细菌涂片制备及染色

,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,浙江工商大学环境科学与工程学院,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,LOGO,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,LOGO,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验二 细菌的涂片及染色,目的要求,染色剂及染色原理,实验材料,实验步骤,思考题,本次实验内容,一、目的要求,学习细菌涂片的基本技术,掌握细菌的简单染色和革兰氏染色法,二、微生物染色的基本原理,借助物理和化学因素的作用而进行,1,、,物理因素,如：细胞及细胞物质对染料的毛细现象、渗透、吸附作用等。,2,、,化学因素,如：正负离子之间的相互吸引等,染色剂，按其电离后所带电荷的性质分：,1,、酸性染料,酸性复红、刚果红、伊红、藻红、苯胺黑,2,、碱性染料,碱性复红、中性红、孔雀绿、番红、结晶紫、美兰、甲基紫等，细菌易被碱性染料染色,3,、中性染料：,伊红、美兰等，,Wright,染料和,Gimsa,染料等（常用于细胞核染色）,4,、单纯染色：,这类染料的化学亲和力低，大多是偶氮化合物，不溶于水，但溶于脂肪溶剂中，如苏丹类的染料。,三、实验材料,菌种,牙垢细菌；大肠杆菌,24 h,培养液；,枯草杆菌,12 h,培养液,载玻片,、接种环、镊子、酒精灯、染色液、火柴,显微镜,、吸水纸、酒精乙醚溶剂,四、实验步骤,(,一,),细菌染色方法,1,单染色法：用一种染色液染菌体后，就可以观察微生物的大小、形状、和细胞排列状况，但不能鉴别微生物及它的特殊构造,2,复染色法：用两种或两种以上染色液进行，常用：革兰氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、鞭毛染色法、细胞染色法等,染色技术：涂片,干燥,固定,染色,媒染,脱色,复染,水洗,干燥,镜检,四、实验步骤,(,二,),牙垢细菌单染色法,菌种：牙垢细菌,涂片,干燥：自然气干或酒精灯高处微微加热,固定,染色：在整个涂面上滴加石碳酸复红，染色,1 min,水洗：倾去染液，用自来水细流冲洗至流下水中无染料颜色为止,干燥：空气中自然干燥,镜检：在油镜下观察牙垢中的各种细菌形态并绘图,示范照片,简单染色视频,四、实验步骤,(,三,),革兰氏染色法,革兰氏染色是,Gram,发明的一种细菌鉴别染色法，通过染色，可将细菌分为两大类：一类被染成紫色，称为革兰氏阳性细菌，另一类被染成红色，称为革兰氏阴性细菌。这种染色的结果主要与细菌的细胞壁结构和化学组成有关。,步骤,涂片,初染,：在做好的涂面上滴加草酸铵结晶紫染液，染,1 min,，倾去染液，流水冲洗至无紫色媒染：先用新配的碘液冲去残水，而后用其覆盖涂面,1 min,，后水洗,脱色,：除去残水后，滴加,95%,酒精进行脱色约,30 sec,，后立即用流水冲洗,复染,：滴加番红染色液，染,1 min,，水洗后用吸水纸吸干,镜检,：观察染色结果并绘图,革兰氏染色视频,思考题,要得到正确的革兰氏染色结果必须注意哪些操作？,注意事项,革兰氏染色成败与否与许多因素有关,菌龄,涂片厚薄,脱色时间（最为关键）,