临床基因扩增实验室质量管理体系的建立

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2022/11/21,#,临床基因扩增实验室,质量管理体系的建立,2013.10.21,Contents,PCR,技术介绍；,质量管理体系的建立；,质量保证；,质控规则；,PCR,技术,高温,Target Sequence,Target Sequence,较低温度,Primer 1,Primer 2,Target Sequence,最适温度,1,2,3,实时荧光定量,PCR,模板起始,浓度越高,，荧光信号强度达到域值所需的循环数越少，即,Ct,值越小,。,荧光值,未知浓度样本,循环数,n,循环数,n,荧光值,已知浓度系列标准品,模板起始浓度的,常用对数,与,Ct,值呈,负线性关系,。,log,起始浓度,C,t,值,标准曲线,无基因无核酸的重要性,严格分区（一区二区三区）；,开窗通风；,用次氯酸钠擦洗地面和台面，甚至墙面；,增长紫外照射的时间；,用,75%,乙醇空中喷雾；,实验前的处理程序和实验后的处理程序；,核酸污染的来源,临床标本中存在的大量待测微生物,科研中得到的质粒克隆,以前分析研究的特定微生物,大量存在于实验环境中的特定微生物,以前扩增产物的残留污染。这也是,PCR,实验室最容易产生的,，将造成假阳性的“污染”。,Next,质量体系文件的编写,基本原则：最有效,+,符合实际；,三大特性：,法规性：一旦批准必须认真执行；,唯一性：一个检验活动只能有唯一的操作程序；,适用性：要符合实际，具有可操作性；,SOP,包含的内容：,5W+1H,；,SOP,呈现方式：图片,+,文字；,PCR,实验室的质量体系文件,检测项目的性能验证；,项目检测的,SOP;,仪器和设备的操作,SOP,；,仪器和设备的维护,SOP,；,人员的技术档案；,各种记录表格；,表格记录,仪器设备的维护校准,SOP,日维护,周维护,定期维护,剂量单位校准,厂家校准,人员的技术档案记录,一人一个档案；,个人基本情况；,培训证和上岗证；,论文、著作、成果等；,培训考核记录等；,仪器设备的技术档案,一台仪器一个档案；,仪器的基本情况；,仪器的使用说明书；,仪器校准的记录；,维修维护的记录等；,Next,室内质量控制,由实验室工作人员采取一定的方法和步骤，连续评价本实验室工作的,可靠性程度,；旨在监测和控制本实验室工作的,精密度,，提高本实验室常规工作中批内和批间样本检验的一致性，以确定测定工作的结果是否可靠、可否发出报告的一项工作；,改善测定精密度的措施必须首先着重在最不精密的步骤上，即对试剂准备、标本采集、核酸提取、测定方法和仪器操作写出并严格执行“标准操作程序（,SOP,）”。,室内质量控制,标本采集、运送和保存中的关键点,:,容器,密闭、一次性、无菌、无核酸酶及扩增抑制物；,采集方法,人员训练有素、防污染、保存时间和温度；,合格标本,容器完整、量够、时间符合要求、外观符合要求、要猜到病原体等；,第,49-51,页,为客观比较一个实验室的测定,结果与靶值的差异,，由外单位机构，采取一定的办法，连续和客观地评价实验室的测定结果，发现误差并校正结果，使各实验室之间的结果具有可比性，这是对实验室操作和实验方法的,回顾性评价,，而不是用来决定在实时的测定结果的可接受性。,室间质量评价,室间质评的档案袋,申请表；,接收记录；,保存记录；,实验记录；,结果上报表；,结果汇报表；,分析和改进内容；,Next,质控规则,质控规则的功能：判断测定批的失控还是在控；,失控处理：,查出原因；,采取措施；,保证消除；,不再出现；,纳入标准；,防止同样的问题出现第二次是质量管理的“,精髓,”。,符 号,定 义,1,2S,一个质控测定值超出,2s,控制限。,1,3S,一个质控测定值超出,3s,控制限。,2,2S,两个连续的质控测定值同时超出,+2s,或,2s,控制限。,R,4S,同一批测定中，两个不同浓度质控物的测定值之间的,差值超出,4s,控制限。,4,1S,四个连续的质控测定值同时超出,+1s,或,1s,控制限。,7,T,七个连续的质控测定值呈现一个向上或向下的趋势变,化。,10,X,十个连续的质控测定值同时处于均值的同一侧。,质控规则的符号及其定义,“即刻法”和,Levey-Jennings,质控图法,“即刻法”的实质是一种统计学方法，即,Grubs,异常值取舍法；只要有,3,个以上的数据即可决定是否有异常值的存在。,Levey-Jennings,质控图法：稳定条件下，,20,个室内质控结果不应有多于,1,个结果超过,2SD,限度；在,1000,个测定结果中超过,3SD,的结果不多于,3,个。,质控方法,“即刻法”,在刚开始进行质控时，可以采用“即刻法”进行质控，当日常有效测定次数超过,20,次时，转入使用,Levey-Jennings,质控图结合,Westgard,多规则质控的方法进行质控。,Levey-Jennings,质控图,Thank you,！,The end.,