实验四血凝和血凝抑制试验

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验四,血凝和血凝抑制试验,（,Hemagglutination and Hemagglutination Inhibition,HA and HI,）,一、实验目的,二、实验原理,三、实验材料,四、实验步骤,五、结果判定,了解血凝和血凝抑制试验的原理。,了解血凝价和血凝单位的概念。,掌握血凝和血凝抑制试验的操作步骤和结果判定的方法。,一、实验目的,二、实验原理,（一）血凝试验（,HA,）,一些病毒能够促使动物如鸡、鹅、豚鼠和人的红细胞发生凝集，叫做,血凝试验,。,病毒凝集红细胞是一种较为普遍的现象，可以作为鉴定病毒的一个指标。,HA,试验的原理图,一层,RBC,均匀铺在孔底者为,+,；,基本同上，但边缘不整齐，有下坠倾向者为,+,；,RBC,在孔底形成一个环状，四周有小凝集块者为,+,；,RBC,在孔底形成一个小团，但边缘不光滑，四周有小凝集块为,+;,RBC,在孔底形成一个小团，边缘光滑，四周有似小凝集块者为,;,红细胞在孔底形成一个小团，边缘光滑，整齐者为,-,。,+-,血凝试验结果判定,1:2,1,1:2,2,1:2,3,1:2,4,1:2,5,1:2,6,1:2,7,1:2,8,1:2,9,1:2,10,C C,血凝价：,能使红细胞产生,50%,凝集的病毒最高稀释度。,（二）血凝抑制试验（,HI,）,当病毒悬液中加入特异性抗体时，这种红细胞凝集的现象就被抑制，称红细胞凝集抑制试验，即,血凝抑制试验,。,因此，可以用已知病毒来检测被检血清中的相应抗体，也可以用已知血清来鉴定未知病毒。,HA,试验的原理图,HI,试验的原理图,三、实验材料,鸡新城疫病毒：鸡新城疫弱毒株（,Lasota,）接种鸡胚、收获尿囊液制备。,鸡红细胞：采集健康鸡血液，以阿氏液抗凝，以生理盐水洗涤,35,次，将血浆、白细胞等充分洗去，用生理盐水配置成,1%,红细胞悬液使用。,0.85%,生理盐水。,被检血清，采自被检鸡的健康血清,。,四、实验步骤,（一）血凝试验（,HA,）,在血凝板第一排的,112,孔加入,50l,生理盐水。,在第,1,孔中加入,50l,病毒抗原，反复吸取混匀后吸,50l,到第,2,孔，如此,倍比稀释,直到第,10,孔，混匀后弃,50l,；最后两孔（,11,、,12,）为红细胞对照。,将,1%,的红细胞,轻轻摇动混匀,，在,112,孔中每孔加入,50l,。,手工震荡，,37,静置,2530min,后观察结果。,病毒液的血凝价是,1:2,？,。,血凝价：,能使红细胞产生,50%,凝集的病毒最高稀释度。,（二）血凝抑制试验（,HI,）,在血凝板的,111,孔加入,25l,生理盐水，最后一孔（,12,孔）加,50l,。,第,1,孔加待检血清,25l,，混匀后吸,25l,至第,2,孔，倍比稀释直至第,10,孔，混匀后弃,25l,。,从,111,孔，每空加稀释好的,25l,4,个血凝单位,的病毒悬液,。,37,静置,2530min,如果血凝价为,1:2,8,，那么,4,个血凝单位就是,1:2,6,第,11,、,12,孔不加,第,12,孔不加,血凝价：,能使红细胞产生,50%,凝集的病毒最高稀释度。,1,个血凝单位：,能使,50%,的红细胞发生凝集的病毒悬液。,病毒浓度,1:2,1,1:2,2,1:2,3,1:2,4,1:2,5,1:2,6,1:2,7,1:2,8,1:2,9,1:2,10,C C,将,1%,的红细胞轻轻摇动混匀，在,112,孔中每孔加入,50l,。,手工震荡，在,37,静置,2530min,后观察结果。,结果判定：以红细胞凝集,100%,的抑制作为结果判定的终点。,血凝抑制价是,1:,2,？,，被检血清为阴,/,阳性。,1:2,4,为阳性,1:2,2,为阴性,1:2,3,为可疑,血凝抑制价,第,11,孔为病毒对照，应该完全凝集，第,12,孔为细胞对照，应该完全沉积到孔底。,HA,HI,细胞对照,五、结果判定,血凝价是,1,：？；,血凝抑制价是,1,：？；,被检血清为阴性还是阳性,?,