全国妇幼课题HCY

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,1,全国妇幼保健协会,HCY,重大课题介绍,杭州中翰盛泰生物技术有限公司温州 医 科大 学 附 属 第 一 医 院,（同型半胱氨酸检测的质量保证方案）,陈晓东,该项目背景,品牌的优势,生化与方法,性能和特点,质量保证措施,2,一、项目的背景（一）,出生缺陷是我国政府亟待解决的,重大社会问题,出生死亡率在下降，但缺陷率在上升。,出生缺陷发生率大概在,5.6%,左右,每年新增,90,万，明显可见的,25,万,“人口与健康”目标：,15,亿,，,3%,？,HCY,和叶酸：,1%,的贡献,？,中国妇幼保健协会,HCY,课题的实施,3,项目的背景（二）,已证实叶酸代谢,与,出生缺陷相关,，,和孕期、围产期合并症,相关。但,发生,机理,并不是叶酸缺乏，而是和血液中,HCY,不能正常代谢,。,调查,HCY,相关影响因素，提出针对不同,HCY,水平和基因多态性妇女的围孕期,叶酸增补模式,并予以人群验证，建立起成体系的检测、干预、健康管理的标准和规范。,步骤：,张家港,6,（试点）,50100,家,1000,家,整省加入,覆盖全国,4,同型半胱氨酸具有,胚胎毒性,我国每隔,40,秒,钟就会有一个缺陷儿出生,出生缺陷病因复杂，机理未清，,出生后干预有心无力,孕期补充,叶酸,或含叶酸维生素复合剂,可,降低,胎儿出生缺陷发生率,同型半胱氨酸,妊娠与优生,5,高,HCY,血症对孕期的影响,近年发现，孕妇血浆中,HCY,水平升高可直接影响,宫内胎儿生长发育,，发生胎儿流产、胎儿生长受限、胎儿畸形、死胎、新生儿出生缺陷以及,一些妊娠相关疾病,(,如,PIH,、胎盘早剥、胎盘血管疾病,),，并可能与早产、低体重儿等密切相关。,6,目前已在,CFDA,注册产品,数据检索至国家食品药品监督局网站，截止,2015,年,2,月,3,日,二、中翰盛泰,HCY,品牌、性能优势,项目组为什么选用本公司,HCY,？,来自国际知名品牌,英国,Axis-Shield,8,JOIN,STAR,与英国,Axis-Shield,全面战略合作,9,HCY,循环酶法检测,专利使用现状,国内其它公司产品,雅培、罗氏、贝克曼的试剂（包括免疫法）都源自：,Axis-Shield,HCY,AXIS-SHIELD,HCY,:,专业专注,20,年,10,实行双品牌、同品质战略,英国,ASD,公司原装,进口,自产：专利许可，技术转让,同工艺，同原料，同标准,保证原装品质,11,Jacobsen DW,Ed.Robinson K,Homocysteine and Vascular Disease,2000,15-39,2,CH,CH,HOOC,2,CH,2,NH,SH,带有巯基的一个氨基酸,巯基有活性，可以进行氧化还原反应,不,存在,于饮食蛋白中,从蛋氨酸中形成,代谢依赖于叶酸和,B,族维生素,三、,HCY,的生化,与检测方法,胱氨酸,12,12,Du Vigneaud,1932,首次提出,Hcy,McCully,1969,首次在基因紊乱的患者中提出血管组织病理学，叫高胱氨酸尿症，提示高,Hcy,可能引起早期血管疾病。,美国哈佛,-1995,Wilcken,CVD,患者,Hcy,水平升高,通过补充维生素来纠正,Boushey,升高,5,mol/L,，在女性中的风险性增加,80%,，而男性,60%,Kilmer McCully,Du Vigneaud,Homocysteine,的,发现与应用,同型半胱氨酸的代谢,心脑血管疾病,糖尿病,肾病,中风,老年、血管性痴呆，,静脉栓塞,肿瘤,同型半胱氨酸升高,相关疾病,妊娠并发症几率增加：,习惯性流产、,先兆子痫、,早产、,新生儿体重低,新生儿缺陷，,神经管缺陷,高压液相层析,+,电泳,液相层析,+,质谱分析,高压液相,+,荧光,/,紫外,氨基酸分析仪,毛细管电泳,+,激光诱导荧光测定,酶免疫测定,荧光偏振酶免疫测定,双循环酶法,HCY,测定的方法学演变,两种酶法原理比较,总同型半胱氨酸,同型半胱氨酸,TCEP,S,-,腺苷,-,甲硫氨酸,S,-,腺苷,-,L,-,同型半胱氨酸,同型半胱氨酸甲基转移酶,S,-,腺苷,-,L,-,同型半胱氨酸水解酶,腺苷,NH,3,-,酮戊二酸,谷氨酸脱氢酶,NADH,NAD,谷氨酸,腺苷脱氨酶,1.,五步反应；,2.,共,7,种底物参与反应；,3.,反应需要,NH,3,的参与。,方法（一）谷氨酸脱氢酶法,方法（二）,乳酸脱氢酶法,总同型半胱氨酸,TCEP,丝氨酸,同型半胱氨酸,胱硫醚,CBS,CBL,NH,3,丙酮酸,NADH,NAD,乳酸,乳酸脱氢酶,1.Axis-Shield,公司专利；,2.,四步反应；,3.,共,5,种底物参与反应；,4.,无,NH,3,参与,。,（三）两种循环酶法,-,典型反应曲线,可测量区段少；,可使用测试模式少；,A1-A2,变化值,321,。,反应段接近直线，可使用测试模式多；,A1-A2,变化值,594,；灵敏度高；,线性可加大。,19,溯源性：,NIST SRM 1955,每盒产品中均包含校准液,与试剂一起注册,目前有很多国内厂家的,HCY,试剂不含校准液,（一）校准品的溯源性,四、本,HCY,试剂的方法性能优势,1.1,可溯源的参考物质,-,外部,有证参考物质,：美国国家标准与技术研究院,SRM 1955(,N,ational,I,nstitute of,S,tandards and,T,echnology,，,NIST SRM 1955,),三个浓度水平,：,Level 1:3.980.18 mol/L,Level 2:8.850.60 mol/L,Level 3:17.71.1 mol/L,用四种测量程序赋值,LC/MS,、,GC/MS,、,FPIA,、,LC-FD,。,1.2,可溯源的参考物质,-,内部,工作校准品,-,Axis-Shield,六个浓度水平。,内部质控品,（,QC Panels,）,来源于,Axis-Shield,，共,17,个。,产品校准品,-,来源于,Axis-Shield,两,个浓度,（,0mol/L,28mol/L,）,质控品,-,来源于,Axis-Shield,三,个,浓度,1.3,产品的量值溯源,ASD,LC/MS,NIST SRM 1955(,mol/L),工作校准品,HPLC,产品校准品,HCY,测定试剂,常规样本,检测结果,校准,赋值,程序,实施,NIST,ASD,ASD,ASD,JS,JS,客户,终端客户,终端客户,物质,ASD:Axis-Shield,JS :JoinStar,23,（二）适用性和稳定性,适用生化仪机型,（几乎所有）,上机稳定性：,30,天,校准稳定性：,30,天,视生化机型不同而略有差别,对,AU,系列的建议,24,（三）,有证质控品,英文名称：,HCY,Control Kit,注册证号：,国食药监械（进）字,2011,第,2402152,号,产品标准：,YZB/UK 2144-2011,生产厂家：,英国,Axis-Shield,Diagnostics Ltd.,规格：,FHCY200CN,：,低值：,11.5ml,中值：,11.5ml,高值：,11.5ml,定值质控品也可溯源到：,NIST SRM 1955,对质控品的应用建议,（四）本,HCY,试剂的方法性能,精密度（重复性）,准确度,1,（比对试验）,准确度,2,（抗干扰试验）,分析灵敏度（,LOB/LOD/FS,）,线性范围（可报告范围）,稳定性（上机、定标）,26,26,4.1,精密度,样本,试剂批号,均值,(mol/L),批内,CV%,Total CV%,1,组,1,7.0,1.9,3.3,2,7.0,2.2,4.4,2,组,1,36.0,1.3,2.5,2,35.5,1.1,2.3,3,组,1,48.3,1.1,2.0,2,47.7,1.0,2.2,低值质控,1,6.3,2.6,4.4,2,6.3,2.1,4.1,中值质控,1,12.3,1.5,3.0,2,12.2,1.3,3.2,高值质控,1,25.5,1.5,2.5,2,25.3,1.6,2.9,Olympus AU400,上建立的数据,4.2,准确性,用病人标本作,方法比对,(,来自省人民医院临床试验资料,),4.3,准确性,抗干扰,干扰物质,干扰物质浓度,干扰百分比,Bilirubin,20 mg/dL,+,10,Haemoglobin,500 mg/dL,+,10,Red Blood Cell,0.4%,+,10,Triglyceride,500 mg/dL,+,10,Glutathione,1000 mol/L,+,10,Methionine,800 mol/L,+,10,Cysteine,200 mol/L,+,10,Pyruvate,1250 mol/L,+,10,4.4,灵敏度,LOB,0.5,LOD,0.7,FS,：,样本浓度,1.0,左右,CV,约为,2%,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42,43,44,45,46,47,48,49,50,51,52,A,B,C,D,E,F,Sample,1,2,5,8,10,Day 1,0.9,0.8,0.6,0.7,0.5,Day 1,0.7,0.9,0.7,0.6,0.8,Day 1,0.8,0.9,0.7,1.1,0.6,Day 1,0.7,0.7,0.7,0.7,1.0,Day 1,0.8,0.9,0.6,0.8,1.0,Day 2,0.6,0.8,0.7,1.2,0.9,Day 2,1.0,0.9,0.9,0.8,0.5,Day 2,1.0,1.0,0.8,0.8,0.5,Day 2,0.9,1.0,0.7,0.8,1.1,Day 2,0.5,0.7,0.7,1.2,0.8,Day 3,0.8,0.8,0.7,0.8,0.7,Day 3,0.6,0.6,0.3,0.7,0.5,Day 3,0.8,0.8,0.4,0.5,0.8,Day 3,0.5,0.9,0.5,0.7,0.8,Day 3,0.9,0.8,0.7,0.9,0.9,Average,0.8,0.8,0.6,0.8,0.8,SD,0.1633,0.1113,0.1506,0.2042,0.2028,SD,2,0.0267,0.0124,0.0227,0.0417,0.0411,Cochrans DF N-1=14,0.2885,4.5,稀释线性,稀释线性：,1-50 mol/L,4.6,稳定性,试剂储存稳定性：,12,个月；,上机稳定性：,30,天；,校准曲线稳定性：,30,天；,上述稳定性数据为日立,7100,数据，,仪器及使用环境不同略有偏差,。,妇幼保健协会,HCY,课题准确实施,（同型半胱氨酸检测的质量保证方案）,32,五、如何保障：,33,三个层面：,保障结果准确性、一致性,英国,ASD,公司支持,公司室内质控，,参加卫生部室间质评,出厂批性能验证,(8,个指标,),工程师上门调试，,再次验证试剂性能,不定期动态检验,各省区代理商的支持,公司层面,统一操作手册,(SOP),统一质控品进行室内质控，要求客户做规范的室内质控,(L-J,质控图,+Wesgard,的,1,2,规则,),并每天进行数据上传,医院层面,各单位室内质控数据上传，观察,CV,值或失控原因,定期进行室间调查，一致性评价（每次,5,个浓度）同卫生部和上海临检中心的做法,专家咨询,项目组层面,网络信息贯穿,检验申请,患者准备,标本采集,标本运送,34,检验分析的全过程,分析前,分析中,分析后,标本处理,标本分析,质量控制,报告结果,审核发放,临床解释,投诉建议,信息反馈,各单位加强分析全过程质量控制,35,35,1,、质控图的定义,规范室内质控；,Levey-Jennings,质控图,共二个水平,36,36,建议：使用,Westgard,至少二个规则,（自己室