循环免疫复合物测定

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验,三 循环免疫复合物测定,目的,1.,掌握循环免疫复合物测定原理,2.,熟悉循环免疫复合物检测的临床意义,免疫复合物,(immune complex,，,IC),抗原抗体复合物，在正常情况下，机体防御系统作为清除异物抗原的一种方式，清除体内免疫复合物对机体有利。,原理,在某些情况下，体内形成的免疫复合物不能被及时清除，沉积在机体某一部位称为局部免疫复合物，游离于体液中称为可溶性免疫复合物，随血液循环的免疫复合物称循环免疫复合物,(circulating immune complex,，,CIC),。免疫复合物沉积可引起多种疾病。,原理,聚乙二醇比浊法,聚乙二醇,(polyethyleneglycol,，,PEG),是非离子型亲水剂，为乙二醇的聚合物。分子式,HO(CH,2,CHO),n,H,，有较强脱水作用，破坏蛋白质表面的水化层和电子云，用于沉淀蛋白质，沉淀具有选择性。,在,pH,、离子强度等条件固定时，蛋白质分子量越大，用以沉淀的,PEG,浓度越小。血清中加入终浓度为,3,5,的聚乙二醇，能相对选择性地沉淀免疫复合物。,PEG,还可抑制,CIC,解离，促进,CIC,进一步聚合成更大的凝聚物，使溶液浊度增加。用分光光度计测定浊度，可反映,CIC,含量。不能进行抗原特异性免疫复合物的测定，故仅适用于免疫复合物的粗筛,材料,硼酸缓冲液,4.1,聚乙二醇,(PEG),溶液,微量加样器、试管等,分光光度计、普通冰箱,待检血清 不同,CIC,含量血清可由临床筛选获得，不宜冻融,操作步骤,样品稀释（,0.2ml,血清,+0.4ml,硼酸缓冲液）,测,A,495,nm,值,硼酸缓冲液调零,表,1 PEG,比浊法测,CIC,方法,测定管 对照管,稀释血清（,ml,）,0.4 0.4,4.1%PEG,（,ml,）,4.0,pH8.4,硼酸缓冲液（,ml,）,4.0,按,表,1,加样混匀,4,冰箱,lh,室温,10,15min,结果判断,待测血清浊度值,=,（测定管吸光度,-,对照管吸光度）,100,以大于正常人浊度值的均值加,2,个标准差为,CIC,阳性,大于或等于,8.3,为,CIC,阳性,注意事项,低密度脂蛋白可引起浊度增加，应空腹采血，高,球蛋白血症和标本反复冻融也可引起浊度增加。,2,PEG,只能沉淀较大分子，,4,PEG,能沉淀较小分子的循环免疫复合物，大于,5,PEG,，选择性沉淀循环免疫复合物特性消失；,当温度,4,时，循环免疫复合物沉淀最佳，室温每升高,1,，,A,值就下降,0.02,临床意义,不是疾病诊断的主要指标，但在发病机制研究，了解病情进展，判断治疗效果方面能提供有意义的帮助,对有蛋白尿、关节痛、血管炎、浆膜炎、紫癜症状且诊断不明确的病人，可考虑检测循环免疫复合物,思考题,试分析循环免疫复合物测定实验过程中有何因素将影响实验结果？,采取什么措施保证实验的准确性？,