免疫组化抗原修复简介

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,为何要进行抗原修复,抗原修复的种类,抗原修复的原理,抗原修复的操作,抗原操作的应用,为何要进行抗原修复,常规的石蜡切片的组织要经过福尔马林,固定,和石蜡,包埋,，虽然上述过程能良好的保存标本在光镜下的形态，但是会不同程度地破坏组织的抗原，降低组织的抗原与抗体的免疫反应率。,抗原修复的种类,热修复（,HIER,）,蛋白酶修复（,PIER,）,双修复（特殊抗原和双染）,不修复,抗原修复的原理,抗原修复目前常用的有热修复（,HIER,），蛋白酶修复（,PIER,）和不修复。不同的修复的原理不同。,热修复的原理,蛋白酶修复原理,热修复,(HIER),的原理,“,石说”：,固定通过改变蛋白结构降低免疫反应性，,AR,逆转大部分福尔马林导致的蛋白修饰，冷却后，会重建,“近天然”,的结构，免疫反应的恢复是通过蛋白表位的复性。,热修复的特点,易于施行,易于标准化,蛋白酶修复,(PIER),原理,蛋白酶的消化通过破坏福尔马林造成的蛋白交联，实现抗原的修复。,该方法的缺点是：破坏组织的完整性，会破坏抗原，,而且酶的浓度，反应时间，反应温度造成很大的差异，,标准化难度较大。,抗原修复的操作,热修复（,HIER,）,蛋白酶修复（,PIER,）,双重修复,热修复（,HIER,）,高压修复,煮沸法修复,微波修复,水浴加热,高压修复,切片先脱蜡水化,将修复液注入高压锅，将液体煮沸,放入切片（甩开水分）,盖上盖子，等喷气，计时,1.52,分钟（,800W1000W,）,冷却，冲洗玻片上的修复液,1.5-2min,10min,高压锅直接修复,高压锅隔水间接修复,煮沸法修复,将修复液注入不锈钢锅中,煮沸后，加入切片（甩干水分）,用保温档，处理,20,分钟左右,冷却，冲洗玻片上的修复液,蛋白酶修复（,PIER,）,切片脱蜡水化,切片上滴加酶，放入孵育盒，处理一定时间,时间到，取出切片，冲洗。,双重修复,脱蜡水化后，对切片进行胰酶消化,然后，对切片进行热修复,抗原操作的应用,时间,温度,冷却,细节,MOC31,（,上皮糖蛋白,-2,，,EGP-2),EGFR(,CLONE:EGFR.113,),HBcAg(,兔多抗,),C/H,NO,结论,正确的修复对抗体的表达十分重要,抗原修复是一个个性化的方法，由抗体的,克隆号，病理标本的类型,等决定。,合适,的修复方法才能获得,最佳的,修复效果。,谢谢！,