常见微生物性食物中毒课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,常见微生物性食物中毒,1,前言,常见细菌性食物中毒,沙门氏菌属（,鼠伤寒 猪伤寒 肠炎,）、,副溶血性弧菌（,嗜盐菌,）、肉毒梭菌、葡萄球菌（,金黄色葡萄球菌,）、致泻性大肠埃希菌、产气荚膜梭菌、蜡样芽孢杆菌、志贺氏菌、单增李斯特菌、变形杆菌、椰毒假单孢菌酵米面亚种、其他致病性弧菌（河弧菌、创伤弧菌等）。,常见霉菌性食物中毒,霉变谷物（,黄曲霉：,黄曲霉毒,雪腐镰刀菌：,脱氧雪腐镰刀菌稀醇）、霉变甘蔗（,节菱孢属：,3-硝基丙酸）,2,一、沙门氏菌属食物中毒,致病原,潜伏期,临床特点,诊断参考,实验室检查,常见中毒食品,沙门,菌属,6-72h（一般12-36h）,恶心、呕吐、腹痛、腹泻，黄绿色水样便，便中有时带脓血和粘液，高热，大于38，重者有寒战、惊厥、抽搐、昏迷,食品、呕吐物或粪便中检出血清学型别相同的沙门菌,预增菌：,缓冲蛋白胨水（BPW）,增菌：,四硫磺酸钠煌绿(TTB)、亚硒酸盐胱氨酸(SC),分离特征：,亚硫酸铋（BS）琼脂,上菌落为黑色有金属光泽、棕褐色或灰色,菌落周围培养基可呈黑色或棕色;有些菌株形成灰绿色的菌落,周围培养基不变。,HE琼脂,上蓝绿色或蓝色,多数菌落中心黑色或几乎全黑色;有些菌株为黄色,中心黑色或几乎全黑色。,木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）琼脂,上菌落呈粉红色,带或不带黑色中心,有些菌株可呈现大的带光泽的黑色中心,或呈现全部黑色的菌落;有些菌株为黄色菌落,带或不带黑色中心。,三糖铁琼脂：,斜面产碱（K）底层产酸（A）产气+（-）硫化氢+（-）,血清学鉴定：,多价菌体抗原(O)鉴定，多价鞭毛抗原(H)鉴定,分型：,被A-F多价O 血清凝集者,依次用O4;O3;O10;O7;O8;O9;O2和O11因子血清做凝集试验。属于A-F各O 群的常见菌型,依次用H 因子血清检查第1相和第2相的H 抗原。用Vi因子血清检查，已知具有Vi抗原的菌型有:伤寒沙门氏菌,丙型副伤寒沙门氏菌,都柏林沙门氏菌。,肉、禽、蛋、鱼、奶类及其制品等,3,沙门氏菌检验程序,4,二、,副溶血性弧菌,食物中毒,致病原,潜伏期,临床特点,诊断参考,实验室检查,常见中毒食品,副溶血性弧菌（嗜盐菌）,8-12h,恶心、呕吐次数不多、腹痛，多在脐部，呈阵发性胀痛或绞痛，腹泻，无里急后重，水样或洗肉水样便，少数便中有粘液，可能发热38-40，重者脱水、虚脱、血压下降。病程2-3d,食品、容器、呕吐物、粪便中检出生物学特征或血清型一致的副溶血性弧菌,增菌：,1:10 样品匀液（3%NaCl碱性蛋白胨水）于36 1 培养8 h18 h。,分离：,典型的副溶血性弧菌在硫代硫酸盐-柠檬酸盐-胆盐-蔗糖（TCBS）琼脂上呈圆形、半透明、表面光滑的绿色菌落，用接种环轻触，有类似口香糖的质感，直径2 mm3 mm。,纯培养：,挑取3 个或以上可疑菌落，划线接种3%NaCl胰蛋白胨大豆琼脂平板。,初步鉴定：,氧化酶试验阳性，涂片镜检革兰氏阴性，呈棒状、弧状、卵圆状等多形态，无芽胞，有鞭毛。3%NaCl三糖铁琼脂中的反应为底层变黄不变黑，无气泡，斜面颜色不变或红色加深，有动力。嗜盐性试验无NaCl和10%NaCl的胰胨水中不生长或微弱生长，在6%NaCl和8%NaCl的胰胨水中生长旺盛。,确定鉴定：,3%NaCl甘露醇试验（+）、3%NaCl赖氨酸脱羧酶试验（+）、3%NaClMR-VP 培养基（-）；3%NaCl三糖铁琼脂隔夜培养物进行-半乳糖苷酶(ONPG)试验（-）。,选做项目:,血清学分型、神奈川试验（在我妻氏琼脂上测试是否存在特定溶血素。神奈川试验阳性结果与副溶血性弧菌分离株的致病性显著相关。阳性结果为菌落周围呈半透明环的 溶血。）,海产品、卤菜、咸菜等,5,副溶血性弧菌检验程序,6,三、,肉毒梭菌,食物中毒,致病原,潜伏期,临床特点,诊断参考,实验室检查,常见中毒食品,肉毒,梭菌,1h-7d,头晕、无力、视力模糊、复视、眼睑下垂、咀嚼无力、张口或伸舌困难、咽喉阻塞感、饮水发呛、吞咽困难、呼吸困难、头颈无力、垂头等。病死率较高,食品、血液、粪便中检出肉毒毒素，食品检出肉毒梭菌,样品制备：,液态5mL，固态与半固态25g+25mL(或50mL)明胶磷酸盐缓冲液。离心、胰酶处理制备毒素液。,1.肉毒毒素检测,分别取离心上清液和胰酶处理上清液腹腔注射小鼠3只,每只0.5mL,观察和记录小鼠48h内的中毒表现。典型肉毒毒素中毒症状多在24h内出现,通常在6h内发病和死亡,其主要表现为竖毛、四肢瘫软,呼吸困难,呈现风箱式呼吸、腰腹部凹陷、宛如峰腰,多因呼吸衰竭而死亡。若在24h后发病或死亡,应仔细观察小鼠症状,必要时浓缩上清液重复试验,以排除肉毒毒素中毒。若小鼠出现猝死(30min内)导致症状不明显时,应将毒素上清液进行适当稀释,重复试验。,确证试验：,上清液或(和)胰酶处理上清液的毒素试验阳性者,取相应试验液3份,每份0.5mL,其中第一份加等量多型混合肉毒毒素诊断血清,混匀,37孵育30min;第二份加等量明胶磷酸盐缓冲液,混匀后煮沸10min;第三份加等量明胶磷酸盐缓冲液,混匀。将三份混合液分别腹腔注射小鼠各两只,每只0.5mL,发酵豆、谷类制品（面酱、臭豆腐）、肉制品、低酸性罐头等,7,三、,肉毒梭菌,食物中毒,致病原,潜伏期,临床特点,诊断参考,实验室检查,常见中毒食品,肉毒,梭菌,1h-7d,头晕、无力、视力模糊、复视、眼睑下垂、咀嚼无力、张口或伸舌困难、咽喉阻塞感、饮水发呛、吞咽困难、呼吸困难、头颈无力、垂头等。病死率较高。,食品、血液、粪便中检出肉毒毒素，食品检出肉毒梭菌,观察96h内小鼠的中毒和死亡情况。,结果判定:,若注射第一份和第二份混合液的小鼠未死亡,而第三份混合液小鼠发病死亡,并出现肉毒毒素中毒的特有症状,则判定检测样品中,检出肉毒毒素。,2.肉毒梭菌检验,增菌培养与检出试验：,庖肉培养基4支和TPGY 肉汤管2支,隔水煮沸10min15min,排除溶解氧,迅速冷却,切勿摇动,在TPGY 肉汤管中缓慢加入胰酶液至液体石蜡液面下肉汤中,每支1 mL,制备成TPGYT。按要求进行培养。肉毒梭菌培养物为产气、肉汤浑浊(庖肉培养基中A 型和B型肉毒梭菌肉汤变黑)、消化或不消化肉粒、有异臭味。取增菌培养物阳性管的上清液进行毒素检出和确证试验，阳性结果可证明样品中有肉毒梭菌存在。,分离与纯化培养：,取增菌培养物和经乙醇处理的增菌液分别划线接种至卵黄琼脂平板,35 1 厌氧培养48h。肉毒梭菌菌落隆起或扁平、光滑或粗糙,易成蔓延生长,边缘不规则,在菌落周围形成乳色沉淀晕圈(E型较宽,A 型和B型较窄)，,发酵豆、谷类制品（面酱、臭豆腐）、肉制品、低酸性罐头等,8,三、,肉毒梭菌,食物中毒,致病原,潜伏期,临床特点,诊断参考,实验室检查,常见中毒食品,肉毒,梭菌,1h-7d,头晕、无力、视力模糊、复视、眼睑下垂、咀嚼无力、张口或伸舌困难、咽喉阻塞感、饮水发呛、吞咽困难、呼吸困难、头颈无力、垂头等。病死率较高。,食品、血液、粪便中检出肉毒毒素，食品检出肉毒梭菌,在斜视光下观察,菌落表面呈现珍珠样虹彩,这种光泽区可随蔓延生长扩散到不规则边缘区外的晕圈。菌株纯化培养,在分离培养平板上选择5个肉毒梭菌可疑菌落,分别接种卵黄琼脂平板,351,厌氧培养48h,按5.3.2.3观察菌落形态及其纯度。,鉴定试验：,染色镜检为革兰氏阳性粗大杆菌、芽胞卵圆形、大于菌体、位于次端,菌体呈网球拍状。,毒素基因检测（PCR检测）,阴性对照和空白对照均未出现条带,阳性对照出现预期大小的扩增条带，判定本次PCR检测成立;待测样品出现预期大小的扩增条带,判定为PCR结果阳性，,待测样品未出现预期大小的扩增条带,判定PCR结果为阴性。菌株产毒试验 将PCR阳性菌株或可疑肉毒梭菌菌株接种庖肉培养基或TPGYT 肉汤(用于E型肉毒梭菌),厌氧培养5d，进行毒素检测和(或)定型试验,毒素确证试验阳性者,判定为肉毒梭菌,根据定型试验结果判定肉毒梭菌型别。,3.结果报告：,（1）报告25g(mL)样品中检出或未检出肉毒毒素，（2）报告25g(mL)样品中检出某型肉毒毒素。（3）报告样品中检出或未检出肉毒梭菌或检出某型肉毒梭菌。,发酵豆、谷类制品（面酱、臭豆腐）、肉制品、低酸性罐头等,9,肉毒梭菌及肉毒毒素检验程序,10,四、葡萄球菌食物中毒,致病原,潜伏期,临床特点,诊断参考,实验室检查,常见中毒食品,葡萄,球菌,一般2-4h，不超过6h,突然恶心、反复剧烈呕吐、上腹痉挛性疼痛、腹泻呈水样便，一般不发热，常因剧烈呕吐导致失水和休克。病程1-3d,食品中检出葡萄球菌肠毒素，食品、呕吐物和粪便培养检出金黄色葡萄球菌,增菌：,金黄色葡萄球菌在7.5%氯化钠肉汤中呈混浊生长。,分离：,增菌后的培养物,分别划线接种于血平板36 1 18h4h，Baird-Parker平板361 24h48h。,初步鉴定：,Baird-Parker平板上呈圆形,表面光滑、凸起、湿润、菌落直径为2mm3mm,颜色呈灰黑色至黑色,有光泽,常有浅色(非白色)的边缘,周围绕以不透明圈(沉淀),其外常有一清晰带。接种针触及菌落时具有黄油样黏稠感。有时可见到不分解脂肪的菌株,除没有不透明圈和清晰带外,其他外观基本相同。在血平板上,形成菌落较大,圆形、光滑凸起、湿润、金黄色(有时为白色),菌落周围可见完全透明溶血圈。,确证鉴定:,革兰氏染色,阳性球菌,排列呈葡萄球状,无芽胞,无荚膜,直径约为0.5m1m。,血浆凝固酶试验:,5个可疑菌落(小于5个全选),分别接种到5mLBHI和营养琼脂小斜面,361培养18h24h。新鲜配制兔血浆0.5mL,放入小试管中,再加入BHI培养物0.2mL0.3mL,振荡摇匀,置361温箱或水浴箱内,每半小时观察一次,观察6h,如呈现凝固)或凝固体积大于原体积的一半,被判定为阳性结果。同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌株的肉汤培养物作为对照。,葡萄球菌肠毒素的检验(选做),奶、蛋及其制品、糕点、熟肉等,11,金黄色葡萄球菌定性检验程序,12,五、致泻性大肠埃希菌性食物中毒,致病原,潜伏期,临床特点,诊断参考,实验室检查,常见中毒食品,致泻性大肠埃希菌,6-72h,产肠毒素型ETEC：水样腹泻、腹痛、恶心、低热；肠道侵袭型EIEC：发热、剧烈腹痛、水样腹泻、粪便中有少量粘液和血，与痢疾相似；肠道致病型EPEC：发热、呕吐、腹泻，粪便中有大量粘液但无血，有类似感冒症状；肠道出血型EHEC：潜伏期长，3-10d，突发性腹部痉挛，类似阑尾炎的疼痛，水样便继而转为血性腹泻，可引起多器官损害，病死率高；肠聚集性粘附型EAEC：成年人中度腹泻，病程1-2d、婴幼儿为2周以上的持续性腹泻,食品、呕吐物和粪便检出血清型相同的致泻性大肠埃希菌,增菌：,1：10样品匀液（,营养肉汤,）于361 6h。取10L,接种于30mL,肠道菌增菌肉汤,管内,421 18h。,分离：,36 1 18h-24h 在,MAC琼脂,平板上,分解乳糖的典型菌落为,砖红色,至,桃红色,不分解乳糖的菌落为无色或淡粉色;在,EMB琼脂,平板上,分解乳糖的典型菌落为,中心紫黑色,带或不带金属光泽,不分解乳糖的菌落为无色或淡粉色。,生化试验：,TSI,斜面产酸或不产酸,底层产酸,靛基质阳性,H,2,S阴性和尿素酶阴性的培养物为大肠埃希氏菌。TSI斜面底层不产酸,或H,2,S、KCN、尿素有任一项为阳性的培养物,均非大肠埃希氏菌。大肠埃希氏菌为革兰氏阴性杆菌,氧化酶阴性。,PCR 确认试验：,取生化反应符合大肠埃希氏菌特征的菌落进行PCR确认试验。,熟肉制品、蛋及其制品、奶、奶酪、蔬菜、水果、饮料等,13,致泻大肠埃希氏菌检验程序,14,六、产气荚膜梭菌食物中毒,致病原,潜伏期,临床特点,诊断参考,实验室检查,常见中毒食品,产气荚膜梭菌,8-24h,腹痛和腹泻,食品