液相分离条件选择

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,16:17:23,#,19:45:14,第,十,章液相色谱分析法,一、,影响分离的因素,factors influenced separation,二、分离类型的选择,choice of separation types,三、液相色谱的应用,application of HPLC,四、液相制备色谱,preparative liquid chromatography,第四节影响分离的因素与操作条件的选择,high performance liquid chromatograph,factors influenced separation and choice of operation condition,19:45:14,一、,影响分离的因素,factors influenced separation,1.影响分离的因素与提高柱效的途径,在高效液相色谱中,液体的扩散系数仅为气体的万分之一，则速率方程中的分子扩散项,B/U,较小，可以忽略不计，即：,H=A+C u,故液相色谱,H-u,曲线与气相色谱的形状不同，如图所示。,19:45:14,液体的黏度比气体大一百倍，密度为气体的一千倍，故降低传质阻力是提高柱效主要途径。,由速率方程，降低固定相粒度可提高柱效。,液相色谱中，不可能通过增加柱温来改善传质。恒温,改变淋洗液组成、极性是改善分离的最直接的因素。,19:45:14,2.流速,流速大于0.5,cm/s,时,H,u,曲线是一段斜率不大的直线。降低流速，柱效提高不是很大。但在实际操作中，流量仍是一个调整分离度和出峰时间的重要可选择参数。,3.固定相及分离柱,气相色谱中的固定液原则上都可以用于液相色谱，其选用原则与气相色谱一样。但在高效液相色谱中，分离柱的制备是一项技术要求非常高的工作，一般很少自行制备。,19:45:14,二、分离类型选择,choice of separation types,19:45:14,三、,HPLC,的,应用,application of HPLC,1.环境中有机氯农药残留量分析,固定相,：,薄壳型硅胶(37,50,m),流动相：正己烷,流 速：1.5,mL/min,色谱柱：50,cm,2.5mm(,内径),检测器：差示折光检测器,可对水果、蔬菜中的农药残留量进行分析。,19:45:14,2.稠环芳烃的分析,稠环芳烃多为致癌物质。,固定相,：,十八烷基硅烷化键合相,流动相：20%甲醇,-,水 100%甲醇,线性梯度淋洗，2%/,min,流 速：1,mL/min,柱 温：50,C,柱 压：70,10,4,Pa,检测器：紫外检测器,19:45:14,四、制备型液相色谱,preparative liquid chromatography,获得高纯物质（色谱纯）的有效方法。,半制备柱（内径8,mm，,长度15 30,cm），,一次制备量.1,mg；,1.,色谱柱的柱容量（柱负荷）,对分析柱：,不影响柱效时的最大进样量；,对制备柱：,不影响收集物纯度时的最大进样量；,超载：,进样量超过柱容量。柱效迅速下降，峰变宽。,超载可提高制备效率，以柱效下降一半或容量因子,k,降低10%为宜。,19:45:14,2.液相制备色谱的方法,收集组分时，通常有以下情况：,（1）可获得良好分离，主峰,使用制备柱，超载提高效率；,（2）两主成分之间的小组分；超载，分离切分使待分离组分成为主成分（富集）后，再次分离制备。,19:45:14,3.制备型液相色谱,制备型液相色谱,：结构与分析型一样，但泵流量大、进样量大、采用制备柱；柱后馏分收集器。,制备柱,：内径2050,mm，,柱长50,cm。,19:45:14,请选择内容,第一节 高效液相色谱的特点与仪器,feature and instrument of HPLC,第二节 基本原理与主要分离类型,basic principle and main separating types,第三节 固定相与流动相,stationary phase and mobile phase,第四节 影响分离的因素与操作条件选择,factors influenced separation and choice of operation condition,第五节 离子色谱法,ion chromatograph,第六节 超临界流体色谱,supercritical fluid chromatograph,结束,