大肠菌群测定课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,GB4789.3-2010,大肠菌群测定,GB4789.3-2010 大肠菌群测定,GB4789.3-2010,大肠菌群测定,定义：大肠菌群：一群在,36,培养,48h,可发酵乳糖、产酸产气的需氧和,兼性厌氧革兰氏染色阴性,无芽孢杆菌。该菌主要来,源自人畜粪便，作为粪便,污染指标评价食品的卫生,状况，推断,食品中肠道致,病菌污染的可能。,2,GB4789.3-2010 大肠菌群测定定义：大肠菌群：一群,大肠菌群的食品卫生学意义,作为粪便污染食品的指标菌，,MPN,值愈低则说明食品受粪便污染程度及对人体健康危害程度愈低,作为肠道致病菌污染食品的指针，大肠菌群数量越多则肠道致病菌存在的可能性就越高，但两者之间并不总是呈平行关系,要求食品中大肠菌群完全不存,在是不可能的，重要的是其污,染程度，即菌量,3,大肠菌群的食品卫生学意义作为粪便污染食品的指标菌，MPN值愈,产气克雷白氏菌,ETEC,EIEC,阴沟肠杆菌,EHEC,大肠菌群,耐热大肠菌群（粪大肠菌群）,大肠杆菌,产气克雷白氏菌,大肠埃希氏菌,柠檬酸杆菌,O157,：,H7,大肠杆菌是人和温血动物肠道内普遍存在的细菌，是粪便中的主要菌种。一般生活在人大肠中并不致病，但它侵入人体一些部位时，可引起感染。,大肠菌群,并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致。一般认为可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。,总大肠菌群,系指一群在,37,培养,24,小时能发酵乳酸、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。,耐热大肠菌群,即粪大肠菌群，作为一种卫生指标菌，耐热大肠菌群中很可能含有粪源微生物，因此耐热大肠菌群的存在表明可能受到了粪便污染，可能存在大肠杆菌。但是，耐热大肠菌群的存在并不代表对人有什么直接的危害。,致病性大肠杆菌,能引起食物中毒。致病性菌株能侵入肠粘膜上皮细胞，具有痢疾杆菌样致病力。肠致病性大肠杆菌（,EPEC,）、肠毒素性大肠杆菌（,ETEC,）和肠侵袭性大肠杆菌（,EIEC,）等。,O157:H7,（,EHEC),肠出血性大肠杆菌，感染性腹泻是近年来新发现的危害严重的肠道传染病，已逐渐成为威胁人群健康的重要公共卫生问题。,大肠菌群、粪大肠菌群、大肠杆菌的从属关系,4,产气克雷白氏菌ETEC EIEC 阴沟肠杆菌EHEC 大肠菌,第一法 大肠菌群,MPN,计数法,初发酵：月桂基硫酸盐蛋白胨肉汤（,LST,）替代了乳糖胆盐发酵培基,确证实验：煌绿乳糖胆盐肉汤,（,BGLB,）替代了乳糖复发酵培,养基，取消了革兰氏染色实验,培养时间：由,24h,延长至,48h,单位：由,MPN/100g,变为,MPN/g,5,第一法 大肠菌群MPN计数法初发酵：月桂基硫酸盐蛋白胨肉汤（,第一法 大肠菌群,MPN,计数法,未接种的,LST,肉汤,未接种的乳糖胆盐肉汤,6,第一法 大肠菌群MPN计数法未接种的LST肉汤未接种的乳糖胆,第一法 大肠菌群,MPN,计数法,LST,肉汤,乳糖胆盐肉汤,7,第一法 大肠菌群MPN计数法LST肉汤乳糖胆盐肉汤7,大肠菌群计数检验流程,0,将产气的试管内样品接种到,BGLB,肉汤,LST,不产气（,-,）,小导管里无气泡,LST,产气（,+,）,8,大肠菌群计数检验流程0将产气的试管内样品接种到BGLB肉汤L,如何报告结果？,根据经确证后的对应浓度阳性管数查,MPN,表,MPN,：最可能数，基于泊松分布的一种间接计数方法,阳性管数,MPN,95%,可信限,0.10,0.01,0.001,下限,上限,0,0,0,1100,420,-,9,如何报告结果？根据经确证后的对应浓度阳性管数查MPN表阳性管,如何报告结果？,现国标的,MPN,表与原国标的,MPN,表的不同点：,1,现表里的数字是有小数点的，而原标准对小数点进行了四舍五入的处理。,2,现标准的,MPN,表比原标准的,MPN,表要简化一些。原标准,MPN,表有,64,个组合，而现标准,MPN,表只有,40,个组合。,3,报告单位不同。现报告单位为,g/ml,，而原报告单位是,100g/ml,。,10,如何报告结果？现国标的MPN表与原国标的MPN表的不同点：1,关于新国标大肠菌群,MPN,表的理解问题,新国标的,MPN,表的基准问题。,1,、新国标的,MPN,表采用了,3,个稀释度，分别是十倍百倍千倍，加样量是,3,管，每管,1,毫升，意味着加入样品的量为,0.333,克。,2,、在样品加入量为,0.333,克的情况下，使用新国标,MPN,表，得到,MPN/,克 的数值。,11,关于新国标大肠菌群MPN表的理解问题新国标的MPN表的基准问,关于新国标大肠菌群,MPN,表的理解问题,改变加样量的问题。,在实际操作中，因为一些原因需要改变加样量，一般是,10,倍增加或者降低，同样使用本表，得到的数值需要做,10,倍调整。,比如：,加样量为,3.33,克（这样的情况一般是十倍稀释液用,3,管，每管,10,毫升，需要用双料管。十倍百倍稀释液，各用三管，每管,1,毫升）。,12,关于新国标大肠菌群MPN表的理解问题改变加样量的问题。12,关于新国标大肠菌群,MPN,表的理解问题,改变加样量的问题。,这样查表得到的数值，应该降低,10,倍。,加样量为,3.33,克，阳性管为,2,1,0,，查表为,15,，这样的话，结果应该为,MPN 1.5/,克，或者,MPN 15/10,克，或者,MPN 150/100,克。,13,关于新国标大肠菌群MPN表的理解问题改变加样量的问题。13,关于新国标大肠菌群,MPN,表的理解问题,改变加样量的问题。,再比如：加样量为,0.0333,克（这样的情况是，不使用十倍稀释液，而使用百倍千倍万倍稀释液，各用三管，每管,1,毫升）。这样查表得到的数值，应该增高,10,倍。加样量为,0.0333,克，阳性管为,2,1,0,，查表为,15,，这样的话，结果应该为,MPN 150/,克，或者,MPN 1500/10,克，或者,MPN 15000/100,克。,14,关于新国标大肠菌群MPN表的理解问题改变加样量的问题。14,关于新国标大肠菌群,MPN,表的理解问题,关于和产品标准对应的问题。,大家应该注意到，这个问题其实是一个稀释度的选择问题。另外，这个问题也可以回答是否可以直接换算的问题。比如：某产品要求,MPN30/100,克。在这种情况下，我们如果使用加样量,0.333,，如果全部是阴性,0-0-0,，得到的结果为,3/,克，或者是,30/10,克，或者是,300/100,克。很明显，在这种加样量情况下是不能做出是否符合结果的判定的。,15,关于新国标大肠菌群MPN表的理解问题关于和产品标准对应的问题,关于新国标大肠菌群,MPN,表的理解问题,关于和产品标准对应的问题。,这样的话，就需要增加加样量，变成加样量为,3.33,克，如果全部是阴性,0-0-0,，得到结果为,0.3/,克，或者是,3/10,克，或者是,30/100,克。这样的结果才能符合要求。如果更精确的操作，应该是加样量为,33.3,克。这样如果全部是阴性,0-0-0,，得到,3/100,克，结果为,2-1-0,，得到,MPN 15/100,克，也是合格产品。,16,关于新国标大肠菌群MPN表的理解问题关于和产品标准对应的问题,关于新国标大肠菌群,MPN,表的理解问题,关于和产品标准对应的问题。,从这个意义上讲，稀释度的选择是根据产品要求进行的，理论上：如果要求得到每克产品菌群含量，加样量应该是,0.333,克比较合适。如果要求得到每,10,克产品菌群含量，加样量应该是,3.33,克比较合适。如果要求得到每,100,克产品菌群含量，加样量应该是,33.3,克比较合适。,17,关于新国标大肠菌群MPN表的理解问题关于和产品标准对应的问题,第二法 大肠菌群平板计数法,选择,30150,平板计数典型和可疑菌落,361 18h 24h,挑选,10,个菌落接种到,BGLB,典型菌落为紫红色周围有红色胆盐沉淀环，,0.5mm,18,第二法 大肠菌群平板计数法选择30150平板计数典型和可疑,第三法 大肠菌群,Petrifilm,TM,测试片法,19,第三法 大肠菌群PetrifilmTM测试片法19,结果判读,20,结果判读20,