高效液相色谱分析方法开发

Quality Control of HPLC Columns,Mastertextformat bearbeiten,Zweite Ebene,Dritte Ebene,Quality Control of HPLC Columns Vierte Ebene,Fnfte Ebene,探索色谱新领域，默克与您共同努力！,2002-9,分析方法开发三步骤,HPLC,分析方法开发,选择合适的色谱柱(固定相)和流动,相，得到合理的保留时间,调整选择性以及各个色谱峰的分离度,调整流速、填料粒径、色谱柱规格(长度及内径)以获得最佳的分离,开发分析方法的规则,合适的保留因子,k,(,k,值1-20,),是获得满意分离的基础,保留因子,k=(,t,R,-,t,M,)/,t,M,用以下“秘诀”可以使您的开发过程更加简便、快速,揭秘,-,选择合适的起始条件,不同的样品不同的思路,中性化合物无需调整流动相的,pH值；而对于含有带电基团的,化合物，则需要用缓冲溶液调整流动相的pH值；有时需要,采用离子对反相色谱,选用通用的色谱柱,一般直接选用,C18(,或C8,) 5um 12.5, 15, 25cm,长的色谱柱,选择流动相,甲醇/水或乙腈/水(依据个人习惯而定),流动相的调整“秘诀,”,秘诀1 由强到弱,一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或缓冲溶液)进行试验，,这样可以很快地得到分离结果，然后根据出峰情况调,整有机溶剂(乙腈或甲醇)的比例。,流动相的调整“秘诀”,秘诀2 三倍规则,每减少10%的有机溶剂(甲醇或乙腈)的量，,保留因子约增加3倍，此为三倍规则。这是,一个聪明而又省力的办法。调整的过程中，,注意观察各个峰的分离情况。,秘诀3 粗调转微调,当分离达到一定程度，应将有机溶剂,10%的改变量调整为5%，并据此规则,逐渐降低调整率，直至各组分的分离,情况不再改变。,流动相的调整“秘诀”,流动相的调整“秘诀”,秘诀4 更换流动相的组成,在第三步，我们已经基本上得到了一个合适的,保留因子，如果还有一些组分的分离情况不好，,则应考虑更换流动相的组成(如有机溶剂类型的,改变、,pH,值的改变或是加入离子对试剂，等等,)，,或者，索性改变固定相的类型。,色谱柱的调整,根据操作压力、出峰时间、分离度,来调节色谱柱的长度、粒径以及,流动相流速,，,从而,获得最佳的分离,最后,