医学微生物学实验二抗酸染

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,医学微生物学实验二,微生物学教研室：3029130 科教科：3029945,实验内容,1.实验一结果的观察和分析；,2.细菌内毒素的检测技术；,3.抗酸染色；,4.实验考试。,一、实验一结果的观察和分析,空气中细菌,咽喉部细菌,二、内毒素的检测技术（鲎试验）,1.内毒素检测方法,家兔发热法，鲎试验。,2.鲎试验原理,3.材料,鲎试剂，内毒素试剂，鲎试剂专用溶解水，无菌无热源质吸管,内毒素（LPS）,激 活,凝固蛋白原 凝固蛋白,（溶解状态）,（凝胶状态）,凝固酶原,凝固酶,4.方法步骤,（每4个人一组，两支鲎试剂，一支实验一支对照）,（1）取两支鲎试剂打开，分别加入0.1ml 鲎试剂,溶解水，使之溶解。,（2）其中一支加入0.1ml内毒素，标记上实验组，,另一支加入0.1ml溶解水，作为对照。,（3）垂直放入37温箱，20-30min观察结果。,5.结果及应用,实验组出现凝固，对照组不出现凝固,三、抗 酸 染 色,Acid fast stain,（一）实验目的,1.掌握分枝杆菌抗酸染色的操作方法和意义。,2.熟悉抗酸染色的原理。,（二）实验原理,分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，主要是分枝菌酸，它包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促使其着色，同时分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色。,齐-尼氏抗酸染色法,是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸复红牢固结合成复合物，用3%盐酸酒精处理也不脱色。当再加碱性美兰复染后，分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背景中的物质为兰色。,1.细菌：,卡介苗（BCG）。,2.抗酸染液：,石炭酸复红液、3%盐酸酒精、碱,性美兰溶液。,3.其它：,接种环、酒精灯、载玻片，玻片夹等。,（三）实验材料,（四）方法与步骤,1.细菌涂片的制备,涂片 干燥 固定,2.染色,1）初染：用玻片夹夹持涂片标本，滴加,石炭酸复红2,3 滴,，在火焰高处（2,10cm）徐徐加热，,切勿沸腾,，,出现蒸汽即暂时离开,，,加热3,5min,，若染液蒸发减少，应再加染液，以免干涸，,待标本冷却后用水冲洗,。,2）脱色：,3%盐酸酒精脱色30s,1min,；用水冲洗。,3）复染：用,碱性美兰溶液复染1min,；用水冲洗。,4）玻片用吸水纸吸干，油镜观察。,（五）实验结果,未染色,初染后 脱色后 复染后,初染,脱色,复染,石炭酸复红,盐酸酒精,碱性美兰,红色为抗酸染色阳性；蓝色为抗酸染色阴性。,结核杆菌呈红色，常堆积成团，排列无序，偶呈分枝状生长；背景及非抗酸性细菌呈兰色。,（六）注意事项,1.无菌操作；,2.染色要充分，掌握好时间；,3.初染时加热勿使染液沸腾，干涸。,实验报告,1.内毒素的检测（鲎试验）原理，材料，方法及结果。,2.抗酸染色的原理，材料，方法和结果（画图）。,实验考试,