度为70-75%。,2、氯的消毒作用，即是HCLO作用，HCLO是中性分子，可以扩散至带负电的细菌表面，并穿过细胞膜进入细胞内部，由于氯原子的氧化作用，破坏某些酶系统，最终致细菌死亡。,3、表面活性剂作用：破坏细胞膜，使蛋白质变性。,六、药品的卫生学评价,菌落（colony）,：单个（或聚集在一起的一团）微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞生长群体。,细菌、霉菌、酵母菌的菌落特征因种而异。可作为鉴定微生物种类的依据。,菌落单位,为CFU(Colony-Forming Units),菌落形态,细菌菌落常表现为湿润、粘稠、光滑、较透明、易挑取、质地均匀以及菌落正反面或边缘与中央部位颜色一致等。,酵母菌,由于霉菌的菌丝较粗而长，因而霉菌的菌落较大，有的霉菌的菌丝蔓延，没有局限性，其菌落可扩展到整个培养皿，有的种则有一定的局限性，直径12厘米或更小。菌落质地一般比放线菌疏松，外观干燥，不透明，呈现或紧或松的蛛网状、绒毛状或棉絮状；菌落与培养基的连接紧密，不易挑取；菌落正反面的颜色和边缘与中心的颜色常不一致。,各种曲霉的菌落,青霉的菌落,大多数酵母菌的菌落特征与细菌相似，但比细菌菌落大而厚，菌落表面光滑、湿润、粘稠，容易挑起，菌落质地均匀，正反面和边缘、中央部位的颜色都很均一，菌落多为乳白色，少数为红色，个别为黑色。,啤酒酵母的菌落,红酵母的菌落,各种酵母菌的菌落,评价药品的一般污染时采用,菌落单位CFU(Colony-Forming Units)（每克或每毫升）,表示。一方面可以判明药品被细菌污染的程度，以及生产单位所用的原料、工具设备、工艺流程、操作者的卫生状况。另一方面可以推测致病微生物存在的可能性。基本上呈现正相关。,评价药品微生物污染的指标菌是,大肠埃希氏菌,，来源于人和温血动物的粪便，检出该菌说明产品已被粪便污染，有可能存在其他肠道致病菌或寄生虫等病原体的危险。,口服片剂微生物限度,细菌数1000 cfu/g,霉菌和酵母菌数100 cfu/g,大肠埃希菌 不得检出/g,纯化水微生物限度,细菌数、霉菌和酵母菌100 cfu/mL,七、无菌操作,无菌(Aspsis)没有活的微生物存在的意思。,防止微生物进入机体或物体的方法叫无菌技术或无菌操作。,要求,1、操作前将界面上的细菌和病毒等微生物杀灭。,2、操作过程中是界面与外界隔离,避免微生物的侵入。,无菌操作原则,一、在执行无菌操作时，必须明确物品的无菌区和非无菌区。,二、执行无菌操作前，先戴帽子、口罩、洗手，并将手擦干，注意空气和环境清洁。,三、夹取无菌物品，必须使用无菌持物钳。无菌操作间,四、进行无菌操作时，凡未经消毒的手、臂、均不可直接接触无菌物品或超过无菌区取物。,五、无菌物品必须保存在无菌包或灭菌容器内，不可暴露在空气中过久。无菌物与非无菌物应分别放置。无菌包一经打开即不能视为绝对无菌，应尽早使用。凡已取出的无菌物品虽未使用也不可再放回无菌容器内。,六、无菌包应按消毒日期顺序放置在固定的柜橱内，并保持清洁干燥，与非灭菌包分开放置，并经常检查无菌包或容器是否过期，其中用物是否适量。,七、无菌盐水及酒精、新洁尔灭棉球罐每周消毒一次，容器内敷料如干棉球、纱布块等，不可装得过满，以免取用时碰在容器外面被污染。,无菌操作技术及注意事项,1、玻璃器皿的消毒和清洁,清洁:,一般试管或容器、细菌培养用的试管和培养皿、吸管洗涤剂浸泡洗刷,灭菌：,将玻璃器具中的培养皿、培养瓶、试管、吸管等按上述方法洗净烘干后，用一洁净纸包好瓶口并把吸管尾端塞上棉花，装入干净的铝盒或铁盒中，于160170的干燥箱中干燥灭菌2小时，取出备用。,2、保持工作区的无菌、清洁,在操作前2030分钟要先启动超净台和紫外灯，并认真洗手和消毒。在操作时，严禁喧哗，严禁用手直接拿无菌物品，如瓶塞等，而必须用消毒的镊子等。培养瓶应在超净台内操作，并且在开启和加盖瓶塞时需反复用酒精灯烧。对于吸管应先用手拿后1/3处，戴上胶皮乳头，并用酒精灯烧烤之后再吸液体。,常用消毒液及用途,0.1（0.3)新洁尔灭消毒液,用途：用于皮肤、工具、设备、容器、房间，具有地漏液封、清洁、消毒的作用。,3（5)来苏儿（甲酚皂)消毒液,用途：用于地漏的液封。,75乙醇溶液,用途：用于皮肤、工具、设备、容器、房间的消毒。,注：处理洁净室器具、设备等的消毒液应定期更换，以免产生耐药菌株，一周更换一次。,